relatório de Bioquimica

Prévia do material em texto

DOSAGEM DE PROTEÍNAS PELO MÉTODO DO BIURETO
Materiais:
7 Tubos de Ensaio
3 Pipetas de 2 mL
1 Pipeta de 5 mL
1 Pró-pipete
1 Becker 50mL
6 Cubetas
Soluções:
Solução Padrão de Caseína (5mg/mL) em PBS pH 7,4.
Amostra de caseína de concentração desconhecida [?] em PBS pH 7,4.
Reagente do Biureto
PBS pH 7,4 (Tampão fosfato com salina em pH 7,4)
Equipamento:
• Espectrofotômetro
Método:
O procedimento da prática foi realizada de acordo com o que foi passado em laboratório, durante a explicação. Primeiramente, foram coletada uma alíquota de aproximadamente 7,0 ml e levado para ser pepitado na bancada do grupo. Após foram coletadas aproximadamente 10 ml do PBS em um becher, dessa vez, e novamente levado para a bancada do grupo.
Depois que soluções foram coletadas de acordo com o que foi pedido, foram transferida com auxílio de uma pipeta para os tubos de ensaios que foram devidamente numerados com o intuito de pedir o erro. Os tubos foram homogeneizados e colocados em temperatura ambiente durante 15 minutos cuidadosamente 
Por fim, após esse período, os mesmos foram transferidos para uma cubeta, numeradas, sendo que cada cubeta tinha que ter pelo menos mais da metade do seu copo espaço preenchido. As cubetas foram levadas pra o espectrofotômetro, para que fosse realizados as leituras de absorbância, que foram anotadas.
PROPRIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE PROTEÍNAS
Materiais:
12- Tubos de ensaio que caibam na centrífuga clínica !!!
2- Pipetas de 2 mL
3 -Pipetas de 5 mL
Pipeta de 10mL
Pró-pipetes
Banho maria (100oC)
Soluções:
15 mL de Solução de (NH4)2SO4 60% p/v em um becker
10mL de Solução de uréia 8M em um becker
50mL de Solução tampão fosfato (PBS) pH 7,4 em um becker
Amostras de proteínas: - 20mL de Ovoalbumina (clara de ovo diluída em PBS 1:25 v/v) em um becker.
 - 20 ml de Caseína (diluída em PBS 1 mg/mL) em um becker.
Equipamento:
Balança analítca
Método:
O procedimento da prática foi realizada de acordo com o que foi passado em laboratório, durante a explicação. Primeiramente, foram pipetadas as soluções de ovoalbumina e caseína, de acordo com que foi passado no roteiro, despejando os mesmos em tubos de ensaio numerados. Após, os tubos de ensaios foram submetidos aos seus ensaios específicos, sendo os tubos 1 e 2 ao efeito de temperatura; tubos 3 e 4 ao efeito de solventes orgânicos; tubos 5 e 6 ao efeito de altas concentrações salinas; tubos 7 e 8 ao efeito de ácidos fortes; e os tubos 9 e 10 ao efeito de agentes caotrópicos. 
Com isso, os tubos que sofreram alterações foram separadas e levados até uma balança analítica, onde foram tarados, de acordo com o sistema da balança e após, levados a centrífuga clínica, no qual foram centrifugados a 3000 RPM, durante 5 minutos.
Por fim, os tubos foram observados após a centrifugação e foram separadas os tubos no qual ocorreram precipitação. O sobrenadante desses tubos foram descartados cuidadosamente para que não houvesse ressuspensão. Foi adicionado 6 mL da solução tampão fosfato (PBS) aos precipitados, com auxílio do vortex, foram homegeinizados, procurando ressolubilizar o “pellet”.