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22/11/2016 1 Luciana Veiga Universidade Federal da Bahia - UFBA Instituto de Biologia Campus Ondina Salvador / BA BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR Curso: Medicina Veterinária • Alberts, B.; Bray, D.; Lewis, J.; Martin, ; Roberts, K.; Watson, J.D. Biologia Molecular da Célula, 4ª Ed. Artmed Editora, Porto Alegre, 2002. • Cox, M.M.; Doudna, J.A.; O´Donnell, M. (2012). Biologia Molecular: Princípios e Técnicas. Ed. Artmed914p. • David L.N; Cox, Michael.C. (2014). Princípios de Bioquímica de Lehninger, 6ª Ed, Artmed. • Voet, D.; Voet, J. (2006). Fundamentos de Bioquímica. 3ª. Ed. Porto Alegre, Artmed Editora, 1596p BIBLIOGRAFIA combinam-se formando biomoléculas: ex. carboidratos Carbono (C) Hidrogênio (H) Oxigênio (O) Fósforo (P) Nitrogênio (N) Ácidos Nucléicos Proteínas 1. O mundo pré-biótico - Conjunto de biomoléculas + membrana = CÉLULA Principal característica do Carbono:Tetravalente Ex.: Estradiol e testosterona C18H24O2 C19H24O2 Oparin & Haldane (1922) - A energia elétrica de descargas de relâmpagos ou a energia aquecida de vulcões causou a reação dos componentes da atmosfera primitiva (NH3, CH4, H2O etc), formando simples compostos orgânicos; Estes compostos dissolveram-se nos mares ancestrais e, ao longo de milênios, enriqueceram-se com uma grande variedade de substâncias orgânicas simples, formando a SOPA PRIMORDIAL. 22/11/2016 2 Stanley Miller & Harold Urey (1953): “A vida começou nos caldos moleculares de uma porção de água aquecida, onde a degradação de moléculas recém- formadas era mais lenta que sua formação espontânea”. - Lista parcial de produtos formados dentro de condições pré-bióticas. Produtos Ácidos carboxílicos: - Ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, cadeiras longas e ramificadas de ácidos graxos, ácido glicólico, ácido lático, ácido succínico. Ácidos nucléicos básicos: - Adenina, guanina, xantina, hipoxantina, citosina, uracila Aminoácidos: - Glicina, alanina, serina, treonina, valina, leucina, prolina, ácido aspártico, ácido glutâmico, ácido α – aminobutílico. - Características do sistema auto-catalítico ESTABILIDADE, REPLICAÇÃO E ARMAZENAR A INFORMAÇÃO GENÉTICA - Estaria longe de uma simples interação ao acaso com outras moléculas; - Auto-replicativos; - Competiria com outros sistemas dependentes do mesmo tipo de moléculas; - Se privado de sua dieta molecular, decairia para o equilíbrio químico e morreria. Que tipo de molécula possui tais propriedades? - Terra pré-biótica: agentes catalíticos na produção de mais moléculas da própria espécie 1. Polissacarídeos: - A ordem dos monômeros não tem efeito nas propriedades do polímero; - Sem qualquer informação genética; - Não se replica. 2. Proteínas: - Foi aventada a hipótese, dada a facilidade de se obter aminoácidos em abundância em condições pré- bióticas; - Não se replica. Problemas: • Como os RNAs, o DNA precisa de proteínas para auto-replicar; • DNA necessita do RNA (primers); • Mais resistente do que o RNA à decomposição por hidrólise. 3.1. DNA 3. Os polinucleotídeos são capazes de dirigir sua própria síntese RNAse P Protease RNAses A enzima perdia sua atividade catalítica RNAse P é constituída de RNA + proteína Dr. Sidney Altman: E. coli Isolou-se precursores de RNAt e purificou a enzima RNAse P. RNAse P (enzima fóssil): atua no processamento de RNAt. 3.2. RNA 22/11/2016 3 1977: Os introns eram eliminadas pelo splicing. - Gene ribossomal: o processamento ocorria no transcrito primário de RNA na ausência de proteínas: - RNAr, Guanina, Mg e GTP. - 1981: o RNAr do protozoário é autocatalítico - Ribozima Thomas Cech (1978): Tetrahymena sp. The Nobel Prize in Chemistry 1989 The Royal Swedish Academy of Sciences has awarded this year's Nobel Prize in Chemistry jointly to Sidney Altman and Thomas R. Cech for their discovery of catalytic properties of RNA. Sidney Altman Yale University New Haven, CT, USA Thomas R. Cech University of Colorado at Boulder, USA - Evidências do RNA como primeira biomolécula: Muitas enzimas modernas, embora constituídas de proteínas, contam com pequenas moléculas de RNA (ex.: snRNA); O RNA, ao contrário do DNA e proteínas, pode copiar a si mesmo; A timina (DNA) é originária da uracila (RNA); O DNA necessita de RNA pra se replicar (primers); Na célula, funções básicas são dependentes de RNA: - RNA pol. - Ribossomo - RNAt - Age como catalisador: auto-splicing - Regulação gênica: RNAi, micro RNAs etc RNA - Formação da primeira “célula”: acaso - Como surge o DNA? - União acidental entre proteínas e RNA, iniciando a tradução. Pontos: Dupla hélice: maior estabilidade que o RNA, replicação simples com mecanismo de reparo (fidelidade); Informação hereditária está contida no DNA e não no RNA (vírus); RNA e DNA atuam de forma colaborativa; Pequenas diferenças químicas ajustaram os dois tipos de molécula para funções distintas; Repositório permanente de informação genética. Criação da sopa prébiótica, incluindo nucleotídeos e componentes da atmosfera primitiva da terra Produção de moléculas curtas de RNA de sequência aleatória Replicação seletiva dos segmentos de RNA catalítico auto- replicante Síntese de peptídeos específicos catalisados pelo RNA Incremento do papel dos peptídeos na replicação do RNA; coevolução RNA e proteínas Tradução primitiva do sistema desenvolvido, com RNA genômico e RNA-proteínas catalíticos RNA genômico começa a ser copiado em DNA DNA genômico, traduzido no complexo RNA+proteína (ribossomos com proteínas catalíticas) 22/11/2016 4 - Célula: unidade estrutural de todos os seres vivos. - Todos os organismos são compostos de células; - Todas as células são originadas a partir de outras pré- existentes; - Formação da célula: compartimentalização de biomoléculas • Proteção contra efeitos ambientais adversos; • Manutenção das concentrações locais de componentes elevados; • Evitar difusão: rapidez nas reações; • Maior eficiência de polimerização. • Mudança da composição do meio interno em relação ao externo. 2. A Teoria Celular (Schleinden e Schwann-Sec.XIX) 3. A evolução da célula eucariótica - Biólogos: suspeitam que mt e cl foram adotados como endossimbiontes; - Fagocitose: bactérias mortas / fragmentadas: - Escapam da destruição /aleijam / matam os captores; - Sobrevivência do captor / vítima: Tolerância / Dependência. - Lynn Margulis (1981) - Symbiosis in Cell Evolution. Um parente próximo das cianobactérias que vive numa relação simbiótica permanente no interior de outra célula (Cyanophora paradoxa – Protista fotoautótrofico). - Mt e cl: organelas derivadas da interação entre um organismo fagocítico ancestral e uma bactéria aeróbica e outra fotossintetizante; - A atmosfera começou a apresentar uma concentração substancial de oxigênio e surgem os organismos aeróbios; - Endocitose dos cl. deve ter ocorrido depois que o das mt e deve ter ocorrido separadamente pelo menos três vezes, o que explica a grande variedade de pigmentos e propriedades existentes nos diversos cloroplastos de plantas e algas; - A bactéria endocitada receberia nutrientes da célula que a englobou e ao mesmo tempo daria energia para esta, num exemplo de relação simbiótica. 4. A Teoria da Endossimbiose - Primeiras cianobactérias: fotossíntese anaeróbica(extração de H da água liberando oxigênio molecular); - Liberação de oxigênio: eliminação de “organismos” (tóxico); - Seleção e evolução: adaptação de organismos capazes de “lidar” com o oxigênio livre; 22/11/2016 5 - A Teoria da Endossimbiose 5. Formação do núcleo e retículo endoplasmático Representação esquemática da evolução desde a célula procariótica à célula eucariótica. A: célula procariótica nua; B e C: estádios progressivos de hipertrofia da membrana plasmática e de configuração do núcleo; D: núcleo e retículo constituídos. - Suporte para a Teoria Endossimbiótica: 1. Mesmo tamanho. 2. Dupla membrana; 3. Composição lipídica; 4. DNA em forma circular; 5. Divisão celular. 6. Organismo primitivo - Semelhante aos procariotos modernos; - Capaz de se propagar em uma extensão de habitats; - Capaz de modificar a atmosfera e sofrer desenvolvimento evolutivo. Evolução Seleção natural Se a mutação aumenta as chances de sobrevivência, há um aumento na probabilidade de que esta seja passada à próxima geração. Mutação • Monera: bactérias • Protistas: unicelulares (algas, levedura, Euglena, ameba) • Fungos • Animais • Vegetais 22/11/2016 6 7. Diferenças entre Procarioto X Eucarioto Milhões de moléculas representando 3.000 a 6.000 compostos diferentes. 100 mil moléculas diferentes. Componente Bactéria - E. coli Célula de mamífero Água 70 % 70 % Íons Inorgânicos (Na, K, Mg, Ca, Cl, etc.) 1 % 1 % Pequenos Metabólitos 3 % 3 % Proteínas 15 % 18 % RNA 6 % 1,1 % DNA 1 % 0,25 % Fosfolipídios 2 % 3 % Outros Lipídios --- 2 % Polissacarídeos 2 % 2 % Volume total da Célula 2 x 10-12cm3 4 x 10-9cm3 - Continuação 1. ARQUEOBACTÉRIAS - Halófilas: ambientes salinos (Mar Morto); - Termoacidófilas: fontes termais ácidas (TºC 60º a 80º C); - Sulfobactérias: oxidam o enxofre; - Metanogênicas: pântanos/tubo digestivo de insetos como cupins, trato digestivo de animais herbívoros. Produzem o gás metano por redução do CO2 a CH4. São estritamente anaeróbicas. 2. EUBACTÉRIAS - Grande diversidade metabólica; - Diferentes formas de células e tipos de colônias celulares; - Habitam o solo, a superfície das águas e os tecidos de outros organismos vivos ou em decomposição; - Mais comuns e melhor estudadas são as da espécie Escherichia coli. - Cianobactérias: membranas internas contendo pigmentos fotossintetizantes. 8. Procariotos • Bactérias • Protistas: unicelulares (algas, levedura, Euglena, ameba) • Fungos • Animais • Vegetais - Tamanhos - Formas Cocos Bacilos Espirilos 8.1. Cápsula e pilli • Cápsula: - Composta de polissacarídeos (proteção) - Glicocalix: ausente - Pilli - Estrutura protéica - Ligação em outra bactéria para transferir material genético 22/11/2016 7 8.2. Membrana plasmática e externa - Limita a célula, regulando o tráfego de materiais dentro e fora da célula e separando-a do ambiente; - Algumas bactérias possuem um sistema interno de membranas: fotossíntese. Bactérias coradas pelo método de Gram Gram + Gram- 8.3. Bactérias Gram + - Staphylococcus aureus ● Bovinos: - Mastite estafilocócica, impetigo do úbere ● Ovinos: - Piemia pelo carrapato (cordeiro) - Foliculite benigna (cordeiro) - Dermatite ● Suínos - Botriomicose da glândula mamária - Impetigo na glândula mamária ● Equinos: - Botriomicose do cordão espermático - Mastite 8.4. Bactérias Gram - -Pseudomonas aeruginosa ● Bovinos: - Mastite, metrite (inflamação do endométrio), pneumonia, dermatite, enterite (bezerros) ● Ovinos: - Mastite, podridão da lã, pneumonia, otite média ● Suínos - Infecções respiratórias, otite. ● Equinos: - Infecções no trato genital, penumonia, ceratite ulcerativa ● Cães e gatos: - Otite externa, cistite, peneumonia, ceratite ulcerativa 8.5. Locomoção - Flagelina: ATP 8.6. Material genético - Nucleóide: material genético; - Ribossomos; -Algumas possuem plasmídeos. 22/11/2016 8 - Varia em tamanho: - 750 kb em Mycoplasma - 5.000 kb em E. coli - 10.000 kb em Streptomyces - 1.000 a 10.000 genes - DNA circular - Enovelado, compactado - Nature 413, 39 - 44 (2001) • MreB: semelhante à actina F/ forma, crescimento e segregação de plasmídeos; - Ex. mutantes MreB de E. coli e para Bacillus subtilis perdem a forma cilíndrica; • Fts Z: semelhante à tubulina 8.7. Citoesqueleto 9. Modificações genéticas nas bactérias * Conjugação • Muito importante em Gram negativos • Plasmídeos – Pequenas porções de DNA de dupla fita, circulares e autoreplicantes – Carregam fatores de virulência ou genes de resistência – Podem intermediar transferência genética entre bactérias – Em Gram negativos > plasmídeos conjugativos • Genes que codificam a produção de pilli e enzimas para conjugação – Adesão de pilli > transferência de uma fita linearizada > formação da fita complementar na célula receptora > circularização – A célula receptora replica > duas filhas contendo o plasmídeo • Integração do plasmídeo ao cromossomo (Episomos) * Transformação: - Captação de DNA livre por uma bactéria em estado fisiológico apropriado (estado de competência) - Competência: alterações celulares que favorecem a captação de DNA livre · Natural: - Células competentes durante todo o crescimento celular - Apenas algumas espécies bacterianas apresentam competência naturalmente (ex.Neisseria gonorrhoeae e Haemophilus influenzae) · Artificial: - Induzida no laboratório A troca é completada A proteína RecA promove troca genética entre o fragmento de DNA da bactéria doadora e o DNA da bactéria receptora Um fragmento de DNA da bactéria morta liga-se a proteínas específicas na parede celular de uma bactéria receptora, viva e competente. A bactéria doadora morre e é degradada 22/11/2016 9 * Transdução: - É a transferência de DNA entre uma célula doadora para uma receptora dentro de um vírus que infecta bactéria (Bacteriófago ou Fago ).
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