Aula - eletroforese

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ELETROFORESE – SDS PAGE 
 Técnica de separação de moléculas de acordo com o peso 
molecular (tamanho) que envolve a migração de partículas 
em um determinado gel durante a aplicação de uma 
diferença de potencial. 
ELETROFORESE EM GEL 
 Preparação do tecido 
 
 
 Preparação da amostra 
 
 
 Eletroforese em gel de poliacrilamida 
SEQUÊNCIA EXPERIMENTAL 
“Homogeneização” Homogenato 
Adição 
 
de SDS 
+ 
_ 
 Extração do tecido e congelamento rápido 
ELETROFORESE EM GEL 
PREPARAÇÃO DO TECIDO 
Extração e 
congelamento 
 Homogeneização do tecido em tampão para extração 
 Centrifugação para remoção do material insolúvel 
 Dosagem de proteína 
Homogeneização 
Manual 
Elétrica 
Centrifugação 
Dosagem de 
proteína 
ELETROFORESE EM GEL 
 Adição de detergente dodecil sulfato de sódio (SDS- sodium dodecyl 
sulfate) 
 SDS se liga à proteína deixando-a com carga negativa 
PREPARAÇÃO DA AMOSTRA 
Adição 
de SDS 
 Aquecimento da amostra (95°C) – desnaturação das proteínas 
Aquecimento 
- 
- 
- - - - - - 
- 
- - - 
- 
+ 
_ 
MHCIIx 
 
MHCIIa 
 
MHCI 
M 1 
ELETROFORESE EM GEL 
 Gel de poliacrilamida: mistura de dois polímeros formando uma 
“rede”. Diferentes relações entre as concentrações dessa 
moléculas permitem a criação de diferentes gradientes de 
separação. 
2 3 
ELETROFORESE EM GEL 
• Azul de Comassie (Coomassie Brilliant Blue) : substância azulada 
utilizada como corante de proteínas em técnicas de quantificação 
celular. A partir da intensidade de cor gerada, é possível 
estabelecer uma relação da intensidade da cor (absorbância) e 
quantidade de proteínas. 
 
M 1 2 3 1 2 3 
ELETROFORESE EM GEL 
ELETROFORESE EM GEL 
ELETROFORESE EM GEL 
Baseado na figura abaixo, identifique os diferentes 
tipos musculares. Explique. 
MHCIIa 
MHCIId 
MHCIIb 
MHCIβ 
Plantar EDL Sóleo