Preparação meio cultura

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Classificação, composição química e 
preparação de meios de cultura.
Definição 
 Material nutriente preparado no
laboratório para crescimento de
microorganismo.
Agar nutriente Caldo nutriente
Agar inclinado
1- Fase lag: adaptação metabólica ao novo ambiente;
2- Fase exponencial ou logarítmica: o número de
células da população dobra a cada geração.
3- Fase estacionária: crescimento diminui
significativamente devido às condições limitantes do
meio. Taxa de reprodução é muito próxima da taxa de
morte.
4- Fase de declínio: declínio exponencial do número
de células; taxa de morte torna-se maior que a taxa
de divisão.
Bactérias – Curva de Crescimento
O metabolismo das bactérias e seu crescimento
(reprodução) é influenciado por fatores físicos e
químicos do meio ambiente, como:
 Umidade
 Quantidade de nutrientes, e quais nutrientes
 Temperatura:
 pH,
 Oxigênio
 Pressão
 Luz
Condiçoes físicas para crescimento.
Temperatura
 Psicotróficos: 0 à 7ºC
 Psicrófilos: 0 à 20ºC.
 Mesófilos: 20 à 45°C.
 Termófilos: 45 à 90°C.
A maioria são mesófilas. Temperatura ótima: 36,5
a 37°C em estufa bacteriológica.
Os 1ºs meios de cultura utilizados eram líquidos e
naturais caldo de pimenta, urina, sangue e leite.
 O meio mais utilizado para bactérias
heterotróficas é o caldo nutriente (CN) ou o ágar
nutriente (AN).
 No preparo do meio de cultura deve-se conhecer
as exigências nutricionais do organismo.
MEIOS DE CULTURA
São componentes essenciais do meio de 
cultura:
– Fonte de energia: compostos químicos como enxofre e
amônia, ou luz para os fotossintetizantes).
– Fonte de carbono: compostos orgânicos (substâncias que
contém C,H,O,N, P), e CO2 para os fotossintetizantes.
– Fonte de nitrogênio: proteínas, aminoácidos, nitrato,
amônio, N2.
– Fonte de crescimento: vitaminas
– Fonte de minerais: P, K, S, Ca, Fe, Mg, Mn, Zn, Cu, etc
– Água
Bactérias – Fatores de Crescimento
Oxigênio
• Aeróbios restritos (ex. Mycobacterium), necessitam da
presença de oxigénio para crescer .
• Microaerófilos (ex. Helicobacter pylori) necessitam de oxigênio
como os aeróbios, mas só conseguem crescer com
concentrações de oxigénio menores do que as que existem na
atmosfera (< 21%).
• Aeróbios ou anaeróbios facultativos (ex. Escherichia coli,
Saccharomyces cerevisiae): • São aqueles que crescem em
presença ou em ausência de oxigênio. No entanto, crescem
melhor em presença do que em ausência de oxigênio, não sendo
dependentes do oxigênio atmosférico
.
• Anaeróbios estritos (ex. Clostridium botulinum), são
aqueles que podem ser “intoxicados” pelo oxigênio, que
não crescem na atmosfera e não usam o oxigênio.
A presença de oxigênio atmosférico leva à
formação de metabolitos tóxicos como o peróxido de
hidrogênio, por conseguinte pequenas quantidades de
oxigênio atmosférico são letais para estes
microrganismos.
QUANTO À ORIGEM:
• Naturais => prontos na natureza (leite, sangue,
caldo de frutas, de cana, etc);
• Artificiais => feitos em laboratório (ex. Ágar
nutriente)
• Quanto à composição:
• Complexos => sem composição química definida
(contém extrato de carne, leveduras, sangue, ovos,
etc)
• Sintéticos => com composição química definida.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
QUANTO AO ESTADO FÍSICO:
• Sólidos => prontos na natureza já em estado sólido ou foram
adicionados de solidificante como o ágar , gelatina ou sílica-gel.
• O ágar-ágar é o solidificante mais usado em microbiologia
polissacarídeo extraído de uma alga marinha (Gelidium) muito
usado devido a suas características:
Semi-sólidos => consistência intermediária (ágar a
0,5%), usado para microaerófilos.
Líquidos => na forma de caldo, crescimento de
bactérias pode ser avaliado pela turvação (cor) do
meio. Preparo em tubo de ensaio.
Ex. Caldo nutriente
QUANTO À FINALIDADE:
Meios gerais ou básicos => permitem o crescimento de um
grande número de espécies bacterianas dentro de um grupo. Ex
ágar nutriente para bactérias.
Meios enriquecidos => adicionados de misturas complexas e
naturais (leite, sangue, tecido animal/vegetal) que permite o
crescimento de organismos mais exigentes. Ex. Ágar sangue
para cultivo e isolamento de Neisseria, Streptococcus e
Staphylococcus.
Meios seletivos /diferenciais => a possuem composição ou
condições que seleciona o tipo de organismo que vai crescer
ali. Usados para isolamento e identificação.
Ex. Meio Tarrozi para anaeróbios, meio SS para Salmonella,
Mac Conkey para bactérias entéricas.
• Meios de enriquecimento => favorece o crescimento de um
grupo em detrimento do outro. Adição de enxofre em amostras
de solo, p. ex., favorece o crescimento de Thiobacillus
(oxidação de metais).
Caldo selenito- meio de enriquecimento
Peptona Nutriente
Lactose Fonte de carbono
Selenito de sódio Seletor
Fosfato de sódio Tampão
Água
Exemplo: Identificação das Salmonelas Caldo Selenito - meio
de enriquecimento para o isolamento de Salmonella spp a
partir de materiais clínicos, especialmente fezes.
Exemplo: Agar MacConkey – Considerado seletivo
e diferencial.
Composição – Sais biliares e cristal violeta-
Inibidores do crescimento de bactérias gram-
positivas – Seletivo.
 Lactose – Permite diferenciar bactérias
fermentadoras de lactose ( colônias vermelhas ou
rosas) das não fermentadoras( colônias incolores)
Meio Quimicamente Definido
EX:
Componentes Quantidades
Glicose 5,0g
Fosfato de amônia monobásico 1,0g
Cloreto de sódio 5,0g
Sulfato de Magnésio 0,2g
Fosfato de potássio dibásico 1.0g
Água 1 litro
Meio Complexo
Ex: Agar nutriente
Componentes Quantidades
Peptona (Proteína parcialmente digerida) 5,0G
Extrato de carne 3,0G 
Cloreto de sódio 8,0G
Agar 15,0G
Água 1 Litro 
MEIOS DE CULTURA
PREPARAÇÃO
- De acordo com o fabricante.
-Técnica de preparação vem
especificada no rótulo dos frascos.
- Pesar e hidratar o meio conforme as
instruções do fabricante.
MEIOS DE CULTURA
PREPARAÇÃO
MEIOS DE CULTURA
MÉTODOS DE ESTERILIZAÇÃO
1 - Autoclave (calor úmido)-121ºC por
15 a 20 minutos.
- Vapor fluente.
MEIOS DE CULTURA
MÉTODOS DE ESTERILIZAÇÃO
2 – FILTRAGEM
- Produtos termo sensíveis
- Membranas de acetato de celulose
(0,22 μm).
RECIPIENTES PARA OS MEIOS DE CULTURA.
- Placas de petri, tubos de ensaio,
garrafas, frascos, etc...