Trabalho Microbiologia Coloração de Gram

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FESCG - FACULDADE ESTÁCIO DE SÁ DE CAMPO GRANDE - MS
ANA LUÍZA DE MEDEIROS
WELITON DA SILVA
RELATÓRIO DA AULA 
Campo Grande – MS
MARÇO 2015
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ANA LUÍZA DE MEDEIROS
WELITON DA SILVA
RELATÓRIO DE BIOQUÍMICA
Relatório apresentado como requisito para avaliação da disciplina de Microbiologia do 3º semestre do curso de farmácia da FESCG. 
sob a orientação do Professor: 
 Paulo Ricardo Moraes.
 
Campo Grande – MS
MARÇO - 2015�
sumário
1 INTRODUÇÃO........................................................................................................03
2 PROCEDIMENTOS................................................................................................04
3 RESULTADOS ...................................................................................................................05 
4 REFERÊNCIA.........................................................................................................06
1 INTRODUÇÃO
A coloração de Gram foi desenvolvida em 1884, pelo bacteriologista dinamarquês Hans Christian Gram. Ela é um dos procedimentos de coloração mais úteis, pois classifica as bactérias em dois grandes grupos: gram-positivas e gram-negativas. Os microrganismos diferem química e fisicamente entre si, reagindo de modo diferente às operações de coloração. Este é o princípio básico da coloração diferencial. Então, designa-se coloração diferencial o método que permite 2 distinguir tipos de bactérias. A coloração de Gram é muito utilizada em bacteriologia permitindo a distinção entre bactérias gram positivas e gram negativas. A diferença entre os 2 tipos de células relaciona-se com a estrutura da parede celular das bactérias. Assim a parede celular de bactérias ditas gram (+) é formada por uma camada espessa de peptidoglicano, enquanto que a parede celular de bactérias gram (-) é formada por uma camada fina de peptidoglicano, rodeada por uma camada externa de lipopolissacarideo e proteína. 
As bactérias estão amplamente distribuídas na natureza – solo, água, ar, poeira, plantas, etc.
Podem se diferenciar quanto Tamanho, forma e arranjo.
Quanto a forma:
Quanto a forma:
Coco – de forma esférica ou se esférica (do género Coccus)
Bacilo – em forma de bastonete (do género Bacilos)
Vibrião – em forma de vírgula (do género Vibrio)
Espirilo – de forma espiral/ondulada (do género Spirillum)
Espiroqueta - em forma acentuada de espiral.
Quanto ao grau de agregação (formação de colônias):
Quanto ao grau de agregação (formação de colônias):
Apenas os Bacilos e os cocos formam colônias.
Diplococo - de forma esférica ou se esférica e agrupada aos pares (do género Diplococcus)
Estreptococos - assemelham-se a um "colar de cocos"
Estafilococos - uma forma desorganizada de agrupamento
Sarcina - de forma cúbica, formado por 4 ou 8 cocos simetricamente postos. 
2 PROCEDIMENTO
Materiais: 
01- Lâmina.
01- Bico de Bunsen.
01- Alça de semeadura.
01- Placa de Petri (complexo de bactérias).
- Cristal violeta. 
- Lugol.
- Água corrente.
- Álcool – acetona.
- Fucsina.
Procedimentos antes da aplicação e coloração de Gram.
1 - Em uma lâmina identifique seu nome.
2 - Acione a chama do bico de Bunsen.
3 - Escolha uma alça de semeadura e deixe flambar em um bico de Bunsen.
4 - Leve a alça de semeadura dentro de um béquer com água para esfriar.
5 - Com a alça de semeadura retire alguma gotas e coloque na lâmina.
6 - Volte a flambar a alça de semeadura e esfria-la no béquer.
7 - Abra Placa de Petri, onde contém o complexo de bactérias (este procedimento deve ser realizado atrás do bico de Bunsen).
8 - Raspe com a ponta da alça de semeadura.
9 – Coloque o material retirado na lâmina juntamente com as gotas de água.
10 – Com movimento circulares passe em cima da água e do material retirado.
11 – Com muito cuidado lasse a lâmina sobre o bico de Bunsen até secar o liquido.
12 – Flambe a ponta da alça de semeadura, mergulhe na água do béquer e guarde-a.
Após este procedimento aguarde um período e faça o procedimento de coloração de Gram.
Aplicação da coloração de Gram.
 
1 – Cobrir a lâmina com cristal violeta por 01 minuto.
2 - Cobrir a lâmina com Lugol por 01 minuto.
3 – Lavar com água corrente.
4 – Deslocar a lâmina com álcool-acetona – tempo delicado.
5 – Lavar com água corrente.
6 – Cobrir a lâmina com fucsina por 30 segundos.
8 – Lavar com água corrente.
9 – Secar – microscopia.
Feito estes procedimentos deixaremos a lâmina por praticamente uma semana para as bactérias se multiplicarem e formarem colônias e veremos o resultado por microscopia.
3 RESULTADOS
Devido a exposição e contato das bactérias com as substâncias: cristal violeta, Lugol água, álcool-cetona e fucsina, vieram a tomar cores diferentes. Sendo possível saber se seria o gram (+) sendo da coloração Azul ou gram (-) sendo coloração vermelho.
Ao retirarmos a lâmina do suporte foi inserido, aplique uma gota de óleo de imersão na lâmina e levamos ao microscópio, onde não foi possível visualizarmos a bactéria e sua coloração.
Segue abaixo uma possível análise sobre a coloração.
 
As substâncias inseridas nas bactérias têm ações diferentes e fazem tal mudança, segue a reação de cada uma delas.
- Cristal violeta: atravessa a membrana e entra na bactéria.
- Lugol (iodo): entra na bactéria e forma uma molécula grande.
- Álcool-cetona: faz com que os poros fecham sendo positivo ou remove a membrana e atravessa o pepitideoglicano e remove tudo e fica sem cor.
- Fucsina: não entra por que esta fechada se for positivo ou entra e faz a coloração vermelha.
São as diferenças da estrutura da parede bacteriana, principalmente com relação à espessura da camada de peptidoglicano, que é responsável pelo diferente comportamento das bactérias diante da coloração de Gram.
No gram (+) há cerca de 50% de pepitideoglicano, já o gram (-) contém 10% de pepitideoglicano.
4 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 Disponível em: http://www.infoescola.com/bioquimica/coloracao-de-gram/
Acesso em: 11/03/2015;
Disponível em: http://www.ebah.com.br/content/ABAAAAp_AAA/processo-coloracao-gram
Acesso em: 11/03/2015.
Disponível em:http://www.dbm.ufpb.br/microbio/Download/Colora%E7%E3o%20de%20Gram.pdf
Acesso em: 12/3/2014.