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DOCENTE: Dra. Ana Patrícia DICENTES: Anayle Brígida, Francineth Silva, Ana Paula Oliveira, Suellen Miranda, Thainá Martins. Turma: GI Data: 23/11/17 RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS – CITOLOGIA E HEMBRIOLOGIA PRÁTICA 1 MANUSEIO DO MICROSCÓPIO O Microscópio óptico serve para ampliar um objeto e funciona como um conjunto de lentes oculares e suas objetivas permitindo uma melhor visibilidade. A PARTE MECÂNICA vai do 1 ao 11 compreende os mecanismos de suporte e de focalização, são: • Liga/desliga • Controle de iluminação - Controla a iluminação • Pé ou base - apoio a todos os componentes do microscópio • Braço ou coluna - Fixo a base, serve de suporte as lentes e à platina • Canhão ou tubo – Da suporte as oculares e ao revolver • Revolver ou tambor -Da suporte as objetivas e possibilita mudar girando o eixo. • Mesa ou platina - É o local onde se fixa a lâmina a ser observada. • Pinça – Serve para fixar a lamina na base • Charriot – É uma peça ligada à platina, que possibilita mover a lâmina, permitindo a melhor centralização da mesma. • Parafuso macrométrico - Permite movimentos verticais da grande amplitude da platina. • Parafuso micrométrico - Permite movimentos verticais lentos de pequena amplitude da platina para focagem precisa da imagem. PARTE ÓPTICA – Amplia as imagens, sua capacidade de aplicação é normalmente de até 1000x. • Fonte de luz ou espelho – O espelho reflete a luz que recebe da fonte luminosa para a platina, a face plana serve para refletir luz natural e a face côncava para refletir luz artificial. • Condensador ou diafragma – Regula a quantidade de luz que atinge o campo de visão do microscópio. • Objetivas – Conjunto de lentes fixas no revolver, que girando permite alterar à ampliação necessária. • Ocular – Amplia a imagem real fornecida pela objetiva, aumenta até 10x. Ampliação da lente ocular e das objetivas é variável. O poder de ampliação do sistema óptico é o produto dos fatores da objetiva e da ocular: Objetivas Ocular Ampliação Total 04x 10x 40x 10x 10x 100x 40x 10x 400x 100x (sempre ser utilizado com óleo de imersão) 10x 1000x PRÁTICA 2 ANÁLISE DE UM FIO CABELO MATERIAL UTILIZADO: • Microscópio óptico; • Lâminas e lamínulas; • Fios de cabelos (tons escuros); • Água • Óleo de imersão PROCEDIMENTO: • Em uma lâmina foi colocado um fio de cabelo e uma gota de água sobre esta amostra. Em seguida, a lamínula foi posicionada sobre a lâmina. • O material foi colocado sobre a platina e fixado com a pinça. • O condensador foi ajustado para encontrar uma iluminação adequada na visualização. • O “charriot” foi ajustado para centralizar a mesa para preparação; • Posicionou-se o revolver com a objetiva de menor ampliação. • A observação iniciou pela lente ocular e objetiva de 4x, onde houve a elevação da platina e rotação do parafuso macrométrico, até alcançar a imagem focalizada. • À medida que o material era focalizado, mudava-se a objetiva para valores crescentes até alcançar o valor de 40x. Sendo que conforme a necessidade e a mudança da lente objetiva utilizam-se o parafuso micrométrico. • Com o aumento do valor da lente objetiva, observou-se um aumento da imagem. Quando se perdia o foco da imagem, era necessário reiniciar para a primeira lente objetiva (4x). • Após encontrar a imagem na lente de 40x, o microscópio foi preparado para a lente de maior valor (ampliação de 100x). O resolver foi ajustado para posicionar as lentes objetivas de forma a facilitar a colocação de uma gota de óleo de imersão pela parte de trás. • Ao término da aula, a turma foi orientada a seguir as normas de organização, ou seja, girar o revolver para deixar na lente objetiva de menor valor, abaixar a mesa, retirar a lâmina e desligar o microscópio. PRÁTICA 3 ANÁLISE DAS CÉLULAS DA MUCOSA BUCAL MATERIAL UTILIZADO: • Microscópio óptico; • Lâminas e lamínula; • Luva para o manuseio; • Papel toalha; • Abaixador de língua; • 1 Pisseta; • Óleo de imersão • Giemsa. PROCEDIMENTO: • Colocou-se a luva para iniciar o procedimento; • Raspou-se levemente a parte interna da mucosa em um sentido só com movimentos repetitivos com o auxílio do abaixador de língua; • Com o procedimento de raspagem, colocou-se o material na lâmina fazendo um esfregaço; • A lamina foi posicionada sobre a platina e foi possível observar o contraste das fases, a borda da membrana e o núcleo estavam mais claros. • Em seguida recolhemos a lamina e levamos para corar • Sobre o material colhido colocou-se uma gota de Giemza e deixou agir por 3 minutos, depois lavamos com álcool a 70% para retirar o corante azul, foi tirado e excesso de corante da lamina com o papel toalha e colocamos a lamínula. • Posicionou a amostra sobre a platina prendendo e fixando com auxílio da pinça. • Ajustou-se a fonte de luz, charriot e platina para iniciar o foco da imagem, sendo utilizada a lente de ampliação 4x. Nesta objetiva, foram visualizados somente pequenos pontos na lâmina. • Que o núcleo estava bem definido, o citoplasma estava mais clarinho e não estava marcada a membrana, corou mais o núcleo do citoplasma porque ele tem afinidade por ácido. • Concluindo que o corante é básico. PRÁTICA 4 ANÁLISE DA SECREÇÃO VAGINAL E URINA MATERIAL UTILIZADO: Microscópio óptico Lâmina Secreção vaginal PROCEDIMENTO: A lâmina já estava preparada com secreção vaginal. O material foi colocado sobre a platina e fixado com a pinça. Ajustou- se o charriot e a platina para focar a imagem. Utilizou- se primeiro a lente de ampliação 4x, em seguida utilizamos a de 10x e depois à de 40×. PRÁTICA 5 ANÁLISE DA EXTRAÇÃO DO DNA MATERIAL UTILIZADO: • Água normal • Sal NHCl • Detergente incolor (lavar louça) • Álcool • Backer de vidro • Bastão de vidro • Lenço de papel PROCEDIMENTO: • O Processo utilizado a princípio foi misturar 01 colher de sopa de sal com um copo com água e o colega colocar na boca por alguns minutos bochechando o mesmo, após o tempo determinado de 1 minuto e meio aproximadamente este bochecho foi despejado diretamente no backer de vidro • Foi adicionado no backer após o bochecho o detergente de sabão neutro • Ao misturar água com sal (bochecho) mais o detergente foi utilizado o bastão de vidro para mexer a solução no centro do backer não permitindo bater no fundo e nas laterais do backer para não quebrar as moléculas, ficando consistente e sem espuma. • Foi acrescentado 25ml do bochecho no backer, utilizamos 2x do bochecho para a medida de álcool dentro do backer resultando no total de 75ml de álcool a 54% e mais 03 gotas do corante chamado de (anilina/corante de fazer bolo) • Ao acrescentar os produtos dentro do backer seguimos as orientações que o backer necessitaria estar inclinado para não danificar o DNA • Quanto maior o teor alcoólico mais rápido é a reação • Aguardamos alguns minutos o resultado do experimento • Podemos observar no experimento em sala de aula que após alguns minutos apareceram várias bolinhas de DNA subindo como se fosse fios de algodão onde elas se enrolam e sobem entre si para a superfície do backer e com um bastão de vidro podemos retirá-las do backer. • A célula estava murcha após o bochecho. • O sal libera íons e precipitação do DNA tornando-o mais visível. • O álcool precipita o DNA. • O detergente de sabão neutro destróias membranas externas e o núcleo.
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