Aula 02. Bioquimica Clínica 2018.1 (1)

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Fotometria e 
Espectrofotometria
MKT-MDL-05
Versão 00
Profª Drª Rosilma de Oliveira Araujo Melo
Plano de aula
• TEMA: Fotometria e Espectrofotometria
• OBJETIVO: A aula tem por objetivo permitir ao aluno: 1) conhecer os conceitos
básicos sobre fotometria e espectrofotometria; 2) compreender as grandezas
utilizadas nas medidas fotométricas (transmitância e absorbância); 3)verificar as
principais diferenças entre fotômetros e espectrofotômetros; 4)conhecer as
aplicações desta técnica na Bioquímica Clínica.
• CONTEÚDO:
✓Conceitos básicos: Luz;
✓Definição de fotometria;
✓Principais grandezas utilizadas em medidas fotométricas;
✓Componentes básicos da fotometria;
✓Espectrofotometria;
✓Fotômetro x Espectrofotômetro;
✓Aplicações em Bioquímica Clínica.
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Versão 00
Conceitos Básicos 
• Luz: é uma radiação eletromagnética que se propaga na forma de
pulsos;
• Cada cor de luz: comprimento variável;
Espectro de absorção da radiação eletromagnética
Fotometria
• É um método óptico de absorção;
• Estuda a medição de grandezas relativas (Luz):
✓Emissão;
✓Recepção;
✓Absorção;
• Bioquímica clínica: absorção de luz por soluções (urina, 
plasma ou soro);
• Instrumentos: fotômetros e espectrofotômetros;
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Fotometria
• Transmitância:
• Absorvância:
A=2-log%T 
I1/Io=T
%T= 
Tx100
Medida da absorção da
luz;
A e T inversamente;
Fotometria
• Lei de Beer-Lambert:
✓Concentração de uma substância:
✓Diretamente ou inversamente proporcional a quantidade de
luz absorvida;
✓Inversamente proporcional ao logaritmo da luz transmitida;
✓ A=abc/ A=εbc
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Componentes Básicos da 
Fotometria 
• Fonte de energia elétrica (energia radiante): 
✓Lâmpada de Tungstênio – UV próximo e visível 
✓Lâmpada de Hidrogênio – região do UV 
• Monocromador
COMPONENTES BÁSICOS DA 
FOTOMETRIA 
• Porta Cubetas:
✓Quadradas 
✓ Redondas 
• Detectores: E° radiante transmitida em E° elétrica 
• Circuito medidor: E° elétrica emitida e medido em A 
e/ou T
Espectrofotometria
• Baseia-se na absorção da
radiação:ultravioleta e o
infravermelho;
• Quantidade de luz absorvida:
transmitância ou absorbância.
• Espectrofotômetro: fotômetro
fotoelétrico de filtro. Permite o
uso de faixas de luz
monocromáticas (variável).
Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki
Curva de calibração
• Objetivo: Diminuir a possibilidade de erro;
• Curva de calibração ou curva padrão;
• Série de soluções: concentrações conhecidas
e de forma crescente;
• Mede-se as respectivas densidades óticas
(D.O.) ;
• Eixo da abcissa as concentrações e no eixo
da ordenada as respectivas D.O. obtidas.
• Branco: tubo com todos os reativos, exceto
a substância a ser dosada (D.O branco-D.O
[subst]).
• 5 concentrações conhecidas;
https://littlebabsi.wordpress.com
Mecanismo de Funcionamento
Aplicações em Bioquímica 
Clínica
• Reações de identificação e
caracterização (biomoléculas):
carboidratos, proteínas, lipídios,
colesterol entre outras;
• Determinação DNA: fita simples ou
dupla. As bases do DNA absorvem
na faixa do UV (260 nm).
Aumento da absorção: dupla
hélice é separada;
Nefelometria e Turbidimetria
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Profª Drª Rosilma de Oliveira Araujo Melo
Nefelometria
• Substâncias coloidais;
• Efeito de Tyndall;
• Princípio da nefelometria:
✓Aumento da reflexão de luz: reações de
precipitação entre antígeno e anticorpo.
✓Medição direta: dispersão da luz
incidente;
✓Fatores interferentes:forma, tamanho,
concentração, comprimento de onda, e
indice de refração do meio;
Efeito de Tyndall
Nefelometria
• Metodo automatizado;
• Aplicada:
✓Determinações de proteínas;
http://www.dosatec.com/dosascat1.htm
Turbidimetria 
• Baseia-se na: dosagem da luz 
transmitida (Absorbância);
• Fatores interferentes: número e 
tamanho das partículas;
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Gasometria
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Coleta: Sangue arterial
• Punção arterial (anestesia local);
• Seringa heparinizada (expulsão do excesso) e
Agulha calibre 23;
• Assepsia: iodo-povidona e álcool;
• Artéria radial; artéria braquial e artéria
femoral;
• Coleta: 2mL
• Procedimento para estancar o sangue;
• Expelir o ar da seringa e Vedação;
• Transporte: imersão em gelo;
• Processamento: 15 min
http://medicplus.com.br/gasometria/
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Fatores que afetam os resultados
• Amostras coaguladas;
• Paciente: aspiração endotraqueal ou terapia
respiratória (20 min);
• Não expulsão do ar da seringa: falsa PaO2 ou
PaCO2
• Não imersão no gelo: redução pH e PaO2
• Não expulsão da heparina: redução pH, PaO2 e
PaCO2
• Tempo de processamento acima de 15 min: redução
pH
http://www.diagfarma.com.br
Determinação do pH e dos gases 
no Sangue
• Pressão parcial de oxigênio (PaO2): mede a
pressão de oxigênio dissolvido no sangue;
• Pressão parcial de dióxido de carbono (PaCO2):
mede a quantidade de dióxido de carbono
dissolvido no sangue;
• pH: mede íons de hidrogênio (H +) no sangue.
O pH do sangue fica geralmente entre 7,35 e
7,45;
• Bicarbonato (HCO3): bicarbonato atua como
tampão;
• Conteúdo de oxigênio (O2CT): mede a
quantidade de oxigênio no sangue
• Saturação de oxigênio (O2Sat): mede
hemoglobinas transportando oxigênio (O2).
http://www.biomedicinapadrao.com.br/
Distúrbio do equilíbrio ácido-
básico e hidroeletrolítico
Profª Drª Rosilma de Oliveira Araujo Melo
Eletrólitos, água e equilíbrio 
ácido-base
• Sódio:
✓Liquido extracelular (LEC);
✓Osmolaridade do plasma;
✓Bomba iônica
• Diagnóstico laboratorial:
✓Amostras: soro, plasma (heparina exceto sais), 
urina 24h, suor;
✓Valor no LEC: 142 mmol/L
✓Valor no soro: 135 a 145 mmol/L
✓Hiponatremia: < 136 mmol/L
✓Hipernatremia: > 150 mmol/L
✓Enzimático: β-galactosidade sódio-dependente;
http://bio-neuro-psicologia.usuarios.rdc.puc-rio.br/
Eletrólitos, água e equilíbrio 
ácido-base
• Potássio
✓Líquido intracelular;
✓Bomba iônica;
✓Potencial de membrana celular(impulso nervoso e
contractilidade músculo esq e card.)
Diagnóstico laboratorial:
✓Amostras: soro, plasma heparinizado 
(isentos de hemólise-eritrócito) e urina 
24h;
✓Valor no soro: 3,5 a 5,0 mmol/L
✓Hipopotassemia: < 3,5 mmol/L
✓Hipernatremia: > 5 mmol/L
✓Enzimático: piruvatoquinase;
salabioquimica.blogspot.com.b
Eletrólitos, água e equilíbrio 
ácido-base
• Cloretos:
✓Ânion LEC;
✓Distribuição de água;
✓Pressão osmótica;
✓Neutralidade elétrica;
• Diagnóstico laboratorial:
✓Amostras: soro ou plasma heparinizado (sem hemólise), urina 
24h, suor;
✓Valor no soro: 98 a106 mmol/L
https://commons.wikimedia.org/
Eletrólitos, água e equilíbrio 
ácido-base
• Água:
✓Constituinte mais abundante;
✓Intracelular;
✓Intersticial;
✓Intravascular
✓Osmolaridade;
✓Pressao osmótica coloidal (pressão 
oncótica);
http://slideplayer.es/slide
✓Sistemas tampões sanguíneos:
➢Tendem a se opor à mudança de pH;
➢Diminuem o efeito de ácidos e bases;
➢Atuação imediata;
✓Sistema respiratório:
➢Elimina ou retem CO2;
➢Atuação em min ou h;
✓Mecanismos renais:
➢Filtração: bicarbonato e cloreto de sódio; e excreção: bicarbonato
➢Atuação em horas ou dias; 
Homeostase dos íons hidrogênio
http://www.uff.br/WebQuest/pdf/acidobase.
Homeostase dos íons hidrogênio
• Concentração de hidrogênio:
pH= -log [H+]
• Equação de Henderson-Hasselbalch;
➢Utilizada para cálculo do pH em uma solução tampão:
pH=pK' + log [HCO3
-]
k.pCO2
PaO2
• Eficácia de tocas gasosas atraves da
membrana alveolocapilar;• Valores normais: 80 a 100 mmHg
• PaO2 diminuida: insuficiência
ventilatória ou respiratória
hipoxêmica;
http://csimedicine.com/
PaCO2
• Eficácia da ventilação alveolar;
• Valores normais: 35 a 45mmHg
• Reflete distúrbios respiratórios do pH;
• PaCO2 = hiperventilação = Alcalose
• PaCO2 =hipoventilação = Acidose 
respiratória http://slideplayer.com.br/slide/
Bicarbonato-HCO3
• Concentração depende da função renal;
• Valores normais: 22 a 24 mMol/L
• Reflete distúrbios metabólicos
• HCO3
- = pH = acidose metabólica
• HCO3
- = pH = alcalose metabólica
Como identificar os distúrbios do 
equilíbrio ácido-base
ALCALEMIAACIDEMIA 7,35 < pH > 7,45
Olhe para a PaCO2 e para o HCO3
Um sera anormal será alteração inicial e o outro resposta compensatória
Se alcalose:
pCO2- baixa
HCO3- alta
Se acidose:
pCO2- alto
HCO3- baixo
A alteração inicial sera o valor anormal que se correlaciona com o pH anormal
Se o pCO2 é a alteração quimica inicial 
(processo respiratório);
Se o HCO3 é a alteração quimica inicial 
(processo metabólico);
Como identificar os distúrbios do 
equilíbrio ácido-base
• Exemplo 1:
pH: 7.32 (Acidose)
pCO2 : 52 (alto=ácido)
HCO3
- : 24 (Normal)
pH: 7,35-7,45
pO2: 80 -100 mmHg
pCO2 : 35-45 mmHg
HCO3
-: 22- 26 mmol/L
Como identificar os distúrbios do 
equilíbrio ácido-base
Acidose 
respiratória
• Exemplo 2:
pH: 7.32 (Acidose)
pCO2 : 42 (Normal)
HCO3
- : 19 (Baixo = ácido)
pH: 7,35-7,45
pO2: 80 -100 mmHg
pCO2 : 35-45 mmHg
HCO3
-: 22- 26 mmol/L
Como identificar os distúrbios do 
equilíbrio ácido-base
Acidose 
Metabólica
• Exemplo 3:
pH: 7.49 (Alcalose)
pCO2: 33 (baixo= alcalino)
HCO3
-: 24 (Normal)
Alcalose 
respiratória
Como identificar os distúrbios do 
equilíbrio ácido-base
pH: 7,35-7,45
pO2: 80 -100 mmHg
pCO2 : 35-45 mmHg
HCO3
-: 22- 26 mmol/L
• Exemplo 4:
pH: 7.49 (Alcalose)
pCO2: 44 (Normal)
HCO3
- : 32 (alto= alcalino)
pH: 7,35-7,45
pO2: 80 -100 mmHg
pCO2 : 35-45 mmHg
HCO3
-: 22- 26 mmol/L
Alcalose
Metabólica
Como identificar os distúrbios do 
equilíbrio ácido-base
• Exemplo 5:
pH: 7.49 (Alcalose)
pCO2: 31 (Baixo = Alcalino)
HCO3
- : 32 (Alto= Alcalino)
pH: 7,35-7,45
pO2: 80 -100 mmHg
pCO2 : 35-45 mmHg
HCO3
-: 22- 26 mmol/L
Alcalose
Mista
Como identificar os distúrbios do 
equilíbrio ácido-base
• Exemplo 2:
pH: 7.31 (Acidose)
pCO2 : 52 (Alto = Ácido)
HCO3
- : 19 (Baixo = Ácido)
pH: 7,35-7,45
pO2: 80 -100 mmHg
pCO2 : 35-45 mmHg
HCO3
-: 22- 26 mmol/L
Como identificar os distúrbios do 
equilíbrio ácido-base
Acidose 
Mista
Acidose metabólica 
• Causas:
✓Rins não eliminam o excesso de H+ e não recuperam quantidade 
suficiente de HCO3
-
• Perda gastrointestinal de HCO3
-
• Perda renal de HCO3
-
• Insuficiência de excreção de H+ 
Alcalose metabolólica
• Causas:
✓Aumento de bicarbonato no plasma, decorrente de perda de H+ 
ou ganho de HCO3
-
• Perda de secreções gástricas;
• Ingestão de altas doses de antiácidos;
• Diuréticos de alça;
• Fibrose cística;
Acidose respiratória
• Causas:
✓Incapacidade dos pulmões eliminar CO2 (hipoventilação);
• Doença pulmonar obstrutiva crônica;
• Distúrbios neuromusculares;
• Hipoventilação alveolar primária;
Alcalose respiratória
• Causas:
✓Eliminação excessiva de CO2 pelos pulmões;
• Desordens pulmonares: pneuminia, asma, embolia;
• Desordens cardiovasculares: Insuficiência cardíaca congestiva;
• Desordens do sitema nervoso central: infecção ou tumores do 
SNC, encefalites e meningites;
Obrigada!