Aula 03 Coloração de Gram, Desinfecção e esterilização, Nutrientes

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Coloração de Gram 
Métodos de desinfecção e 
esterilização
Nutrientes utilizados pelos 
microrganismos
• O que é coloração?
• Antes de corados, os 
microrganismos (M.O.) 
precisam ser FIXADOS à 
lâmina
• Fixação: MATA e ADERE os M.O.
• Para isso, é necessário fazer o 
ESFREGAÇO
• As técnicas de coloração associam o caráter 
básico ou ácido do corante a ser utilizado ao do 
material a ser evidenciado. 
• Corantes:
• ÁCIDOS: têm afinidade por radicais básicos do 
tecidos
• BÁSICOS: se ligam aos radicais ácidos dos tecidos
• 1884: bacteriologista dinamarquês Hans Christian Gram
• Classifica as bactérias em dois grandes grupos: gram-
positivas e gram-negativas
• Baseada na composição da parede celular
• Corante púrpura e iodo se 
combinam, corando de 
violeta escuro. Bactérias 
que retêm essa cor após 
descoloração com álcool: 
GRAM-POSITIVAS
• Bactérias que perdem a 
cor violeta escuro, ficam 
incolores e são coradas de 
rosa com a safranina: 
GRAM-NEGATIVAS
• Através desta coloração, podemos 
visualizar as micobactérias (ácidos 
micólicos)
• Esfregaço
• Fucsina (5 min)
• Álcool-Clorídrico
• Lavagem
• Azul de Metileno
• Bactérias álcool ácido resistentes (BAAR): 
vermelho
• Bactérias não-álcool ácido resistentes 
(BNAAR): azul 
• Exemplo: Mycobacterium e Nocardia
TERMO DEFINIÇÃO
ESTERILIZAÇÃO Destruição ou remoção de todas as formas de vida 
microbiana, incluindo endósporos, exceto os 
príons
ESTERILIZAÇÃO 
COMERCIAL
Mata endósporos de C. botulinum em alimentos 
enlatados
DESINFECÇÃO Destruição de patógenos na forma vegetativa
ANTISSEPSIA Destruição de patógenos na forma vegetativa em 
tecidos vivos
DEGERMINAÇÃO Remoção de microrganismos de uma área limitada 
(por exemplo, na aplicação de injeção)
SANITIZAÇÃO Redução de contagens microbianas de utensílios 
alimentares a níveis seguros de saúde pública
•Alteração na permeabilidade da 
membrana 
•Danos às proteínas e aos ácidos 
nucleicos
•Alterações na parede celular
• Inibição enzimática
• Calor
• Filtração 
• Alta pressão
• Dessecação 
• Pressão osmótica
• Radiação 
• Autoclave 
• Vantagens: barato, eficaz, rápido, 
atóxico, microbicida e esporicida, 
penetração em tecidos
• Desvantagens: corrosão e degradação 
nos materiais
• Utilização: meios microbiológicos, 
soluções, roupa de cama, utensílios, 
curativos, equipamentos
• Temperaturas e tempo de exposição:
• 121°C e 15 minutos
• Pasteurização
• Destroi os microrganismos patogênicos
• Não elimina os esporos bacterianos
• Aplicação: desinfecção de equipamento de terapia respiratória e 
de anestesia, conservação do leite
• Esterilização com calor seco
• Estufa
• Eficaz, mas requer 
temperatura de 170 °C por 2 
horas
• Aplicação: vidros vazios, 
instrumentos, agulhas e 
seringas de vidro
• Filtração
• Separação das bactérias do líquido de 
suspensão ou do ar 
• Remove os microrganismos por meio de 
passagem de um líquido ou gás através 
de um material semelhante a uma tela
• Aplicação: esterilizar líquidos que são 
destruídos pelo calor
• Queima dos contaminantes até se tornarem cinzas
• Aplicação: Alças de inoculação, copos de papel, curativos 
contaminados, sacos e panos de limpeza
• BAIXAS TEMPERATURAS 
• Refrigeração: efeito bacteriostático
• ALTA PRESSÃO
• DESSECAÇÃO
• Ausência de água não é bom para os microrganismos
• PRESSÃO OSMÓTICA
• Altas concentrações de SAIS ou AÇÚCARES podem aumentar a pressão 
osmótica
• RADIAÇÃO
• Ionizante: raios gama, X ou feixes de elétrons
• Não-ionizante: luz ultravioleta (UV)
• PRINCÍPIO DE DESINFECÇÃO 
• Poucos agentes químicos proporcionam 
esterilidade
• A maioria REDUZ a população microbiana em 
níveis seguros ou removem as formas vegetativas 
de patógenos em objetos
• Problema da desinfecção: ESCOLHA DO AGENTE 
• Fenol e compostos fenólicos
• Lesiona as membranas plasmáticas lipídicas
• Paredes celular das micobactérias também
• Ex.: Cresóis, O-fenilfenol, usados como 
desinfetantes de superfícies 
• Biguanidas
• Amplo espectro
• Afeta as membranas, principalmente gram-
negativas
• Ex.: Clorexidina, usada no controle microbiano da 
pele e mucosas
• Combinada a um detergente, pode ser utilizada na 
escovação cirúrgica das mãos e no pré-operatório 
da pele e de pacientes 
• Halogênios 
• Iodo
• Impede a síntese de proteínas e altera a membrana 
plasmática
• Preparado mais conhecido: povidona-iodo – desinfecção da 
pele e tratamento de feridas 
• Cloro
• Hipocloritos (sódio ou cálcio)
• Amplo espetro de atividade antimicrobiana, baixo custo e 
ação rápida
• Inibição de algumas reações enzimáticas, desnaturação de 
proteína e inativação do ácido nucleico
• Álcool
• Etílico e isopropílico
• Bactericidas rápidos, mas não agem contra os esporos nem alguns vírus
• Concentração ótima é 70% (desnaturação requer água)
• Desnaturação proteica, dissolução de lipídios, rompendo membranas 
• Formaldeído
• Formalina (37%)
• Bactericida potente
• Uso limitado pois é cancerígeno
• Alcaliniza determinados grupos das proteínas e das purinas
• Peróxido de hidrogênio
• Atacam a membrana lipídica, o DNA e outros componentes essenciais
• Usado como desinfetante em concentração de 3%, para superfícies não 
orgânicas
Fornecimento de 
nutrientes
Síntese de 
macromoléculas
• Células procarióticas
• 90% de água
• 8% de macromoléculas
• Demais componentes
• São as substâncias encontradas no ambiente que participam do 
anabolismo e catabolismo celular.
• Dois grandes grupos:
• MACRONUTRIENTES: necessários em grandes quantidades, tem papel 
importante na estrutura e metabolismo;
• MICRONUTRIENTES: necessários em pequenas quantidades, tem funções 
enzimáticas e estruturas nas biomoléculas
• Carbono
• Base de todas as moléculas orgânicas
• Esqueleto das 3 maiores classes de nutrientes: lipídeos, 
carboidratos e proteínas
• Fornecem energia para o crescimento microbiano
• Exemplos: celulose, amido, sacarose, lactose, glicose
• Nitrogênio
• Segundo elemento mais abundante nas células
• Compõe proteínas, ácidos nucleicos e peptideoglicano
• Fontes de peptonas: carne, caseína, gelatina, queratina, 
farinha de soja, sementes de algodão
• Fósforo: encontrado em compostos orgânicos (ácidos nucleicos) 
ou inorgânicos (fosfatos)
• Enxofre: compondo a cisteína e metionina, estando presente em 
várias vitaminas. 
• Potássio: ativador de enzimas
• Magnésio: estabilização de ribossomos, membranas e ácidos 
nucleicos, funcionamento de enzimas
• Cálcio: estabilização da parede celular e termorresistência nos 
esporos
• Sódio: importante, especialmente para micro-organismos 
marinhos
• Ferro: presente em muitas proteínas, principalmente nas 
envolvidas na respiração
• Embora necessários em pequenas quantidades, têm 
papel tão importante quanto os macronutrientes
• Cobalto: formação da vitamina B12
• Zinco: papel estrutural em várias enzimas e proteínas
• Molibdênio: presente em certas enzimas
• Cobre: enzimas respiratórias
• Manganês: ativador de enzimas
• Níquel: presente em hidrogenases
• Água
• Essencial para os micro-organismos: absorção dos 
nutrientes dissolvidos
• Disponibilidade variável no ambiente
• Concentração de solutos internos (bombeamento de íons 
para o interior celular ou pela síntese de solutos 
orgânicos)
• Regulação térmica
• Oxigênio atmosférico
• Funciona como receptor de 
hidrogênio nos processos de 
respiração aeróbica
• Podem ser:
• Aeróbios: exigem oxigênio livre
• Anaeróbios: não toleram a presença 
de O2 livre
• Facultativos: crescem na presença 
ou ausência de O2Físicos
Temperatura
pH 
Pressão osmótica
O2
Químicos
Água
Macronutrientes
Micronutrientes
Fatores de 
crescimento
• Capazes de crescer a 0°C
• Temperatura ótima: cerca de 15 °C
• Encontrados nas profundezas dos oceanos ou em regiões polares
• Alimentos deteriorados em baixas temperaturas
Aeromonas
Lactobacillus
• Temperatura ótima: 25 a 40 °C
• Organismos dentro de corpos de animais
• Maioria das bactérias patogênicas: 37 °C
• Altas temperaturas
• Temperaturas ótimas: 50 a 60 °C
• Podem sobreviver ao tratamento térmico aplicado aos alimentos enlatados
• Germinação e crescimento de endosporos
• Acidez ou alcalinidade
• Maioria entre 6,5 e 7,5
• Poucas são acidófilas (abaixo de 4)
• Alcalinidade também inibe (preservar alimentos)
• Uso de tampões para neutralizar os ácidos (peptonas, 
aminoácidos, sais de fosfato)
Acidófila: 
Thiobacillus ferrooxidans