Relatório da aula prática de microscopia óptica e coloração de Gram

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Instituto Federal de Alagoas – IFAL 
 Engenharia Agronômica 
Microbiologia geral 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA DE MICROSCOPIA ÓPTICA E 
COLORAÇÃO DE GRAM 
(Microbiologia geral) 
 
Por: 
André Anjos 
José Luciano 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Piranhas – AL 
2018 
 
André Anjos 
José Luciano 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA DE MICROSCOPIA ÓPTICA E 
COLORAÇÃO DE GRAM 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Piranhas – AL 
2018 
Relatório de aula pratica 
com exigência da disciplina 
de microbiologia geral 
orientada pela Prof.(a) Ma. 
Juliana de Oliveira Morais 
no dia 25 de maio de 2018. 
 Sumário 
 
1. Introdução ............................................................................................................. 4 
2. Objetivos ............................................................................................................... 5 
2.1. Objetivo Geral ................................................................................................ 5 
2.2. Objetivos específicos ................................................................................. 5 
3. Metodologia .......................................................................................................... 6 
3.1. Técnica de Coloração de Gram ..................................................................... 6 
3.2. Microscopia óptica.......................................................................................... 7 
4. Resultados e discussão ........................................................................................ 8 
4.1. Microscopia óptica.......................................................................................... 8 
4.2. Coloração de Gram ........................................................................................ 8 
5. Conclusão ............................................................................................................. 9 
6. Apêndice ............................................................................................................. 10 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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1. Introdução 
 
Os microscópios são de grande importância para os estudos em microbiologia, com 
ele é possível observar organismo invisíveis a olho nu. Conhecer o mundo dos micro-
organismos explica diversos fatores que interferem no ambiente macroscópico. 
Diversas doenças, antes inexplicáveis, foram estudas com o auxílio do microscópio e 
assim foi possível criar os métodos de cura. Hoje, num laboratório de microbiologia o 
microscópio é essencial para diversas pesquisas, desde uma simples visualização de 
um micro-organismo até desenvolvimento de um remédio num laboratório 
farmacêutico. 
Alguns usos do microscópio é a técnica de coloração de Gram, técnica usada para 
diferencia bactérias, as bactérias são classificadas em dois grandes grupos: Gram-
positivas e Gram-negativas. 
A definição para a coloração de Gram pode ser dita como uma técnica que permite 
identificar grupos específicos bacterianos através da sua estrutura. A parede celular 
da bactéria é composta de peptideoglicana, se a parede celular deste microrganismo 
for espessa será classificada como Gram positivas; já as bactérias que possuem 
parede celular delgada são chamadas de Gram negativas. 
Gram foi o pesquisador que conseguiu desenvolver uma técnica para diferenciar 
esses dois tipos de parede celular. 
A coloração de Gram promove essa diferenciação. Dependendo da estrutura da 
parede bacteriana, teremos cores diferentes da bactéria. O resultado é o seguinte: se 
a bactéria for Gram negativa, a coloração dele será mais voltada para o vermelho, os 
corantes não fixam na parede da bactéria e um contra corante utilizado fixa na parede, 
mostrando que ela é mais delgada. Já as bactérias que são Gram positivas ficam em 
uma coloração que tendem ao roxo, isso porque o corante inicial se incorpora na 
estrutura da parede bacteriana. Dessa forma, você pode ver qual bactéria é Gram 
positiva e qual é Gram negativa. 
Isso é muito importante nas análises clínicas porque existem abordagens diferentes 
para tratar bactérias através da antibioticoterapia. 
 
 
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2. Objetivos 
2.1. Objetivo Geral 
• Observar estrutura e organismos com auxílio do microscópio óptico. 
• Realizar a técnica de coloração de Gram e verificar a diferença entre bactérias 
Gram-positivas e Gram-negativas de acordo com a estrutura da parede celular 
bacteriana. 
 
2.2. Objetivos específicos 
 
• Entender o funcionamento das partes que compõem o microscópio óptico. 
• Visualizar estruturas em diferentes aumentos (40x, 100x, 400x e 1000x) através 
do microscópio óptico. 
• Perceber a importância do uso dos microscópios para o estudo dos micro-
organismos. 
• Aprender a preparar esfregaço de bactérias; 
• Realizar a técnica de coloração de Gram; 
• Aprender o funcionamento do método de coloração de Gram; 
• Permitir a observação da morfologia bacteriana e fornecer informações a 
respeito do comportamento do seu material celular diante dos corantes de 
Gram. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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3. Metodologia 
 
3.1. Técnica de Coloração de Gram 
 
Material e métodos: 
• Alça de inoculação 
• Cultura bacteriana 
• Lâminas 
• Conta gotas 
• Lamparinas 
• Solução crista violeta 
• Lugol 
• Solução álcool/acetona 
• Solução fuscina 
• Papel toalha 
• Óleo de imersão 
Equipamentos e utensílios 
• Microscópio óptico 
• Pinça 
 
Preparo do esfregaço 
 
Antes da coloração os micro-organismo devem ser fixados na lâmina do microscópio, 
essa fixação mata os micro-organismo garantido que suas estruturas sejam 
preservadas. 
Primeiro a lâmina foi secada e logo após uma leve passada por cima da chama de 
uma lamparina, isso permite que a lâmina não apresente nenhum crescimento de 
micro-organismo indesejável. Identificado o lado da lâmina onde será feito o 
esfregaço, flambou-se a alça de inoculação e deixou-se esfriar, na lâmina colou-se 
uma gota de solução salina fisiológica com uma pipeta. 
 Flambou-se a alça de inoculação deixando esfriar próxima à chama, pegou o tudo de 
ensaio com a solução bacteriana Salmonela entérica e retirou uma amostra com uma 
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alça de inoculação e colocou na lâmina fazendo movimentos leves de rotação, para 
obter um esfregaço de forma oval, bem firme e uniforme. 
Após a colônia ter sido colocada na lâmina, com o lado oposto do esfregaço foi 
colocado na chama de uma lamparina, passando 5 vezes sobre a chama. Esse 
processo foi repetido, mas a colônia fixada foi a Staphylococcus aureus. 
 
Técnica de Coloração 
 
Com o esfregaço feita das duas colônias de bactérias, foi feito a coloração. As duas 
lâminas com as colônias de Salmonela entérica e Staphylococcus aureus fixados 
foram postos lado a lado. Foi colocado sobre as lâminas a solução cristal violeta 
(corante roxo) e esperou-se 5 minutos, lavou com água destilada. Após lavada com 
água destilada, cobriu as lâminas com solução lugol (mordente) por um minuto e 
depois lavado em água destilada. 
Inclinou-se a lâmina álcool-acetona ou álcool absoluto (aproximadamente 15 
segundo) e lavado rapidamente em água corrente, cobriu-se com fucsina de Gram e 
aguardou 30 segundos. Por fim, as lâminas foram lavadas em água destilada e 
esperando secar sem esfregar e levado para a análise no microscópio. 
 
3.2. Microscopia óptica 
 
Observação da amostra. 
 
A amostra que foi observadano microscópio foi a adrenal HE (figura 1, anexo). Ligado 
o microscópio e a intensidade da luz regulada adequadamente, foi girado o revólver 
colocando a objetiva de menor aumento (40x) na posição. Com a objetiva de menor 
aumento no local desejado, a lâmina com a amostra foi colocada sobre a platina, 
segurando as presilhas com as duas mãos e deixando a amostra bem centralizado 
(em baixo da objetiva). 
Utilizando o charriot para centralizar a platina e movimentando o macrométrico para 
levantar a platina sem encostar na objetiva. Olhado através das oculares para ajustar 
a lâmina. 
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Acertou o ponto exato do foco com o micrométrico e assim foi visto a amostra através 
das oculares. 
Para visualizar a amostra com os aumentos de 100x, 400x, e 1000x, foi feito os 
mesmos procedimentos, apenas girando o revólver e colocando na posição as 
objetivas de aumento desejado, sempre regulando e focalizando a amostra. 
 
4. Resultados e discussão 
 
4.1. Microscopia óptica 
 
Resultado da observação da amostra 
 
Após a visualização da amostra de adrenal HE no microscópio óptico em diferentes 
aumentos, esboçou-se a imagem visualizada para cada aumento: aumento de 40x, 
aumento de 100x, aumento de 400x e aumento de 1000x. Os esbouço estão anexados 
como ESQUEMA DO MATERIAL VISUALIZADO. 
 
4.2. Coloração de Gram 
 
Feito o esfregaço e a coloração nas duas lâminas contendo Salmonella entérica e 
Staphylococcus aureos em cada uma, foi feito a visualização de cada amostra no 
microscópio óptico e anotado suas principais características como na tabela abaixo. 
 
Bactéria Coloração Morfologia 
Salmonella enterica Gram-negativo Bacilos 
Staphylococcus aureos Gram-positivo Cocos (estafilococos) 
 
De acordo com tabela é possível observar que a Salmonella enterica ficou com a 
coloração Gram-negativo devido a sua camada delgada de peptideoglicana que ao 
lavar a lâmina com álcool ela perdeu a cor purpura e ficou transparente, quando 
lavamos com fucsina ela ficou rosa, e assim podemos dizer que essa bactéria é Gram-
negativa. Essa bactéria é um bacilo, em forma de bastão. 
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 A bactéria Staphylococcus aureos continuou em cor purpura poi a parede celular 
consiste em muitas camadas de peptideoglicana, formando uma estrutura espessa e 
rígida. A Staphylococcus aureos apresenta uma forma esférica chamada de cocos, 
mas a forma exata das bactérias é um arranjo de cocos denominada estafilococos. 
Estafilococos é um aglomerado de cocos, semelhante a um cacho de uva. 
 
5. Conclusão 
 
Como uma introdução à microbiologia, a microscopia óptica e a técnica de coloração 
de Gram permitiu uma visão geral da microbiologia: como usar um microscópio, a 
importância do equipamento para diversos estudos; a técnica de coloração de Gram 
mostrou como é essencial diferenciar bactérias de acordo com a constituição da 
parede celular. 
A diferença entre uma aula teoria para uma aula prática é notável, ambas têm mesma 
importância, porém a aula prática permite uma absorção de conhecimento mais 
eficiente. 
A técnica de coloração de Gram, mostrou que diferenciar bactérias é importante para 
diversas pesquisas, no estudo de bactérias patogênicas. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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6. Apêndice 
 
 Adrenal HE Realização do esfregaço 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Fixação do esfregaço