Genética 2

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 Prof.MSc.Hanstter HallisonAlves Rezende
 MORFOFUNCIONAL 1 PERÍODO MEDICINA

Identificação dos cromossomos
Cariótipo
 Conjunto de cromossomos contidos nas células 
de um organismo.
 Espécie Humana = 46 cromossomos
Células diplóides (2n)
A observação microscópica de cromossomos normais
e anormais permitiram a construção de mapas
citogenéticos do genoma.
Cariótipo
 Morfologicamente, esses cromossomos são identificados,
diferenciados e classificados quanto ao tamanho e
do cromossomo
ou assimétricos,
localização do centrômero (região 
intermediária aos braços simétricos 
curtos ou longos).
Classificação dos cromossomos
 Metacêntrico → Centrômero posicionado no centro
do cromossomo;
 Submetacêntrico → Centrômero deslocado para uma
das extremidades do cromossomo;
 Acrocêntrico → Cromossomo portador de uma esfera
terminal (satélite), localizada na extremidade do braço
curto;
 Telocêntrico → Cromossomo formado por apenas um
braço, com centrômero estritamente terminal.
Procedimento
 Para determinação e visualização do cariótipo, sendo possível
quantificar o número típico de cromossomos de uma espécie,
é necessária a interrupção do processo de divisão celular no
momento da metáfase, fase na qual os cromossomos atingem
o máximo de condensação.
Técnica
 Amostras de sangue, medula óssea, líquido amniótico ou 
tecido placentário.
 Cultura de linfócitos com fitohemaglutinina,
 Mantida em estufa por 72 horas,
 A colchicina é adicionada (1 a 2 horas),
 Células lavadas e fixadas com metanol na lâmina.
 Pode ser corada ou marcada.
Técnica de bandeamento
 Detecção de alterações cromossômicas, os cromossomas
devem ser marcados de uma forma específica, de modo a
que cada um dos pares seja identificado individualmente.
 Bandeamento diferencial: separa ospares.
 Bandeamento seletivo: marcam regiões específicas dos
cromossomas.
Banda Q
 Coloração pela mostarda de quinacrina e observação 
da fluorescência.
 Os cromossomas são corados sem qualquer tipo de pré-
tratamento.
 Apresentam um padrão de bandas brilhantes e pálidas,
específico para cada cromossomo.
 Desvantagem: perda da fluorescência.
 Este método foi substituído por técnicas de bandeamento
não fluorescente.
Banda G
 Realiza-se um pré-tratamento dos cromossomos com
uma solução salina a 60ºC, ou com enzimas proteolíticas,
como a tripsina, seguido de coloração comGiemsa.
 Os cromossomas apresentam, então, um padrão de
bandas claras e escuras, específico para cada
cromossomo.
Banda G
 Refletem a organização funcional do genoma que regula a
replicação do DNA, a reparação, a transcrição e a
recombinação genética.
 As bases moleculares das técnicas de bandas envolvem a
composição de bases do DNA, as proteínas associadas e
a organização funcional do genoma.
Banda C
 Marca seletivamente a heterocromatina constitutiva. Esta
está localizada primordialmente nas regiões
centroméricas dos cromossomas.
 As bandas C são aplicadas ao estudo dos polimorfismos
que envolvem a região justa-centromérica.
 As bandas C podem ser obtidas através
métodos, mas o mais comum consiste
de vários 
num breve
tratamento com ácido, seguido de tratamento alcalino
(hidróxido de bário, p. ex.) e posteriormente coloração
com Giemsa.
Banda RON
 Marcação das regiões dos organizadores nucleolares, que se
encontram, geralmente, nos braços curtos dos cromossomas
acrocêntricos.
 O método mais utilizado é o da precipitação de nitrato de
prata.
 A precipitação não se dá sobre o DNA ribossómico; resulta
antes da redução de uma (ou várias) proteínas ácidas
argirófilas que se encontram associadas àquelas regiões, onde
se localizam os genes que codificam as subunidades 18S e 28S
do rRNA.
 O precipitado localiza-se, por isso, no exterior dos
cromossomas e só aparece se os referidos genes estiverem
ativos.
Banda RONBanda C
FISH
 O método de FISH (hibridação in situ fluorescente) é o
meio mais direto de localizar marcadores moleculares
e genéticos no mapa citogenético permitindo a integração
entre mapas genéticos e moleculares.
 Técnica pela qual se realiza o acoplamento (hibridação)
de duas fitas de DNA complementares em lâminas
para microscopia.
FISH
 Esta técnica permite identificar a presença, ausência,
quantidade ou localização de segmentos cromossômicos
específicos, através de sondas de DNA (segmentos
cromossômicos de sequência conhecida) marcadas com
fluorocromos.
Tipos de sondas utilizadas
 Sondas que hibridam com sequências únicas ou loco-
específicas;
 Sondas que hibridam com estruturas cromossômicas
específicas (sondas constituídas de DNA repetitivo: as
alfa-satélites ou pericentroméricas, as beta-satélites e as
teloméricas);
 Sondas que hibridam com sequências múltiplas de um
mesmo cromossomo, também chamadas de “bibliotecas”,
que “pintam” um cromossomo inteiro.
Utilização
 A técnica de 
elucidar e
FISH pode ser utilizada para detectar, 
quantificar alterações cromossômicas
numéricas e/ou estruturais, tais como as encontradas em:
NEOPLASIAS –Ex.:LMC caracteriza-se pela presença da
translocação t(9;22).
ALTERAÇÕES CONSTITUCIONAIS (CONGÊNITAS) –
Ex.: detecção de síndromes causadas por microdeleções
Avaliação de instabilidade cromossômica
 Utiliza-se agentes clastogênicos como o Diepoxibutano 
(DEB) ou mitomicina C (MMC).
 Diagnóstico de anemia de Fanconi.
Aberrações cromossômicas
 Toda e qualquer alteração nos cromossomos de uma 
espécie, seja numérica ou estrutural.
 Causas:
- Idade avançada
- Vírus
- Drogas
- Radiação
- Choque térmico
AC numéricas
1) Euploidia: Avalia o genoma
- Haplóide (n)
- Diplóide (2n)
- Triplóide (3n)
- Tetraplóide (4n)
- Poliplóide (m..n)
AC numéricas
 Aneuploidia: Avalia isoladamente os cromossomos:
- Nulissomia (2n-2)
- Monossomia (2n-1)
- Trissomia (2n +1)
- Trissomia dupla (2n + 1 +1)
- Tetrassomia (2n + 2)
- Polissomia (2n + m)
Notação de cromosomos
 Regra:
1) Total de cromossomos encontrados
2) Vírgula
3) Cromossomos sexuais
Exemplo:
46,XX.= Normal
47,XX +21=Trissomia do 21
48,XX +2 x11=Tetrasomia do 11
48,XY +9 +11=Trissomia dupla
44, XX -2 x4 = Nulissomia do 4
Aspectos clínicos
 Síndrome de Down
 47, XX+21
 Síndrome de Edwards
 47, XY +18
 Síndrome de Patau
 47, XX+13
 Síndrome deTurner
 45,X0
 Síndrome de Klinefelter
 47,XXY
AC estruturais
 Classificação:
- Adição
- Deleção
- Inversão
- Translocação
- Cromossomos em anel
Notação
1) Número de cromossomos
2) Cromossomos sexuais
3) Cromossomo afetado
4) Braço
5) O que foi afetado
 46, XY t (5q6)
 46, XY t (5q6p)
 46, XX i (5q)