AULA 13 MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS

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Métodos cromatográficos
Profª Ma. Marlene Saraiva de Araújo Neta
E-mail: saraiva.marleneneta@gmail.com 
Cromatografia
• Chrom: cor + Graphe: escrever
• O processo não é totalmente de pendente da 
cor
• Conjunto de técnicas baseadas no princípio da 
retenção seletiva.
Cromatografia
• Objetivos:
- Separar componentes de uma mistura
permitindo identificar e quantificar componentes
Cromatografia
• Constituintes:
- Fase móvel: consiste em um líquido ou gás que
é arrastado a partir de uma fase estacionária.
- Fase estacionária: sólido ou líquido fixado à um
sólido pelo qual a fase móvel passa.
• Classificação quanto a forma
física:
- Planar: fase estacionária depositada
sob uma superfície planar (ex.:
Cromatografia em camada fina)
- Cilíndrica: fase estacionária depositada
sob uma superfície cilíndrica (ex.:
Cromatografia em coluna)
Cromatografia
• Classificação quanto a fase móvel:
- Gás inerte: cromatografia gasosa
- Líquido: cromatografia líquida
- Vapor pressurizado: cromatografia supercrítica
• Classificação quanto a polaridade:
- Fase normal: a fase estacionária é mais polar que a fase 
móvel
- Fase reversa: a fase móvel é mais polar do que a fase 
estacionária
Cromatografia
Cromatografia
Planar
F.M. Líquida
C. Papel
C. Camada 
Delgada (CCD)
Coluna
F.M. Gasosa
C. Gasosa
F.M; Líquida
C. Coluna 
Clássica
C. Líquida de 
Alta Eficiência 
(CLAE)
Cromatografia em Papel
• É classificada como de
partição líquido-líquido;
• Separação e distribuição
depende da solubilidade;
• Geralmente a água é
utilizada como fase móvel
• Fase estacionária é papel
(celulose)
• A forma mais simples é a cromatografia
ascendentes (capilaridade).
Cromatografia em Papel
• CP descendente
Cromatografia em Papel
• Técnica simples;
• Pequena quantidade de
amostra;
• Boa capacidade de
resolução
• Separação e identificação de
compostos polares como
antibióticos hidrossolúveis,
ácidos orgânicos e íons
metálicos
Cromatografia em Papel
Fator de retenção (Rf)
Cromatografia em Camada Delgada
(CCD)
• Fase estacionária sólida
- Sílica gel (fase normal)
- Sílica C18 (fase reversa)
• Fase móvel líquida
- Solventes polares, apolares
ou mistura de ambos
• As placas utilizadas podem ser
de folha de alumínio ou de
vidro
• Vantagens:
- Uniformes e homogêneas
- Melhor separação dos
componentes
- Baixo custo
- Fácil preparo
Cromatografia em Camada Delgada
(CCD)
Fator de retenção (Rf)
• Revelação do
cromatograma:
- É necessário quando
os componentes são
incolores.
- Podem ser utilizados
reveladores físicos,
químicos ou
biológicos
Cromatografia em Camada Delgada
(CCD)
Físicos
Luz UV
Químicos
Dragendorff
(alcaloides)
FeCl3
(compostos 
fenólicos)
Rev. Universal 
(vapor de 
iodo)
Biológicos
Enzimas
Antibióticos
Substratos
Revelação do cromatograma
• Aplicações:
- Estudos preliminares dos
componentes de um extrato orgânico;
- Investigação de casos de
envenenamento por ingestão de
estimulantes por atletas;
- Estudos de reações químicas quanto à
presença de intermediários estáveis;
- Análise da pureza de compostos;
- Análise da eficiência de processos de
destilação e cristalização;
Cromatografia em Camada Delgada
(CCD)
• Mais antigo procedimento
cromatográfico;
• Isolamento de produtos
naturais;
• Purificação de produto de
reações químicas;
• Fundamenta-se
basicamente na polaridade
relativa das moléculas
envolvidas.
Cromatografia em Coluna
• Coluna de vidro,
metal ou plástico
de diâmetros
variados;
• Possuem uma
torneira em sua
extremidade
inferior;
• Preenchidos por
um adsorvente
(sílica, alumina)
Cromatografia em Coluna
• A velocidade na qual um
composto passa pela coluna
depende da polaridade da fase
estacionária;
• Solvente é utilizado como
eluente;
• Se o composto é mais atraído
pela fase estacionária do que
pelo solvente ele migrará mais
lentamente na coluna
• Se o composto tiver maior
afinidade pelo solvente ele
migrará mais rapidamente
Cromatografia em Coluna
Cromatografia Gasosa (CG)
• Misturas cujos volumes sejam voláteis e termicamente
estáveis
• Para uma substância ser arrastada por um fluxo de gás ela
deve se dissolver ao menos parcialmente neste gás.
• Fase móvel gasosa.
• Gás de arraste
- Fase móvel
- NÃO interage com a amostra, apenas a carrega
através da coluna
- Inerte: não deve reagir com a amostra, fase
estacionária ou superfícies do instrumento
- Puro: deve ser isento de impurezas que posam
degradar a fase estacionária
Cromatografia Gasosa (CG)
Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE)
ou
High Performance/Pressure Liquide 
Chromatography (HPLC)
• Tem a capacidade de realizar separações e análises
quantitativas de uma grande quantidade de
compostos presentes em vários tipos de amostras,
com alta resolução, eficiência e sensibilidade.
• Separa e determina: materiais orgânicos, inorgânicos
e biológicos
Cromatografia Líquida de Alta 
Eficiência (CLAE)
• Aplicações:
- Química forense (metabólitos de
drogas)
- Bioquímica (proteínas, aminoácidos,
esteroides)
- Ciências ambientais
- Alimentos (corantes artificiais,
alfatoxinas, aditivos, antioxidantes)
- Farmacologia (fármacos)
- Toxicologia (pesticidas)
Cromatografia Líquida de Alta 
Eficiência (CLAE)
• Fase móvel (Solventes)
- Deve ter alto grau de pureza
(sensibilidade do detector)
- Dissolver a amostra sem
decompor seus componentes
- Polaridade e viscosidades
adequadas
- Não degradas a fase
estacionária
- Ser compatível com o detector
Cromatografia Líquida de Alta 
Eficiência (CLAE)
Cromatografia Líquida de Alta 
Eficiência (CLAE)
Cromatografia Líquida de Alta 
Eficiência (CLAE)
• Vantagens: 
- Versatilidade;
- Tempo reduzido de 
análise;
- Alta resolução;
- Análise qualitativa;
- Resultados 
quantitativos;
- Detectabilidade
- Automação
• Desvantagens:
- Alto custo do 
equipamento
- Alto custo de 
manutenção do 
equipamento
- Operador experiente
Cromatografia Líquida de Alta 
Eficiência (CLAE)
Cromatografia Líquida de Alta 
Eficiência (CLAE)