Proteômica: metodologias e aplicações no estudo de doenças humanas - Apresentação

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Introdução
Proteômica: estudo das proteínas, que são responsáveis direta ou indiretamente pelo controle de todos ou quase todos os processos biológicos. 
Valledor e Jorrin
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Introdução
Proteoma: Conjunto de proteínas codificadas pelo genoma;
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Metodologia em proteômica
Bottom-up; 
Top-down.
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Metodologia em proteômica
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Bottom-up x Top-down 
Eletroforese uni e bi dimensional
Separação das proteínas por eletroforese uni (1-DE) e bi dimensional (2-DE).
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Solubilizadas
Desagregadas
Desnaturadas
Agentes redutores
Eletroforese uni e bi dimensional
Na eletroforese bidimensional usual, as proteínas são separadas em duas etapas consecutivas: 
Na primeira, denominada focalização isoelétrica (IEF).
Na segunda etapa, as proteínas são submetidas a uma eletroforese com direção perpendicular à IEF em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE), e então separadas de acordo com sua massa molecular.
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Eletroforese uni e bi dimensional
Visibilidade das bandas proteícas:
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Eletroforese uni e bi dimensional
Embora capaz de gerar muitas informações, as técnicas de eletroforese 1-D e 2-D possuem limitações. 
Uma das mais importantes é a presença de algumas proteínas em concentrações elevadas, especialmente em certos fluidos corporais.
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Cromatografia líquida 
Na cromatografia líquida (LC), o analito é dissolvido em uma fase líquida (móvel) sem interagir quimicamente com ela, e percola uma fase estacionária (sólida) geralmente empacotada em uma ou em várias colunas com diferentes fases estacionárias.
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Métodos de ionização
Atualmente, existem dois métodos principais de ionização utilizados em proteômica:
MALDI (Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization);
ESI (Electrspray Ionization).
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Métodos quantitativos
Nos últimos anos, vários métodos de quantificação absoluta e relativa de proteínas em amostras avaliadas por MS têm sido desenvolvidos. 
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Métodos quantitativos
 Mais recentemente, alguns métodos utilizam marcação de proteínas ou peptídeos por isótopos ou outros reagentes identificáveis por MS.
 1H X 2H
 12C X 13C
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Métodos quantitativos
Métodos de quantificação livre de marcação já foram também desenvolvidos graças aos progressos tecnológicos...
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Aplicações no estudo de doenças humanas
Embora as técnicas mostradas anteriormente venham crescendo, a análise ainda permanece incompleta mesmo em células mais simples, sobretudo em relação a proteínas de baixa abundância. 
A proteômica tem caminhado da pergunta “o que?” para questões que envolvem “quando, onde, como e quanto”. (Walsh et al)
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Aplicações no estudo de doenças humanas
Os tecidos afetados na maioria das doenças humanas não são de fácil acesso e dificilmente serão utilizados para análise de rotina. 
Uma de suas principais limitações é a heterogeneidade celular, que pode levar a resultados imprecisos se uma avaliação histopatológica detalhada não for realizada. 
Há algum método que possa superar essas limitações?
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Aplicações no estudo de doenças humanas
SIM! 
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Aplicações no estudo de doenças humanas
Vários fluidos corporais órgãos-específicos já foram caracterizados com perspectivas para utilização clínica.
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Doença de Anderson-Fabry
Ceratocone
Câncer de mama
Fluidos corporais: Saliva
A saliva é um material biológico bem estudado por abordagens proteômicas. Composta de uma mistura de componentes secretados pelas glândulas salivares e derivados do sangue, ela é provavelmente o fluido mais acessível do nosso organismo;
Componentes: proteínas, hormônios, pequenas moléculas como ureia, e eletrólitos como cálcio, bicarbonato, fosfato e fluoreto.
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Fluidos corporais: Saliva
O grande interesse na saliva como fluido para diagnóstico tem levado à padronização de processos de coleta e armazenamento principalmente porque vários fatores afetam seu fluxo e composição. 
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Fluidos corporais: Saliva
Níveis de hormônio e drogas, exposição a poluentes ambientais e infecciosos e monitoramento de doenças, incluindo periodontite, diabetes mellitus, fibrose cística, doenças da glândula salivar e câncer de mama, ovário e oral.
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Fluidos corporais: soro/plasma
Mais abrangente;
Fontes importantes de marcadores biológicos;
Informações ricas sobre processos fisiológicos e patológicos;
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Fluidos corporais: soro/plasma
Plasma X Soro
Sua análise para propósitos diagnósticos é bem conhecida e as duas frações são similares em composição. 
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Fluidos corporais: soro/plasma
Muitos dados já foram obtidos em soro/plasma de pacientes com diabetes, doenças autoimunes, cardíacas e infecciosas, doenças de Parkinson e Alzheimer , endometriose, tumores de bexiga, cabeça e pescoço, cólon, esôfago, estômago, fígado, mama, pâncreas, próstata, pulmão, rim, e também de gestantes com fetos portadores de síndrome de Down. 
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Obrigado !!! 
Universidade Estadual de Santa Cruz
Discente: David Hafner
Docente: Carlos Priminho
Disciplina: Genética Molecular
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