BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR CORRETO

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CENTRO UNIVERSITÁRIO NOSSA SENHORA DO PATROCÍNIO 
CURSO DE ENFERMAGEM 
 
 
 
 
 
 
SUSIANE PEDROSO FERREIRA DA SILVA 
 
 
 
 
 
 
 
 
REAÇÕES EM CADEIA DA POLIMERASE E AS SUAS VARIEDADES 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ITU-SP 
2018 
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SUSIANE PEDROSO FERREIRA DA SILVA 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PCR- REAÇÕES EM CADEIA DA POLIMERASE E AS SUAS VARIEDADES 
 
 
 
 
 
 
Trabalho de Biologia celular e Molecular 
apresentada como exigência parcial para 
avaliação de dependência de Enfermagem da 
Faculdade de Saúde e Ciências da Vida. 
 
Prof.º Rafael Bartholomeu. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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2018 
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SUMÁRIO 
1 INTRODUÇÃO 3 
2 REAÇÕES EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR) 4 
2.1 REAÇÕES EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR): PASSO A PASSO 4 
2.2 FORMAS DE REVELAÇÃO DO RESULTADO DA AMPLIFICAÇÃO 5 
2.3 QUANDO USAR A PCR 7 
2.4 REAÇÕES EM CADEIA DA POLIMERASE: PODE HAVER ERROS? 7 
2.5 DICAS DA BOA PRÁTICA EM PCR 7 
CONSIDERAÇÕES 8 
REFERÊNCIAS 9 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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1 INTRODUÇÃO 
O advento da biologia molecular foi certamente um dos maiores passos das 
ciências biológicas durante o século XX. A descoberta da Reação em Cadeia da 
Polimerase (PCR) trouxe enormes benefícios e desenvolvimento científicos como o 
sequenciamento genômico, expressão de genes em sistemas recombinantes, o 
estudo da genética molecular, a determinação rápida de paternidade e o diagnóstico 
de doenças infecciosas. Outras aplicações especialmente úteis para a PCR é a 
clonagem de um fragmento de DNA, que pode ser um gene e o conhecimento do 
DNA codificante (cDNA) obtida da molécula de RNA , o que permite o estudo da 
expressão dos genes. Além disso, a PCR tem um grande potencial na medicina 
forense. Sua sensibilidade torna possível utilizar uma pequena amostra de DNA 
(traços mínimos de sangue ou tecidos) e obter um fingerprint da amostra para 
posteriormente ser comparada com outras (MENDONÇA, 2010) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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2 REAÇÕES EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR) 
 
Considerada uma técnica de biologia molecular revolucionária, a reação em 
cadeia da polimerase (PCR – Polymerase Chain Reaction) permitiu o rápido 
desenvolvimento do estudo de sequências de ácidos nucléicos (MOLINA;TOBO, 
2004). Desenvolvida por Kary Banks Mullis (prêmio Nobel de química de 1993 pelo 
desenvolvimento dessa técnica) em abril de 1983, essa técnica de biologia 
molecular é utilizada para fazer cópias de uma região especifica do DNA. Essas 
cópias são feitas para que o pesquisador tenha material suficiente para analisar, 
afinal, o DNA é microscópio (COSTA, 2010). 
2.1 REAÇÕES EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR): PASSO A PASSO 
 
Para a realização deste procedimento, o primeiro passo é extrair o material 
genético da célula ou do local a ser estudado com cuidado para que o mesmo não 
seja danificado e nem sofra contaminação. Habitualmente, o material coletado é o 
DNA; todavia, pode-se utilizar o RNA em uma RT-PCR que consiste em um 
desdobramento do PCR e apresenta outras aplicações. 
• Desnaturação (Separação das fitas): Aquecimento, a 96ºC - etapa com 
duração entre 30s a 1 min, com o objetivo de separar a reação por meio da 
desnaturação. O resultado desse aquecimento é um molde de fitas simples 
de DNA; 
• Anelamento: A mistura é resfriada entre 55 a 65ºC. Essa etapa é importante 
para que os primers possam ligar-se ao molde de fita simples de DNA 
(resultado do aquecimento); 
• Extensão: para finalizar, em 72ºC, o prémix faz com que os primers 
estendam-se, sintetizando novas fitas de DNA (COSTA, 2009). 
Esse processo é refeito, cerca de 25 a 35 vezes, para que aconteça a cópia 
das sínteses de DNA. O processo todo demora cerca de 2 a 4 horas, dependendo 
do tamanho da região a ser copiada. Feito tudo isso, o material, resultado das 
replicações, é analisado através da eletroforese em gel de agarose ou de 
poliacrilamida (COSTA, 2009). 
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Fonte: Adaptador de http://ib.bioninja.com.au/standard-level/topic-3-genetics/35-genetic-
modificationand/pcr.html. Acessado em 18/07/2018. 
 
2.2 FORMAS DE REVELAÇÃO DO RESULTADO DA AMPLIFICAÇÃO 
 
• Eletroforese 
A eletroforese é um processo de migração de uma partícula carregada sob 
influência de um campo elétrico. Por apresentarem grupos funcionais ionizáveis, 
várias moléculas adquirem carga positiva ou negativa em um determinado pH. 
Portanto, quando são submetidas a um campo elétrico, essas moléculas carregadas 
migram para o cátodo ou ânodo, dependendo de sua carga (WILSON; WALKER, 
2010). 
Para a realização desta metodologia é necessário uma fonte de tensão e uma 
unidade de eletroforese que estão disponíveis na forma vertical e horizontal. Além 
destes itens, também é necessário de um gel, que pode ser de poliacrilamida ou de 
agarose (WILSON; WALKER, 2010). O gel de agarose é o tipo de matriz mais 
rotineiramente utilizado no laboratório de Biologia Molecular, que por sua 
constituição química e o tamanho dos poros pode mudar a velocidade de migração 
dos ácidos nucléicos (PETECOF et al., 2015). 
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Fonte: Adaptado dehttps://monitoriadegenetica.files.wordpress.com/2014/09/pcr.jpg. 
Acessado em 17/07/2018 
 
• PRC em Tempo real 
O PCR em tempo real possibilita monitorar, em tempo real, o processo de 
amplificação e permite a quantificação dos ácidos nucléicos por meio da emissão e 
capitação de fluorescência que ocorre durante todo o processo. A emissão da 
fluorescência gera um sinal que aumenta na proporção direta da quantidade de 
produto da PCR. O PCR em tempo real requer um termociclador com sistema ótico 
para a excitação da fluorescência e captação da emissão, além de um computador 
com um software para aquisição de dados e análise final da reação (NOVAIS; 
PIRES-ALVES, 2004). 
 
Fonte: Adaptado de http://www.fleury.com.br/medicos/educacao-
medica/manuais/manualhematologia/Pages/pcr.aspx. Acessado em 17/07/2018. 
 
 
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2.3 QUANDO USAR A PCR 
A técnica PCR é muito utilizada em testes genéticos e em diagnósticos 
médicos tais como: diagnostico de infecções, diagnostico de mutações gênicas, 
diagnostico de paternidade, medicina forense, seqüenciamento de DNA e etc. 
2.4 REAÇÕES EM CADEIA DA POLIMERASE: PODE HAVER ERROS? 
Alguns problemas técnicos podem causar resultados inconclusivos ou, até 
mesmo, errados como uma contaminação do material por substâncias que inibem a 
reação ao teste. Outra contaminação que pode acontecer é por meio de outro 
material genético que não esteja sendo utilizado para aquele teste em específico. 
Para que não ocorra nenhum tipo de contaminação, o profissional que irá 
colher a amostra, bem como quem irá analisá-la, precisa tomar alguns cuidados 
específicos. 
2.5 DICAS DA BOA PRÁTICA EM PCR 
 
• Salas dedicadas de Pré-PCR e Pós-PCR; 
• Equipamentos e consumíveis específicos; 
• Fluxo de trabalho;• Preparação dos reagentes em capela de fluxo laminar; 
• Rotina de limpeza; 
• Identificação da amostra; 
• Uso de controles positivos e negativos; 
• Fazer o uso correto dos equipamentos (pipetagem); 
• Uso de EPI – Equipamento de Proteção Individual; 
• Prevenção de Riscos (JUNIOR ET AL., 2015). 
 
 
 
 
 
 
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CONSIDERAÇÕES 
A criação da PCR é considerada um grande avanço na área de biologia 
molecular, pois esta metodologia permite explorar o conhecido sobre o genoma e 
sua expressão. Esta técnica consiste em uma reação de amplificação in vitro de 
regiões específicas de ácidos nucléicos. A sua realização é considerada simples, 
entretanto necessita de vários reagentes e de aparelhos específicos, a revelação de 
resultados é através da eletroforese ou em tempo real. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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REFERÊNCIAS 
 
AGNE, M. et al. PRINCIPLES AND APPLICATIONS OF POLYMERASE CHAIN 
REACTION IN MEDICAL DIAGNOSTIC FIELDS : A REVIEW. Brazilian Journal of 
Microbiology, v. 40, p. 1–11, 2009. 
 
COSTA, Ronaldo de Jesus. Técnica de Biologia Molecular: PCR (Reação em Cadeia 
da Polimerase). Disponível em: 
http://www.portaleducacao.com.br/farmacia/artigos/8577/tecnica-de-biologia-
molecularpcr-reacao-em-cadeia-da-polimerase. Acessado em 17 de julho de 2018. 
 
JUNIOR, José Otávio Costa Auler, et al. GUIA DE BOAS PRÁTICAS 
LABORATORIAIS. Disponível em: http://www.limhc.fm.usp.br/portal/wp-
content/uploads/2015/11/Manual_Guia_de_Boas_Praticas.pdf. Acessado em 18 de 
julho de 2018. 
 
MENDONÇA, Flávia Costa, Relatório biomol PCR e eletroforese. Universidade 
Federal de São João Del-Rei, Divinópolis-MG, 2010. Disponível em: 
http://www.ebah.com.br/content/ABAAABJxUAA/relatorio-biomol-pcr-eletr. Acessado 
em 18 de julho de 2018. 
 
MOLINA, Adriana Lopes, TOBO, Patrícia Renovato. Uso das Técnicas de Biologia 
Molecular para Diagnóstico. Disponível em: 
http://www.einstein.br/biblioteca/artigos/Vol2Num2/Serie%20Biologia%20parte%202.
pdf. Acessado em 18 de julho de 2018. 
 
NOVAIS, C. M.; PIRES-ALVES, M. PCR em tempo real. Revista Biotecnologia 
Ciências e Desenvolvimento, v. 33, p. 10–13, 2004. 
 
 
PETECOF, R. et al. Análise da eficiência do gel de agar-agar na eletroforese de 
DNA. Acis Atas de Ciências da Saúde, v. 3, n. 3, 2015 
 
 
WILSON, K.; WALKER, J. Principles and Techniques of Biochemistry and Molecular 
Biology. 7. ed. New York: CAMBRIDGE UNIVERSITY PRESS, 2010. 
 
 
 
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