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Estudo dirigido Estrutura do DNA 1) O que é DNA? R: é um polímero de nucleotídeos, sendo a macromolécula que é atualmente responsável por carregar a informação genética dos seres vivos. 2) Quais as porções que compõem um nucleotídeo? R: grupo fosfato, açúcar (pentose) e base nitrogenada 3) Quais as bases nitrogenadas e como são subclassificadas? R: adenina, timina, citosina e guanina; são subdivididas em bases púricas (adenina e guanina) e pirimídicas (citosina e timina) 4) Qual o nome da ligação entre nucleotídeos? Como ela é feita? R: ligação fosfodiéster, ela é feita entre um grupo hidroxila localizado no carbono 5’ do grupo fosfato de um nucleotídeo, e um grupo hidroxila localizado na carbono 3’ do fosfato de outro nucleotídeo 5) Qual a estrutura da molécula de DNA? Qual característica da molécula de DNA permite a organização nessa estrutura? Qual ligação é feita? R: a estrutura é uma dupla hélice; a característica que permite essa organização é a complementaridade das bases nitrogenadas (timina-adenina; citosina-guanina), o que permite o pareamento de 2 fitas simples de DNA; a ligação entre as bases é do tipo ponte de hidrogênio. 6) O que é o “passo de hélice”? qual o tamanho dele em pares de base? R: é a volta que a molécula de DNA dá em torno do seu próprio eixo; geralmente 10,4 pbs 7) Quais são os sulcos da molécula do DNA? E qual a importância deles? R: sulco maior e sulco menor; são importantes para permitir a interação da fita de DNA com moléculas, como proteínas, assim como também são importantes para a regulação da expressão da informação gênica (a presença ou ausência dos sulcos) 8) Como se distribuem as cargas elétricas da molécula e qual a consequência disso para a estrutura final? R: as cargas se distribuem com a carga negativa no grupo fosfato, enquanto que as cargas positivas se encontram nas bases nitrogenadas; a consequência disso é que a fosfato (que também é polar) é hidrofílico e se localiza na porção externa da molécula, permitindo solubilização em água e a movimentação do DNA em direção ao polo positivo na técnica de eletroforese, já as bases (também sendo apolares) são hidrofóbicas e localizadas na porção interna da molécula. 9) Sob quais formas o DNA mais comumente é encontrado em sistemas biológicos? Diferencie-as. R: Formas B, A e Z; forma A não ocorre em condições fisiológicas em que a molécula está desidratada, com a molécula mais grossa e mais curta; forma B ocorre em situações fisiológicas e é hidratado, é uma forma mais fina e alongada; a forma Z é mais alongada e fina que a forma B e ocorre com sentido de rotação oposto ao da forma B, além de ser formada geralmente pelo processo de metilação. 10) O que é eletroforese e qual o seu objetivo? R: é a técnica molecular que visa a separação de macromoléculas em relação a carga, peso e tamanho, permitindo dessa forma a observação e separação objetiva de moléculas que virão a serem utilizadas em outras técnicas moleculares ou advindas delas 11) Qual característica da molécula de DNA é explorada e permite a técnica da eletroforese? R: a presença da carga negativa do grupo fosfato, o que permite que o polo positivo atraia a molécula e realize a corrida pelo gel 12) Indique os passos da técnica de eletroforese. R: preparação do gel; colocação da amostra nas canaletas do gel; colocação do azul de bromofenol (permite verificar o estágio da corrida para que ela seja parada antes que a amostra saia do gel); iniciação da corrida; após a corrida coloca-se o gel em solução de brometo de etídio e então o gel é colocado no transiluminador (o que permite a visualização da amostra disposta em diferente posições no gel)