BACTERIAS Coloracao de Gr

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 GRAM POSITIVAS E GRAM 
NEGATIVAS 
 PAREDE 
 
 De acordo com a constituição da parede, 
as bactérias podem ser divididas em dois 
grandes grupos: 
 
 - Gram-negativas: se apresentam de cor 
avermelhada quando coradas pelo método de 
Gram. 
 - Gram-positivas: se apresentam de cor roxa 
quando coradas pelo método de Gram. 
 
 A parede das gram-positivas é 
praticamente formada de uma só camada, 
enquanto a das gram-negativas é formada de 
duas camadas. 
 
 Entretanto, Os dois tipos de parede 
apresentam uma camada em comum, situada 
externamente à membrana citoplasmática 
que é denominada camada basal, mureína ou 
peptídeoglicano. 
 A segunda camada, presente somente na 
células das gram-negativas é denominada 
membrana externa. Os dois tipos de parede 
são apresentados na figura a seguir: 
 Hans Christian Gram, um bacteriologista 
dinamarquês, estudou e definiu a técnica para 
corar bactérias, a coloração Gram, em 1884. 
Nesta ocasião, experimentalmente, corou 
lâminas com esfregaços (uma espécie de 
“raspa”, grosseiramente falando, de um 
determinado lugar do corpo ou de uma cultura 
que se queira fazer a pesquisa) com violeta de 
genciana e percebeu que se as bactérias 
existentes nestes esfregaços uma vez coradas 
não desbotavam com álcool, se previamente 
fossem tratadas com iodo. 
 
 Avançando e aprimorando o método, 
adicionou ainda outros corantes denominados 
“contra corantes”, tais como safranina e fucsina 
básica. As bactérias contidas no esfregaço podem 
ser classificadas como Gram-positivas 
(aproximadamente de cor roxa) ou Gram-
negativas (aproximadamente de cor vermelha), 
isto dependerá da parede celular da bactéria. 
 
 Se for estruturalmente simples a coloração 
será positiva, se for estruturalmente complexa a 
coloração será então negativa 
 Existe um protocolo que se segue para fazer 
a coração de um esfregaço, com etapas bem 
definidas e com misturas de substâncias 
(solução de cristal violeta; solução de lugol 
(iodeto de potássio – IK); solução de safranina e 
solução de álcool) que resultarão na coloração 
positiva ou negativa, como nas figuras abaixo: 
 
 Esta coloração permite distinguir os mais 
variados tipos de bactérias e que tipo de parede 
celular elas tem (se mais simples ou mais 
complexas, com mais ou menos peptideoglicanos 
– principal componente da parede celular 
bacteriana). 
 
 As bactérias que descorarem quando 
submetidas à um solvente orgânico são Gram-
negativas, e as que permanecerem coradas 
mesmo quando em contato com o solvente são 
denominadas Gram-positivas. 
 
 Estas bactérias de diferentes colorações 
tem também graus diferentes de virulência. 
As Gram-negativas, por exemplo, são 
constituídas por uma endotoxina denominada 
LPS (lipopolissacarídeo), que é causadora da 
patogenicidade. 
 
 Já as Gram-positivas possuem a 
exotoxina rica em ácido lipoprotéico que 
confere aderência à bactéria. 
 
 
 As proteobactérias compôem a maior parte das 
bactérias gram negativas. As principais são: 
- Escherichia coli 
- Salmonella 
- Shigella 
 
Enterobacteriaceae: 
- Pseudomonas 
- Moraxella 
- Helicobacter 
- Stenotrophomonas 
- Bdellovibrio 
- Legionella 
 
Entre outras, como Chlorobi, Chloroflexi, Cianobactérias, 
Espiroquetas, etc. 
 
 Filo Firmicutes (Bacilos, Estreptococos, 
Estafilococos, Enterococos, Actinobacteria, 
Listeria, etc). 
 
1) Em uma lâmina pingar uma gota de solução 
salina estéril. 
 
2) Recolher uma colônia pré-cultivada com 
alça bacteriológica. 
 
3) Colocar a colônia selecionada junto à lâmina 
e homogenizar. 
 
4) Fixar o esfregaço no calor. 
 
5) Cobrir o esfregaço com cristal de violeta por 
1 minuto. 
 
6) Lavar o esfregaço com água corrente removendo o 
excesso de corante. 
 
7) Cobrir o esfregaço com lugol por 1 minuto 
 
8) Repetir passo 6. 
 
9) Descorar com álcool acetona até remover o excesso 
de corante. 
 
10) Repetir passo 6 
 
11) Cobrir o esfregaço com safranina por 30 segundos. 
 
12) Lavar e secar 
13) Examinar ao microscópio (1000x)