Estudo Dirigido de Microbiologia

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Estudo Dirigido de Microbiologia
Questões: 
1) Quais as finalidades de cultivar micro-organismos em laboratório? 
Observar o seu crescimento, acumulo de substancia, massa e tamanho.
2) Quais fatores físicos e químicos devem ser observados para se fazer a cultura de micro-organismos em laboratório? Por que eles são importantes? 
Fatores físicos são ph, temperatura e pressão atmosférica.
Fatores químicos são oxigênio, carbono, hidrogênio, nitrogênio, enxofre, fosforo, elementos traço, fatores orgânicos de crescimento e água. 
Fontes de energia quimiotróficas litotróficas, quimiotróficas organotróficas, fotossintéticas.
Esses fatores são importantes pois irão interferir no crescimento e sobrevivência bacteriana. 
3) Os meios de cultura de micro-organismos podem ser classificados inicialmente com relação à consistência. Qual é essa classificação? Para que serva cada um destes tipos de meio? Dê exemplos. 
Os meios de cultura podem ser liquido, solido ou semi-solido. 
No meio liquido é observado melhor o crescimento da bactéria, no meio solido podemos observar o crescimento e isolamento e no meio semi-solido mobilização (para bactéria que tem flagelo)
Exemplos: a definir
4) Como pode-se observar o crescimento de micro-organismos de acordo com a consistência do meio? 
O crescimento no meio líquido pode ser observado da seguinte maneira, sem crescimento a água fica límpida e com crescimento ela fica turva. 
O crescimento no meio sólido pode ser observado a partir da sua consistência e formação de colônias. 
5) Caracterize uma colônia bacteriana. 
Uma colônia = bilhões de bactérias que se originaram de uma única célula bacteriana, ou seja, a bactéria vai se multiplicando até formar uma colônia que pode ser observada pela sua quantidade, consistência e volume. 
6) Os meios de cultura também podem ser classificados com relação à sua composição química (meio complexo, de enriquecimento, quimicamente definido, redutor, seletivo e diferencial). Descreva, exemplifique e dê a finalidade de uso de cada um destes meios. 
Quando a composição química os meios de cultura são classificados como simples (meios básicos) ou complexos.
Básicos são aqueles que permitem o crescimento bacteriano, sem satisfazer nenhuma exigência em especial e especiais ou complexos quando cumprem com as exigências vitais de determinados microrganismos.
7) Para que se obtenha um crescimento bacteriano adequado às necessidades, além do meio de cultura, deve-se observar a maneira da semeadura. Descreva e dê a finalidade de cada uma das maneiras de semeadura. 
1-Estria sinuosa: semear com alça ou agulha bacteriológica, em zig-zag, partindo da base para a extremidade do bizel (superfície inclinada do meio). 
Objetivo: obtenção de intensa massa de microorganismos.
2-Estria Reta: semear com agulha bacteriológica, fazendo uma linha reta, com cuidado de não ferir o Agar, partindo da base para a extremidade do bizel (superfície inclinada do meio). 
Objetivo: obtenção de pequena massa de microorganismos.
3-Picada Central: semear com agulha bacteriológica, no centro do Agar. Dependendo da finalidade, o inóculo deve penetrar até 2/3 do tubo ou até o fundo deste. 
Objetivo: é utilizado para verificar fermentação e motilidade em algumas técnicas.
4-Picada em Profundidade: semear com agulha bacteriológica, no centro do Agar. Dependendo da finalidade, o inóculo deve penetrar até 2/3 do tubo ou até o fundo deste. 
Objetivo: é utilizado para verificar fermentação e motilidade em algumas técnicas.
5-Pour-plate ou disseminação (método em profundidade): Transferir 1 ml da cultura para placa de Petri vazia, colocar 10 – 20 ml do meio fundido (e resfriado a cerca de 45 – 50°C) sobre a cultura e homogeneizar suavemente com movimentos circulares.
Objetivo: contagem bacteriana. É utilizado também para análise de microorganismos anaeróbios, adicionando uma outra camada de meio fundido após o endurecimento da primeira camada.
6-Estria simples: transferir uma alçada da cultura para meio sólido em placa e estriar com a alça bacteriológica sobre o meio. A estria pode ser realizada em movimento de zig- zag (estria sinuosa) ou como uma linha reta sobre o meio (estria reta). 
Objetivo: Essa técnica é muito utilizada para visualização de determinadas propriedades metabólicas, como a produção de enzimas hidrolíticas (hidrólise de substâncias do meio - gema de ovo, sangue...), e produção de pigmentos.
7-Esgotamento em estrias ou estrias múltiplas: transferir uma alçada da cultura para meio sólido em placa e estriar com a alça bacteriológica sobre o meio. A placa é dividida em 4 quadrantes e a inoculação pode ser feita de 2 tipos:
• 3 estrias: estriar em metade da placa, com movimentos de zig-zag. Quando atingir a metade, girar a placa 90° e estriar até a metade (1/4 da placa), girar mais 90° e estriar o meio restante. 
• 4 estrias: estriar até 2/3 da metade da placa, girar 90°, estriar 2/3 do próximo quadrante (1/4 da placa), girar 90°, estriar mais 2/3 do próximo quadrante (1/4 da placa), girar 90° e estriar o restante do meio.
Objetivo: obtenção de colônias isoladas. É importante não cruzar as estrias (não tocar a alça na estria anterior), para reduzir o inóculo a cada estria e obter as colônias isoladas. Pode-se, alternativamente, flambar a alça entre as estrias e tocar a ponta da estria anterior, arrastando um pequeno inóculo para a próxima estria.
8-Spread-plate ou distensão: Transferir 0,1 ml da cultura para o meio sólido na placa e espalhar uniformemente com a própria ponta da pipeta, ou alça bacteriológica / swab / alça Drigalsky.
Objetivo: obtenção de crescimento confluente, ou para contagem bacteriana. Esta técnica é muito utilizada na realização de antibiogramas.
9-Difusão: uma alçada da colônia (Agar em placa) ou da cultura (de outro meio ou líquido) é introduzida no meio líquido, com agitação da alça, para maior difusão dos microorganismos (da alça para o meio e homogeneização no meio). Pode-se inclinar o tubo a 30° e esfregar o inóculo na parede do mesmo, quando o tubo retornar à posição original o inóculo se difundirá no meio. 
Objetivo: é um repique genérico para crescimento bacteriano em meio líquido.
8) Uma das maneiras de classificação bacteriana bastante utilizada em laboratórios é a coloração de Gram. Sobre o método responda: 
a) Qual a sequência de eventos da coloração? 
1- Aplicação de cristal violeta(corante púrpura);
2- Aplicação de iodo(mordente);
3- Lavagem com alcóol(descoloração);
4- Aplicação de safranina(contracorante).
b) Que propriedade estrutural bacteriana possibilita a coloração diferencial do método?
Nas bactérias Gram-positivas o corante primário (roxo) é mantido por causa do peptídeoglicano. Já nas bactérias Gram-negativas com parede celular composta predominantemente os lipopolissacarídeos e lipoproteínas fazem com que assumam a cor do corante de fundo (vermelha).
 c) Qual o resultado obtido ao final da coloração nos diferentes tipos bacterianos (gram-positivos e gram-negativos)?
Gram-positivos ficam com a coloração roxa e as Gram-negativas ficam com a coloração avermelhada.