P5 Coloração de Gram

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CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – CCS 
Departamento de Microbiologia e Parasitologia 
Disciplina de Microbiologia Geral 
 
 
 
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Prof. Daniel Roulim Stainki 
UFSM 
AULA PRÁTICA 05 – COLORAÇÃO DE GRAM. 
 
 A) Material necessário: 
- Lâmina para microscopia; 
 - lápis para vidro; 
- alça e agulha de platina; 
- solução salina ou água destilada; 
- cultura de bactérias; 
- óleo de imersão, papel absorvente; 
- suporte para lâminas; 
- lamparinas e isqueiro; 
- Cristal violeta; 
- Solução álcool-acetona 
- Fucsina de Ziehl (safranina); 
- Pote para descarte das lâminas. 
 
B) Fundamentação teórica: 
Coloração de Gram é uma técnica de coloração para diferenciação de 
microorganismos através das cores, sendo um dos procedimentos de coloração mais úteis, 
pois classifica as bactérias em dois grandes grupos: Gram-positivas ou Gram-negativas, 
para serem observadas ao microscópio óptico. A técnica recebeu este nome em 
homenagem ao bacteriologista dinamarquês Hans Cristian Gram, seu criador. 
Essa técnica permite a separação de amostras bacterianas em gram-positivas e 
Gram-negativas baseando-se na composição da parede bacteriana, e permitindo 
determinar a morfologia e o tamanho das bactérias analisadas. 
A coloração de Gram é um dos mais importantes métodos de coloração utilizados 
em laboratórios de microbiologia e de análises clínicas, sendo quase sempre o primeiro 
passo para a caracterização de amostras de bactérias. A técnica tem importância clínica 
uma vez que muitas das bactérias associadas a infecções são prontamente observadas e 
caracterizadas (Gram-positivas ou Gram-negativas) em esfregaços de pus ou de outros 
fluidos orgânicos. Essa informação permite ao clínico monitorar a infecção até que dados 
de cultura estejam disponíveis. Porém, esta coloração não se aplica para micoplasmas, 
bactérias desprovidas de parede, micobactérias pela presença de muitos lipídios insolúveis 
na parede e espiroquetas pela estrutura muito delgada e pouco permeável aos corantes. 
 
 
 
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Prof. Daniel Roulim Stainki 
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C) Princípios da técnica: 
 
O mecanismo da coloração de Gram se refere à composição da parede celular, 
sendo que as bactérias Gram-positivas possuem uma espessa camada de peptideoglicano e 
ácido teicóico, e as bactérias Gram-negativas uma fina camada de peptideoglicano, sobre a 
qual se encontra uma camada composta por lipoproteínas, fosfolipídeos, proteínas e 
lipopolissacarídeos. Durante o processo de coloração, o tratamento com álcool (ou álcool-
acetona) extrai os lipídeos, resultando em uma porosidade ou permeabilidade aumentada 
da parede celular das bactérias Gram-negativas. Assim, o complexo cristal violeta-iodo 
pode ser retirado e as Gram-negativas são descoradas. A parede celular das bactérias 
Gram-positivas, em virtude de sua composição diferente, torna-se desidratada durante o 
tratamento com álcool (ou álcool-acetona), a porosidade diminui, tendo a sua 
permeabilidade reduzida, fazendo com que o complexo cristal violeta-iodo não possa ser 
extraído. 
 
D) Procedimento de coloração: 
 
 1.Confeccionar o esfregaço; 
 2.Corar com cristal violeta por 60 segundos; 
 3.Lavar com esguicho de água destilada; 
 4.Cobrir com Iodo de Gram ou Lugol por 60 segundos; 
 5.Lavar com esguicho de água destilada; 
 6.Descorar com solução de álcool-acetona (10-20 segundos); 
 7.Lavar com esguicho de água destilada; 
 8.Corar com Fucsina ou safranina de 30 a 60 segundos; 
 9.Lavar com água destilada; 
 10.Secar e observar ao microscópio (objetiva de imersão). 
 
E) Objetivos: 
 
Os resultados, após a coloração de Gram, permitem classificar as bactérias em dois 
grupos: 
 
 
 
 
 
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- Desenhe e descreva o que foi observado em aula. 
 
 
 
 
 
 
 
 
DESCRIÇÃO: 
Coradas em roxo Coradas em vermelho