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25/08/14 1 Histotecnologia & Generalidades dos tecidos Ciência Morfofuncional Prof. Marcos Ribeir ribeiromb@hotmail.com Histotecnologia e Generalidade dos Tecidos PREPARO PARA ESTUDO HISTOLÓGICO ETAPAS FINALIDADES DURAÇÃO 1- FIXAÇÃO (por imersão ou perfusão) Preservar a morfologia e a composição dos tecidos Cerca de 12h 2- DESIDRATAÇÃO em álcool etílico de [ ] crescentes:70% até o absoluto Remover água dos tecidos 6 a 24 h 3- CLAREAMENTO ou DIAFANIZAÇÃO em benzol, xilol ou toluol (solventes do álcool e da parafina) Embeber a peça em substância miscível com a parafina 1 a 6h 4- IMPREGNAÇÃO pela parafina fundida A parafina penetra nos vasos, espaços e dentro das células para facilitar o corte 30 min a 6 h 5- INCLUSÃO, a peça é colocado no molde retangular contendo parafina fundida. Obtenção do bloco de parafina. 6- FATIAR no micrótomo Fatias com diâmetro de 6 a 12 µm (micrômetro) (1µm = 0,001 milímetro) 7- COLORAÇÃO * PROXIMA TABELA 8- MONTAGEM Identificação do material, proteção da lâmina com laminula Diafanização Fixação - Processo físico - Criopreservação Criostato Fixação - Processo químico - formol 25/08/14 2 Corte no Micrótomo Lâmina com cortes parafinizados xilol 100 90 70 50 água H E 50 70 90 100 xilol álcoois (graus GL) lâmina Montagem (colocação do bálsamo e da lamínula) Lâmina pronta para observação álcoois (graus GL) Bateria de reagentes Microscópios Diafanização Microscopia óptica Observação das estruturas acidófílas e basófílas Macrófago alveolar fagocitando E. coli na superfície do vaso sanguíneo da cavidade pleural (M.E. varredura) 25/08/14 3 Membrana elástica interna de uma arteríola M.E. de transmissão. CÉLULA EPITELIAL PAVIMENTOSA CÚBICA CILÍNDRICA COLUNAR CITOMETRO Pode identificar diferentes parâmetros das células Granulosidade Tamanho Marcadores/moléculas citoplasmáticas e de membrana DNA FACScan Fluorescence Activated Cell Scanner = varredorura FACSorter Fluorescence Activated Cell Sorter = seletora CONJUNTIVO PROPRIAMENTE DITO DENSO FROUXO Tecido mucoso Tecido adiposo Tecido elástico Tecido reticular C O N J U N T I V O S E S P E C I A I S TECIDO CARTILAGINOSO HIALINA ELÁSTICA FIBROCARTILAGEM 25/08/14 4 TECIDO ÓSSEO hemácias plaquetas neutrófilo eosinófilo basófilo monócito linfócito (grande) ELEMENTOS - Sangue - TECIDO MUSCULAR ESTRIADO ESQUELÉTICO FIBRAS EM CORTE LONGITUDINAL FIBRAS EM CORTE TRANSVERSAL TECIDO MUSCULAR ESTRIADO CARDÍACO FIBRAS EM CORTE LONGITUDINAL TECIDO MUSCULAR LISO em corte Transv. em corte Longit. TECIDO NERVOSO 25/08/14 5 Bibliografia: Lillie, R. D., 1954.- Staining procedures used by biological Stain commission of the University of Rochester medical Center - NY. 2 nd. Edition, 1960. De. The Williams ad Wilkins Company Histologia texto e atlas Ross e Rowrell – 2ª edição 1993 - Ed. Panamericana Histologia de Stevens e Lowe, 1995, Ed. Manole. Histologia Basica de Junqueira, 1996, Ed. Guanabara Koogan Histologia Funcional de Wheater, Burkitt. 1996, Guanabara Koogan http://www.mhhe.com/biosci/ap/dynamic_human/gifs/dh1.gif http://micro.magnet.fsu.edu/primer/lightandcolor/refraction.html
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