aula Diagnostico HIV

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RESPOSTA DE ANTICORPOS
 Especificidade
Habilidade do Ac distinguir seu imunógeno de outros Ag.
 Quantidade
N° de células B x taxa de síntese do Ac x persistência após sua produção.
 Isotipo
Determina a persistência (meia vida in vivo diferente). 
A composição determina a função dos Ac e os locais onde são encontrados.
 Afinidade
Força de ligação do Ag com o Ac, em um único sítio. Quanto maior a afinidade entre Ac e Ag, menos Ac será necessário.
 Avidez: força total de ligação, nos dois sítios.
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INTERAÇÕES
 Reações reversíveis.
 Ligações não covalentes:
Pontes de hidrogênio
Interações hidrofóbicas
Interações de Van der Waals
Ligações iônicas
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Fatores a serem analisados na escolha do método:
Sensibilidade;
Especificidade (confiabilidade de resultados);
Custo;
Disponibilidade de material;
Segurança;
Aplicabilidade à amostra disponível, Ag/Ac a ser detectado e espécie animal a ser analisada;
Tempo de realização do método.
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Ensaio Imunoadsorvente 
Ligado à Enzima - ELISA
O teste identifica e quantifica Ag ou Ac, utilizando um dos dois conjugados com enzimas. 
O produto final corado surge por ação da enzima que converte um substrato incolor em um produto colorido (ou o substrato alterado pela enzima induz mudança de cor de uma substância indicadora). 
A quantidade de Ag ou Ac produto final corado, através de leitura em fotocolorímetro. 
Principais tipos de ELISA: indireto, sanduíche, competição e captura. 
Fosfatase alcalina
Peroxidase
B-galactosidase
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TIPOS DE ELISA: Direto e Indireto
PLACA UTILIZADA
 Vantagens:
 Teste de alta sensibilidade
 Permite quantificar Ag ou Ac das amostras
 Seguros e de baixo custo
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 ELISA Indireto
 ELISA Direto ou Sanduíche 
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ânodo (-)
 Proteínas (-)
Cátodo (+)
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Eletroforese
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Eletroforese
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Eletroforese
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WESTERN BLOTTING
Eletroforese de proteínas.
Identifica antígenos ou anticorpos. 
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WESTERN BLOTTING 
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WESTERN BLOTTING 
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1) Ensaios de triagem: desenvolvidos para detectar todos os indivíduos infectados, ou
2) Ensaios confirmatórios: desenvolvidos para identificar os indivíduos que não estão infectados, mas têm resultados reativos nos ensaios de triagem. 
Os testes de triagem possuem um alto grau de sensibilidade,
enquanto os testes confirmatórios possuem um alto grau de
especificidade. 
Testes com alta sensibilidade produzem poucos resultados falso-negativos, enquanto os testes com alta especificidade produzem poucos resultados falso-positivos.
Os testes para detectar anticorpos anti-HIV podem ser classificados como:
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‘Janela Imunológica’
HIV			22 dias
HBV			60 dias
HCV			80 dias
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Risco Residual de transmissão de doença pela transfusão
HIV		1: 3 000 000
HBV		1: 500 000
HCV		1: 100 000
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Fatores biológicos que causam resultados falso-positivos na
pesquisa de anticorpos anti-HIV
- Artrite reumatóide;
Doenças auto-imunes, como lupus eritematoso sistêmico, doenças 
do tecido conectivo e esclerodermia;
- Colangites esclerosante primária;
- Terapia com interferon em pacientes hemodialisados;
- Síndrome de Stevens-Johnson;
- Anticorpo anti-microssomal;
- Anticorpos HLA (classe I e II);
- Infecção viral aguda;
- Aquisição passiva de anticorpos anti-HIV (de mãe para filho);
- Neoplasias malignas;
- Outras retroviroses;
- Múltiplas transfusões de sangue;
- Anticorpos anti-músculo liso.
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- Todos os laboratórios que realizam testes para detecção de anticorpos anti-HIV para o diagnóstico laboratorial deverão adotar, obrigatoriamente, a realização de um imunoensaio, nesta primeira etapa de testes de qualquer amostra de soro ou plasma. 
- O imunoensaio utilizado não poderá ser de avaliação rápida (teste rápido) e deverá ser capaz de detectar anticorpos anti-HIV-1 e anti-HIV-2.
Etapa I - Triagem Sorológica
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Etapa II - Confirmação Sorológica
- O Ministério da Saúde colocará a disposição dos laboratórios públicos o ensaio confirmatório de Imunofluorescência Indireta.
- Os laboratórios que não dispuserem deste teste deverão realizar o teste de Imunoblot ou o teste de Western blot.
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Etapa III - Confirmação Sorológica pelo Teste Western blot (WB)
Para interpretação do teste Western blot, deverão ser observados os seguintes critérios:
·Amostra não-reagente: ausência de bandas
·Amostra reagente: presença de, no mínimo, 2 (duas) bandas dentre as: gp 160/120; gp 41; p24.
Amostra indeterminada: qualquer outro padrão de bandas diferente dos descritos anteriormente.
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DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO – O WESTERN BLOT CONFIRMA O DIAGNOSTICO
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Marcadores da infecção do HIV
 
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