Aula 3 - Métodos Citoquimicos de Estudo das Células Slide Citologia

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Métodos citoquímicos de 
estudo das células 
Preparação de material biológico 
para microscopia de luz 
Citologia– aula 3 
Thaís Furtado Nani 
Universidade Federal de Lavras 
2012 
Análise in vivo Análise in vitro 
Observação 
imediatamente após a 
coleta 
Observação posterior à 
fixação (morte) 
Estudo de fenômenos 
dinâmicos 
Estudo de fenômenos 
estáticos 
Lâminas provisórias Lâminas permanentes 
ou semi permanentes 
Porque fixar o material? 
• Volume grande de material a ser avaliado; 
• É necessário o armazenamento – comparação do 
comportamento do material em diferentes épocas 
do ano; 
• Material proveniente de outras regiões, estados ou 
países; 
• Protocolos que danificam o preparo in vivo. 
O que as analises possuem em 
comum? 
• Corte fino • Contraste – corantes* 
 
Coleta 
Imediatamente antes da observação 
Pedaços pequenos: 0,5 cm, 
Limpeza 
Amostragem significativa. 
Preparo das lâminas - Análise in vivo 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Coleta Cortes 
- Cortes manuais 
- Ultrafinos 
- Transparentes 
Preparo das lâminas - Análise in vivo 
Tipos 
 
Uso de meio de inclusão 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Coleta Cortes 
Preparo das lâminas - Análise in vivo 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Coleta Cortes Coloração 
Preparo das lâminas - Análise in vivo 
Tipos de corantes 
• Ácidos componentes básicos 
 
• Básicos  componentes ácidos (Feulgen) 
 
• Neutros  neutros 
 
• Indiferentes 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Coleta Cortes Coloração 
Montagem 
da lâmina e 
observação 
Preparo das lâminas - Análise in vivo 
Preparo das lâminas - Análise in vivo 
Montagem de lâmina provisória: meios de 
montagem: solução fisiológica, água, água 
glicerinada, glicerina, corantes vitais. 
Preparo das lâminas - Análise in vitro 
1. Coleta do material: 
 
- isolamento do material 
- limpeza: solução fisiológica (célula animal) 
 água, hipoclorito ou dispensável (célula vegetal) 
- época/local da coleta 
- nº de indivíduos amostrados 
 
 
Preparo das lâminas - Análise in vitro 
Preparo das lâminas - Análise in vitro 
Preparo das lâminas - Análise in vitro 
• 2. Fixação: 
 
- Matar e estabilizar as estruturas celulares – evita 
autólise. 
- Escolha do fixador: 
• poder de penetração; capacidade de causar morte 
imediata; não alterar morfologicamente; boa 
conservação do material. 
• Fixadores: formol, álcool, tetróxido de ósmio, ácido 
acético, Carnoy. 
Preparo das lâminas - Análise in vitro 
Preparo das lâminas - Análise in vitro 
3. Desidratação: série alcoólica crescente (~1 h cada) 
 
 
 
 
 
 
4. Clarificação ou diafanização: xilol, benzeno, tolueno 
 
 
Preparo das lâminas - Análise in vitro 
70% 80% 90% 100% 
Preparo das lâminas - Análise in vitro 
5. Emblocamento: embeber o material em ceras 
ou resina (líquida)  resfriamento 
Preparo das lâminas - Análise in vitro 
Preparo das lâminas - Análise in vitro 
6. Microtomia: cortes – 2 e 10 m 
Preparo das lâminas - Análise in vitro 
Preparo das lâminas - Análise in vitro 
7. Coloração 
 
8. Montagem das lâminas e observação 
 (vedar lâmina com lamínula) 
 
- Lâmina permanente: resina - Bálsamo do Canadá ou 
Entellan 
 
- Lâmina semi-permanente: meio líquido - glicerina ou 
xarope de Apathi - lutagem 
Preparo das lâminas - Análise in vitro