Aula 7 - Microscopia Eletrônica Slide Citologia

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MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
Citologia – aula 7 
Thaís Furtado Nani 
Universidade Federal de Lavras 
2013 
No microscópio de luz: 
 
Objetiva 100x: LR = K .  = 0,612. 0,55 = 0,27µm 
 AN 1,25 
 
Importância do Microscópio Eletrônico 
Importância do Microscópio Eletrônico 
Material Tamanho médio 
Bactéria 1-2 µm 
Célula animal 10 – 20 µm 
Célula vegetal 50 µm 
Núcleo 3-6 µm 
Ribossomo 0,025µm - 25 nm 
Membrana 0,01µm - 10 nm 
Vírus HIV 0,13µm - 130 nm 
Limite de resolução da 
objetiva de 100X: 
 
0,27µm 
(270 nm) 
 
- No microscópio de luz: 
 
Objetiva 100x: LR = K .  = 0,612. 0,55 = 0,27µm 
 AN 1,25 
 
Importância do Microscópio Eletrônico 
-No microscópio eletrônico: 
 
LR = 0,02µm = 2 nm = 0,2 Å 
100 vezes menor que o do microscópio de luz 
- luz visível: 700 e 400nm 
- UV: <400nm 
- elétrons: 0,004nm 
• Olho nú- 0,1mm 
• Microscopia de luz- 0,27µm - 270nm 
• MEV- 10 0A 
• MET- 1- 2 0A 
 
Objetiva 
Amostra 
Observador 
 
Ocular 
 
 
 
 
Objetiva 
Amostra 
 
 
Condensador 
 
Fonte de luz 
Caminho da luz X Caminho do elétron 
Microscópio de luz 
Microscópio eletrônico 
de varredura 
Microscópio eletrônico 
de transmissão 
Esquema de uma “lente eletrônica” gerada por um 
solenóide excitado por uma corrente elétrica. Note que 
a trajetória dos elétrons sofre também uma rotação 
Elétron primário 
Elétron secundário 
Catodoluminescência 
Transmitidos 
Retro-espalhados 
Raio X 
Espécime 
e primário 
e secundário 
e Retoesp. 
Raio X 
Interação elétron/amostra 
MEV 
MET 
Tipos de imagens 
Preparo de amostras biológicas MEV 
• Coleta 
• Fixação 
• Pós fixação 
• Desidratação 
• Secagem ao ponto crítico 
• Adesão aos stubs e metalizar 
• Avaliação 
Preparo de amostras biológicas MEV 
Preparo de amostras não metálicas 
para MEV 
• Amostras não metálicas, mas rigídas como 
plásticos, minerais, materiais biológicos 
rígidos(insetos, pólen, madeira etc) 
 
• Colar nos stubs e metalizar 
Preparo de amostras biológicas MET 
• Coleta 
• Fixação 
• Pós-fixação ósmio: contrastação 
• Desidratação 
• Embebimento em resina 
• Resina 30%overnight 
• Resina 50%/8h 
• Resina 70% overnight 
• Resina 100% / 24h 
• Resina 100%/24-72h à 650 C 
• Preparo das amostras emblocadas 
• Cortes ultra-finos 
• Telas: segunda contrastação 
• Avaliação 
Detalhe de uma telinha de cobre com película de plástico e secções. 
Núcleo da célula 
Poro nuclear 
Cloroplasto 
Mitocôndria 
Complexo de Golgi 
Tricoma glandular 
Estômato 
Microscópio eletrônico de tunelamento 
• Moléculas 
- Uso de agulha 
Histórico Microscopia 
• 1590- Janssens – Microcopia de luz- 20-30X 
 
• Sec. 18/19-M. composto- HOOKe- 300X 
• 1873-Abbe e Hellmotz- LR  
• 1924-Broglie elétrons-onda 
• 1929 –Bush – lentes eletrônicas 
• 1930-primeiro MET Ardenne, Ruska-Knoll-Berlin 
• 1939-primeiro MET comercial –Siemens 
• 1945-1950- desenv,. MET Alemanha, Holanda, 
França, Inglaterra, EUA, Japão (Pesquisa) 
• 1965- MEV- pesquisa 
 
375 anos