Aula 5_ Microscopia eletrônica de transmissão e varredura

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Citologia 
Microscopia eletrônica de transmissão e 
varredura 
Conjunto de técnicas com o objetivo de obter imagens de 
altíssima resolução impossíveis de se obter com a microscopia 
de luz. Possuem diferentes processamentos dos materiais 
biológicos. 
 
Contexto histórico 
1931 primeiro microscópio eletrônico 
1935 primeira imagem de varredura de amostra não biológica 
1937 Siemens patenteou o microscópio eletrônico e financiou 
esse tipo de microscopia 
1937 Manfred Von Ardenne, estudo da interação molecular 
usando essa microscópio 
1952 Uso prático 
1965 Primeiro microscópio de varredura comercial 
1986 Prêmio Nobel da Física pelo microscópio eletrônico 
 
Limites de resolução 
O limite de resolução da microscopia eletrônica é 
extremamente baixo, sendo possível perceber dois pontos 
como diferentes mesmo estando a uma fração de nanômetro 
de distância. Um pulo enorme em relação a microscopia de luz, 
permitindo ver vírus e moléculas. 
 
MET Microscópio Eletrônico de Transmissão 
Fonte que emite elétrons passa pela lente condensadora, 
atravessa o espécime, os elétrons que atravessam são capazes 
de passar pelas lentes objetivas e de projeção formando uma 
imagem em um anteparo fluorescente. (As lentes possuem 
uma corrente eletro-magnetica (atuam como bobinas) e são 
metálicas. 
 
Formação da imagem 
O elétron pode não desviar (quando não há amostra), sofre um 
desvio elástico (quando não há perda de energia, mas um 
pequeno desvio) e inelástica (quando há uma certa pequena 
de energia) 
 
Preparo da amostra 
Fixação, pós-fixacao, Desidratação com acetona, Emblocado e 
poliremizado, cortes ultra-finos, contratação , observação ao 
microscopio. 
 
MEV Microscópio eletrônico de varredura 
Possui também um canhão com filamento de tungstênio que 
atira elétrons, utilizando detectores para captar os elétrons que 
são retroespalhados, tornando-se capaz de criar uma imagem 
tridimensional da superfície da amostra. Uso de amostras 
íntegras. 
 
Preparação de amostra para MEV 
Fixação, pós-fixacao, desidratação com acetona, ponto crítico 
(eliminando toda a água e oxigênio da amostra), metalização 
com ouro e observação ao microscópio. 
 
Observação 
Os dois microscópios (incluindo o local onde fica a amostra) 
está completamente preenchido pelo vácuo para evitar a 
dispersão aleatória de elétrons. Isso impede o uso de amostras 
vivas.