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Técnicas de Concentração 
EPF 
Profa. Débora Pedroso
INSTITUTO CENECISTA DE ENSINO SUPERIOR DE SANTO ÂNGELO
CURSO DE BIOMEDICINA
PARASITOLOGIA CLÍNICA
Técnicas de concentração
princípios
flutuação
centrífugo- flutuação
sedimentação
centrífugo- sedimentação
Faust 
Ritchie
HPJ
Willis
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Objetivos 
aumentar o nº de cistos, oocistos, ovos ou larvas na preparação
eliminar a maioria dos detritos fecais
apresentar os organismos em um estado inalterado, facilitando sua identificação
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Técnicas de flutuação
baseiam-se na diferença de densidade específica entre os ovos de helmintos, cistos e oocistos de protozoários e o material fecal, a fim de que esses organismos flutuem na superfície dos reagentes com densidade específica
ovos pesados, como os de Ascaris, Taenia, Schistosoma e Fasciola podem não flutuar
alguns cistos e larvas são distorcidos
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as gorduras e óleos presentes nas fezes também flutuam, tornando a preparação algumas vezes insatisfatória para o exame
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Técnica de Willis
fundamenta-se na dupla propriedade que apresentam certos ovos de helmintos de flutuarem na superfície de uma solução de densidade elevada e de aderirem ao vidro
indicada para ovos de baixa densidade específica, como os de ancilostomídeos não é recomendada para os ovos pesados de trematódeos, ovos de E. vermicularis e ovos inférteis de A. lumbricoides
os cistos de protozoários podem se retrair, ficando irreconhecíveis
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Utiliza solução saturada de cloreto de sódio com densidade 1,20 g/mL (aproximadamente 40 g de NaCl em 100 mL de água)
A flutuação dos ovos não se realiza em menos de 30 minutos ou mais que 60 minutos.
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Técnica de Faust e cols.
apropriada para o diagnóstico de cistos, ovos e larvas
imprópria para espécimes com grande quantidade de gorduras
utiliza-se ZnSO4 com densidade 1,18 g⁄mL para amostras frecas e 1,20 g⁄mL para amostras preservadas com formaldeído
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Técnicas de Sedimentação
objetivam o aumento do nº de ovos, larvas e cistos e a separação das gorduras e óleos da maioria dos detritos
as estruturas parasitárias são retidas no fundo do tubo, ao contrário das técnicas de flutuação
maior desvantagem: grande quantidade de detritos fecais no sedimento
numerosas técnicas foram desenvolvidas por diversos autores
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Técnica de Lutz ou de Hoffman,
 Pons e Janer (HPJ)
indicada para ovos, larvas e cistos
fundamenta-se na sedimentação espontânea em água
o uso de grande quantidade de material fecal, quando em comparação com as outras técnicas, favorece um diagnóstico satisfatório e seguro, mesmo quando o nº de organismos é pequeno  maior sensibilidade
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necessidade mínima de vidraria, dispensando o uso de reagentes e centrífuga  baixo custo
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Desvantagens:
grande quantidade de detritos fecais no sedimento
mais lenta
cálices de sedimentação ocupam grande espaço no laboratório
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Técnica de Ritchie
eficiente para cistos, ovos e larvas
apresenta como desvantagem a utilização de solvente orgânico (éter, acetato de etila ou até mesmo gasolina, conforme alguns autores)  solubiliza as gorduras
mais cara que o HPJ, mas mais rápida e ocupa menos espaço
utiliza quantidades menores de amostra (1 a 2 g X 5 a 10 g)
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Procedimento
Diluir 1-2 g de fezes em recipiente adequado, com 10 mL de água.
Filtrar a suspensão em gase ou parasitofiltro
Centrifugar (650 x g/ 1 min)
Descartar o sobrenadante. Se este estiver muito turvo, repetir a etapa da centrifugação.
Ressuspender e completar o volume de 10 mL com formalina 10%.
Deixar em repouso por 5 min.
Adicionar 3 mL de acetato de etila, fechar o tubo e agitar vigorosamente por 30 segundos. 
 cuidado, o solvente volátil leva ao aumento da pressão no interior do tubo
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Centrifugar (650 x g/1 min). Quatro camadas se formarão: sedimento do fundo do tubo, contendo os parasitas; formalina; detritos fecais; camada de éter na superfície.
Afrouxar e separar o tampão de detritos das paredes do tubo. Decantar, com cuidado, as três camadas superiores. Limpar o tubo com swab de algodão.
Avaliar o sedimento.
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1 – sedimento contendo os parasitos; 2 – formalina; 3 – tampão de detritos fecais; 4 – solvente orgânico + gorduras
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Resumindo...
HPJ
Ritchie
Faust
sensibilidade
é importante que cada laboratório selecione e implemente a metodologia mais apropriada a sua rotina (demanda, espaço físico, pessoal técnico, custo etc.), desde que a técnica seja executada com QUALIDADE
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