pratica gram tac 27

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Microbiologia 
 Tac 27 
 
Protocolo de aula prática 
 
 
 
Coloração de Gram 
 
 
É o método de coloração mais empregado em bacteriologia, desenvolvido por Hans 
Christian Joachim Gram em 1884 , sendo um procedimento de filtro digamos assim , porque te 
dar parâmetros (dica/norte a seguir) para a classificação de bactérias em dois grandes grupos, 
bactérias GRAM + e GRAM – através da capacidade que as mesmas tem de reter 
(segurar,prender) a coloração . O método consiste em tratar sucessivamente um esfregaço 
bacteriano, fixado pelo calor, com os reagentes cristal violeta, lugol, etanol-acetona (álcool) e 
fucsina básica. 
 
Objetivo 
 
Identificação de bactérias gram positivas e gram negativas. 
 
Princípio 
 
O método da coloração de Gram é baseado na capacidade das paredes celulares de bactérias 
Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento com 
etanol-acetona enquanto que as paredes celulares de bactérias Gram-negativas não o fazem. 
 
 
 
Soluções/reagentes utilizados 
 
CRISTAL VIOLETA : corante principal ( cora igualmente todas as bactérias ) . 
 
LUGOL : mordente (aumentar a afinidade do corante pela célula). 
 
 ÁLCOOL ETÍLICO : agente descorante e diferenciador. 
 
FUCSINA DILUÍDA : corante de contraste, corante secundário ou contracorante. É o corante 
para gram negativas. 
 
 
 
Técnica 
 
1. Identificar lâmina de vidro com os dados do paciente. 
 
2. Fazer o esfregaço com a amostra do paciente na lâmina . 
 
3. Deixar secar e passar 3 vezes rapidamente pelo bico de busem . 
 
4. Cobrir o esfregaço já fixado com solução de Cristal Violeta por um (1) minuto. 
 
5. Escorrer o cristal violeta, lavar em água (sem deixar tocar a lâmina diretamente) . 
 
6. Cobrir o esfregaço com Lugol por um (1) minuto. 
 
7. Escorrer o lugol, lavar em água . 
 
8. Descorar rapidamente com Álcool Etílico ( +/- 20 segundos). 
 
9. Interromper o processo de descoramento lavando o esfregaço com água. 
 
10. Cobrir o esfregaço com Fucsina diluída por 30 segundos.(podendo estender por até 1 
minuto)* 
 
11. Lavar e secar tirar o excesso com papel toalha, deixar secar. 
 
12. Colocar uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço e observar ao microscópio, 
utilizando a objetiva de imersão. 
 
 
 
Conclussão / resultado 
 
GRAM POSITIVAS : bactérias coradas em roxo ( cor do cristal violeta ) . 
GRAM NEGATIVAS : bactérias coradas em vermelho ( cor da fucsina ) . 
 
 
PS. : Bactérias gram positivas tem maior quantidade de peptidioglicanos na composição da 
menbrana ,logo o álcool as desidrata impedindo que o corante saia. Já as bactérias gram 
negativas tem peptidioglicano em sua composição de membrana ,mais , em pequena 
quantidade, sendo mais abundante em sua composição os lipídios , logo o álcool os remove 
então a célula bacteriana perde em partes sua proteção , facilitando a saída do corante.