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Prof. Elizangela Leite Vargas UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MATO GROSSO DO SUL CURSO: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS DISCIPLINA: BIOLOGIA MOLECULAR NÚCLEO O que vocês sabem sobre o NÚCLEO? NÚCLEO É a principal característica da célula eucarionte. Ocupa 10% do volume celular total. Contém a maior parte da informação genética da célula, acumulada no DNA. Funções: - Armazenar informação genética da célula; - Controlar o metabolismo celular pela transcrição do DNA nos diferentes tipos de RNA. Os RNAs são traduzidos em proteínas, os efetores finais da informação genética. 46 cromossomos, formados por uma única molécula de DNA combinado a proteínas; Várias classes de RNA; nucléolo – proteínas, genes codificadores de rRNA e rRNA recém sintetizados; No envoltório encontra-se os poros – comunicam o interior do núcleo com o citosol; Diversas proteínas DENTRO DO NÚCLEO O ciclo de vida da célula é dividido em duas fases principais: a mitose e a interfáse. Na mitose ocorre a divisão da célula. A interfase é o período entre duas divisões. De acordo com a fase, distingue-se o núcleo interfásico e o núcleo mitótico. Na Interfáse o DNA, pode estar: - autoduplicando-se, por meio da replicação; - transcrevendo-se em moléculas de RNA, que serão traduzidas em proteínas. Em geral, o núcleo é único e localiza-se no centro da célula. Na célula vegetal, entretanto o núcleo é periférico devido à presença do grande vacúolo. A forma do núcleo tende acompanhar a forma da célula. O tamanho do núcleo pode variar. No núcleo interfásico podem-se distinguir os seguintes componentes: - Envoltório nuclear; - Cromatina; - Nucleoplasma; - Nucléolo. Organização Estrutural do Núcleo Organização Estrutural do Núcleo Envoltório Nuclear Separa o conteúdo do núcleo do citoplasma; Tem estrutura complexa, constituída por duas unidades de membrana, limitando uma cavidade, a cisterna perinuclear. A membrana interna tem na face nucleoplasmática, um espessamento chamado lâmina nuclear. A membrana externa tem na face citoplasmática ribossomos ligados e apresenta continuidade com o RER. O envoltório nuclear é uma porção especializada do RE. As membranas tem 30% de lipídios e 70% de proteínas. O envoltório nuclear não é contínuo, como as demais membranas biológicas. É interrompido por poros, que se formam pela fusão da membrana nuclear interna e externa – permitindo o trânsito de macromoléculas. Esses poros são uniformemente espaçados. Envoltório Nuclear O intercâmbio núcleo-citoplasma é seletivamente regulado. Existem estruturas que constituem no conjunto o complexo poro. Moléculas com até 9 nm de diâmetro atravessam rapidamente o complexo de poro nos dois sentidos, pois se difudem passivamente através do complexo poro. Macromoléculas atravessam o complexo poro por um processo que consome energia. Ex. proteínas e RNAs. Envoltório Nuclear O núcleo importa do citoplasma, normalmente, proteínas de peso molecular elevado. As proteínas do núcleo são sintetizadas no citoplasma com um sinal de localização nuclear (4-8 aminoácidos) – transporte ativo. A exportação de RNAs do núcleo para o citoplasma ocorre também por um processo ativo (que gasta energia), mediado por receptores específicos. LÂMINA NUCLEAR Está associada a superfície interna do envoltório nuclear, É uma rede fibrosa de proteínas. A lâmina nuclear se interrompe no poros nucleares. Funções da lâmina nuclear 1) Manter a forma do núcleo; 2) Dar suporte estrutural ao envoltório nuclear; 3) É responsável pela ligação da fibras cromatínicas ao envoltório. Durante a mitose, a lâmina nuclear se desorganiza. Ao final da mitose, a lâmina nuclear se refaz levando a reconstituição do envoltório nuclear. Nucleoplasma Constituído por solução aquosa de proteínas, RNAs, nucleosídeos, nucleotídeos e íons, onde estão mergulhados os nucléolos e a cromatina. A maioria da proteínas presentes no nucleoplasma são enzimas envolvidas com a transcrição e duplicação do DNA. NUCLÉOLO Estruturas nucleares esféricas e não envolvidos por membrana; Sítio de produção de subunidades ribossômicas; Composto por proteínas e rRNA, em processo de transcrição a partir de cópias dos genes rRNA. Tamanho está relacionado com a intensidade da síntese protéica que ocorre no citoplasma. Nucléolo CROMATINA Corresponde aos cromossomos da célula que não está em divisão. Em células eucariontes, o DNA está complexado com proteínas específicas, constituindo a cromatina. Sua organização é dinâmica, pois se altera de acordo com a fase do ciclo celular e com seu grau de atividade. No núcleo interfásico, a cromatina se apresenta compactada e/ou descompactada. No núcleo em divisão, a cromatina está altamente compactada, constituindo os cromossomos. ESTRUTURA DOS ÁCIDOS NUCLÉICOS E CROMOSSOMOS DNA e Cromossomos A vida depende da capacidade das células em armazenar, recuperar e traduzir as informações genéticas necessárias para produzir e manter o organismo vivo. A informação hereditária é passada de uma célula para a célula-filha durante a divisão celular e de geração em geração dos organismos por meio de suas células reprodutivas; As instruções são armazenadas dentro de cada célula viva em seus genes; Watson e Crick usaram um processo chamado de “construção de modelo”, no qual reuniram os resultados de experimentos anteriores para formar a estrutura tridimensional. “Queremos sugerir uma estrutura para o ácido nucléico com desoxirribose (DNA). Esta estrutura tem características novas que são de considerável interesse biológico” Ácidos desoxirribonucléico - DNA ESTRUTURA DOS ÁCIDOS NUCLÉICOS - NUCLEOTÍDEOS Tanto o DNA como o RNA são formados pelo encadeamento de grande número de moléculas menores, os nucleotídeos, formados por três tipos de substâncias químicas: Base nitrogenada, composto por uma cadeia fechada de carbonos que contêm nitrogênio; Uma pentose; Um fosfato. A união da base nitrogenada com o açúcar é chamada nucleosídeo. Nucleosídeo NUCLEOTÍDEOS X NUCLEOSÍDEOS Cinco tipos: Adenina, Guanina, Citosina, Timina e Uracila. Adenina e Guanina: Duplo anel de átomos de carbono (anéis aromáticos); chamadas de purinas ou bases púricas. Citosina, Timina e Uracila: Um anel de carbono; chamadas pirimidinas ou bases pirimídicas. ESTRUTURA DOS ÁCIDOS NUCLÉICOS - NUCLEOTÍDEOS DNA: Adenina – Timina; Citosina – Guanina RNA: Adenina – Uracila; Citosina - Guanina PURINAS PIRIMIDINAS adenina citosina guanina timina DNA uracila RNA BASES NITROGENADAS DNA: possui uma desoxirribose. Ácido desoxirribonucléico RNA: possui uma ribose. Ácido ribonucléico A ligação de um nucleotídeo com outro é entre o fosfato de uma unidade e a pentose da outra. PENTOSES PENTOSES LIGAÇÃO ENTRE NUCLEOTÍDEOS Através de seus grupamentos fosfatos Ligação Fosfodiéster A ligação feita por pontes de hidrogênio: Timina (T) liga-se à Adenina (A) - duas pontes de hidrogênio; Citosina (C) liga-se à Guanina (G) - três pontes de hidrogênio. LIGAÇÃO ENTRE BASES NITROGENADAS Pirimidina < Purina Logo, AT e CG tem, aproximadamente, o mesmo tamanho; Issoproporciona uma dimensão proporcional ao longo da molécula de DNA. LIGAÇÃO ENTRE BASES NITROGENADAS A proximidade das bases possibilita a formação de pontes de hidrogênio. A adenina com a timina formam de duas pontes de hidrogênio, a citosina com a guanina formam três pontes. A dupla hélice é mantida também por interações hidrofóbicas, que forçam as bases a se "esconderem" dentro da dupla hélice. N N O O H3C H PENTOSE H N N N N PENTOSE NH H Adenina Timina N N O N H H H H PENTOSE N N N N O H NH H PENTOSE Citidina Guanina Ácidos desoxirribonucléico - DNA Ácidos desoxirribonucléico - DNA Duas cadeias de nucleotídeos dispostos em hélice. Duas fitas se enrolam em torno de um eixo imaginário; Desoxirriboses ficam externas (expostas ao meio aquoso) e bases ficam internas (anéis são hidrofóbicos); Fitas em direções opostas: 5’-3’ e 3’-5’ = FITAS ANTIPARALELAS; As bases ficam pareadas entre as duas fitas, mantendo a estrutura da molécula. DUPLA HÉLICE DO DNA Arranjo antiparalelos dos nucleotídeos, a direção das ligações 3’ e 5’ fosfodiéster de uma cadeia é inversa em relação a da outra cadeia. Desoxirribose 2’-Desoxirribose -D-2-desoxirribofuranose H As fitas do DNA estão dispostas em direções opostas Antiparalelismo Ácidos desoxirribonucléico - DNA Devido ao pareamento das bases, as fitas de DNA são ditas COMPLEMENTARES; Isso assegura uma replicação mais precisa; Ligação glicosídica entre a pentose e a base não estão diretamente opostas na dupla- hélice; Tal fato gera duas cavidades: maior e menor; Na cavidade maior, as bases ficam expostas ao solvente, interagindo com moléculas sem precisar romper a estrutura do DNA. DUPLA HÉLICE DO DNA CAVIDADES MAIOR E MENOR DO DNA Ligações covalentes – unem os átomos; Forças hidrofóbicas – forçam as bases a se esconderem dentro da dupla hélice; Forças de Van der Walls – entre os anéis aromáticos de bases adjacentes (ao lado); Pontes de hidrogênio – entre as bases adjacentes. FORÇAS QUE ESTABILIZAM A DUPLA- HÉLICE Qual a ligação mais difícil de ser quebrada? Adenina – Timina ou Guanina – Citosina? Se uma sequência de uma fita de polinucleotídeos fosse AATCCATGT, qual seria o filamento complementar? REFLEXÃO São processos importantíssimos para a replicação, recombinação e transcrição do material genético; Desnaturação: pontes de hidrogênio entre as fitas complementares são rompidas; Renaturação: inverso da desnaturação. DESNATURAÇÃO E RENATURAÇÃO Pode ocorrer por aumento de temperatura, tratamento com ácidos ou bases, agentes desnaturantes e concentração de sal; Pareamento entre as bases não apresenta a mesma estabilidade – separação de GC exige temperaturas mais altas, ou concentração de agentes desnaturantes, devido à diferenças do número de pontes de hidrogênio. DESNATURAÇÃO Tm: Temperatura na qual 50% do DNA encontra- se desnaturado; A Tm depende da proporção de bases AT em relação à GC; [ ] GC Temperatura Tm DESNATURAÇÃO Ocorre através do resfriamento; O anelamento ocorre a uma temperatura de 25ºC abaixo da Tm; À medida que algumas bases se associam, a velocidade de renaturação aumenta; Caso ocorra um resfriamento abrupto, as fitas de DNA podem colapsar e não renaturar. RENATURAÇÃO A velocidade de renaturação do genoma depende do seu tamanho e da sua complexidade RENATURAÇÃO TIPOS DE DNA Sintético Oligonucleotídeos: sequências curtas e pré- determinadas de DNA sintético; Fisiológicos (in vivo) Tipo B, A e Z: Diferem quanto à conformação e podem facilitar ou dificultar a interação da molécula com proteínas. Forma clássica descrita por Watson e Crick e mais abundante; Dupla-hélice gira para a direita; Conclui uma volta a cada 10pb (pares de base). Obs: Em solução, geralmente o DNA assume a conformação B. Quando há pouca água disponível para interagir com a dupla hélice, o DNA assume a conformação A. DNA TIPO B As duas fitas do DNA se torcem para formar uma dupla hélice (estrutura secundária do DNA) DNA TIPO B DNA TIPO A Dupla-hélice gira para a direita; Forma desidratada do tipo B; Conclui uma volta a cada 11pb (pares de base); Apresenta estrutura mais curta e larga; DNA TIPO Z Dupla-hélice gira para a esquerda; Cadeia aparece na forma de zigue-zague; Apresenta estrutura mais longa e fina; Conclui uma volta a cada 12pb (pares de base); Forma menos estável. ESTRUTURA DOS CROMOSSOMOS EUCARIÓTICOS NÚMERO DE CROMOSSOMOS As células somáticas possuem 46 cromossomos – 22 pares de autossomos e um par de cromossomos sexuais. Células somáticas – diplóides Células sexuais – espermatozoide e ovócitos – haplóides O DNA estendido – espaço e manutenção da integridade durante replicação e transcrição. Solução: molécula de DNA se enrola sobre si mesma Enrolamento mínimo – intérfase Enrolamento máximo – pré divisão celular
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