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Universidade Estácio de Sá - UNESA Relatório de Imunologia (Teste Rápido NS1) Sumário 1 Introdução.............................................................. 2 1.1 Objetivo................................................................. 2 2 Desenvolvimento................................................... 3 2.1 Materiais.............................................................. 3 2.2 Métodos............................................................... 3 2.3 Resultados............................................................ 3 3 Conclusão............................................................... 5 4 Referências............................................................. 5 1 1. Introdução O kit Dengue NS1 é um teste imunocromatográfico para a detecção do antígeno NS1 do vírus da Dengue. O kit possui uma linha teste “T” com anticorpos anti-NS1 imobilizados e uma linha controle “C” com anticorpos anti-cabra. Quando uma amostra é adicionada, ela interage com anticorpos anti-NS1 conjugados a partículas de ouro coloidal. Em seguida, a amostra migra pela membrana por capilaridade, e interage com os anticorpos anti- NS1 presentes na linha “T”. Se amostra apresentar antígenos NS1, uma banda colorida irá aparecer na região teste “T”, indicando um resultado positivo. A amostra continua migrando pela membrana até atingir a região controle “C”, onde interage com anticorpos anti-cabra, gerando uma linha colorida que indica o funcionamento correto do produto (1). Teste Rápido NS1 Fonte: Arquivo Pessoal → Observações: A detecção desse antígeno pode ser feita por imunocromatografia ou pela técnica imunoenzimática. A diferença entre essas metodologias é que a primeira constitui-se no chamado teste rápido e possibilita a liberação do resultado em até duas horas, enquanto a segunda se mostra mais sensível, embora leve até três dias úteis para ficar pronta. 1.1) Objetivo É um teste imunocromatográfico rápido de triagem para determinação qualitativa de antígeno NS1 para o vírus da Dengue em amostras de sangue total, soro ou plasma. Logo, o objetivo é identificar se o paciente apresenta antígenos NS1 ou não. 2 → Observações: É fundamental lembrar que o pico de sensibilidade da dosagem do NS1 ocorre no terceiro dia de febre, com declínio progressivo até o quinto dia, sendo geralmente negativa a partir do sétimo dia, quando se inicia a produção de anticorpos e a neutralização do antígeno. Portanto, não faz sentido pedir um teste rápido de NS1, se você fizer a anamnese no paciente e ele comentar que está com esses sintomas a 6 dias, porque a presença de NS1 estará baixa. 2. Desenvolvimento 2.1) Materiais Placa teste (NS1), pipeta automática, ponteira para micropipetas e sangue. 2.2) Métodos Etapa 1 - É recolhido o sangue do indivíduo que está com suspeita de dengue (de acordo com as normas para realização do teste rápido NS1). Etapa 2 - Utiliza-se uma pipeta automática regulada a 100 µl para colher o sangue do paciente que está no tubo de ensaio. Etapa 3 - Coloca-se habitualmente 3 gotas da pipeta automática no teste rápido NS1 e aguardar 15 a 20 minutos o aparecimento das linhas. → Observações: A amostra deve estar em temperatura ambiente antes de iniciar o teste e a punção digital não é recomendada, pois a quantidade de sangue pode ser insuficiente ou coagular, impedindo a realização correta do teste (2). 2.3) Resultados Podemos observar até 3 resultados diferentes: 1) Teste Positivo: Formação de duas linhas vermelhas, uma na região teste (T) e na região do controle (C), nos primeiros 15 a 20 minutos. Qualquer intensidade da linha vermelha na região teste (T), na presença da linha controle, representa um resultado positivo. Ou seja, a presença de uma linha teste fraca, já identifica resultado positivo. 3 2) Teste Negativo: Formação de uma linha vermelha na região controle (C) e ausência completa de linha vermelha na região teste (T). 3) Teste Inadequado: Ausência completa de linha na região controle (C) com ou sem linha vermelha na região de teste (T). Testar a amostra novamente. Ilustração dos Diferentes Resultados Fonte: Bioclin Como a amostra de sangue utilizada foi a da professora (Priscilla), e ela não apresentava nenhum tipo de sintoma e não continha nenhum antígeno NS1 na sua corrente sanguínea, sua amostra deu negativa. Portanto, na imagem observamos uma linha na região controle (C) e ausência completa na região teste (T). Resultado do Teste Rápido NS1 (Priscilla) Fonte: Arquivo Pessoal 4 Além disso, observamos um teste com resultado inadequado no laboratório, provavelmente porque o teste não devia estar apto ao uso. Logo, na imagem vemos um teste sem nenhuma linha, sem linha tanto na região controle como na região teste e outro teste com uma linha somente na região controle, mostrando o resultado negativo. Comparação dos Testes (Inadequado e Negativo) Fonte: Arquivo Pessoal 3. Conclusão O kit Dengue NS1 é um teste qualitativo e deve ser usado somente para uso diagnóstico in vitro, é um teste de triagem para caracterizar a presença de antígenos NS1 do vírus da Dengue. Além disso, como todo teste de diagnóstico, os resultados devem ser interpretados juntamente com outros dados clínicos do paciente. Se o resultado negativo se mantiver e os sintomas clínicos persistirem, um teste adicional deve ser realizado usando outro método. Um resultado negativo não exclui, a qualquer momento, a possibilidade de infecção pelo vírus da Dengue. 4. Referência 1) Bioclin; DENGUE NS1; Disponível em: <https://www.bioclin.com.br/sitebioclin/wordpress/wp-content/uploads/arquivos/instru coes/INSTRUCOES_DENGUE_NS1.pdf> Acessado em: 23 de Fev. de 2018 2) Granato, Celso; Métodos usados para a detecção do NS1; Disponível em: <http://www.fleury.com.br/medicos/educacao-medica/revista-medica/materias/Pages/ metodos-usados-para-a-deteccao-do-ns1.aspx> Acessado em: 22 de Fev. de 2018 5