PROTOCOLO DE EXTRAÇÃO DE DNA POR FENOL

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PROTOCOLO DE EXTRAÇÃO DE DNA POR FENOL-CLOROFÓRMIO
1a Parte:
Cortar o tecido com bisturi e macerar bastante
Acrescentar 500(L de tampão de lise (100mM NaCl; 10mM TRIS pH7,5) + 50(L de SDS 10% ou 25(L 
Acrescentar 2(L de RNAse e 4(L de Proteinase XIV
2a Parte:
Adicionar no mesmo tubo o mesmo volume de fenol (aprox. 500(L). Vortexar e centrifugar por 10 minutos a 13.200rpm
Retirar o sobrenadante e passar para outro eppendorf
Adicionar partes iguais de clorofórmio e fenol. Vortexar e centrifugar por 10 minutos a 13200rpm
Retirar o sobrenadante e passar para outro eppendorf
Adicionar o mesmo volume de clorofórmio. Vortexar e centrifugar por 10 minutos a 13200rpm
Retirar o sobrenadante e passar para outro eppendorf
Adicionar 2 volumes de etanol absoluto gelado. Centrifugar a 13200rpm por 30 minutos.
Descartar o etanol
Adicionar 150(L de etanol 70%. Centrifugar a 13200rpm por 20 minutos. 
Retirar o etanol 70% com a pipeta. Tomar cuidado para não tirar o pellet.
Secar o DNA na estufa a 37oC com os tubos abertos.
Adicionar de 30 a 50(L de H2O estéril