Extração de DNA

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Extração de Ácidos Nucléicos
Mestrando: André Vieira do Nascimento
Universidade Federal da Grande Dourados
Extração de ácidos nucléicos 
Requerimento essencial: 
 quantidade;
 pureza;
 integridade.
Etapas na obtenção de ácidos nucléicos:
Lise física ou bioquímica das paredes celulares e membranas;
Purificação dos ácidos nucléicos: desnaturação / inativação de proteínas celulares;
Precipitação.
Protocolo de Sangue
Mamíferos
Humano
Bovino 
Ovino
Protocolo - Extração
Material biológico
SDS 20%
Proteinase K
Protocolo - Extração
Encubação
60˚ C por 1 h
Protocolo - Extração
Protocolo - Extração
Clorofórmio
Protocolo - Extração
Solução de precipitação proteica
Protocolo - Extração
Centrifugação
10.000 RPM
10 minutos
Protocolo - Extração
Transferência do sobrenadante para um novo microtubo
Protocolo - Purificação
Etanol 100% gelado
Protocolo - Purificação
Centrifugação
10.000 RPM
5 minutos
Protocolo - Purificação
Desprezar fase aquosa
Protocolo - Purificação
Centrifugação
10.000 RPM
5 minutos
Etanol 70% gelado
Protocolo - Purificação
Desprezar fase aquosa
Protocolo - Purificação
Secagem
~15 min
Protocolo - Purificação
Ressuspendido em TE + RNAse
Protocolo - Purificação
Encubado
37 ˚C por 1 hora
Protocolo - Armazenamento
Armazenado em 
Freezer -20 ˚C