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ASPECTOS GERAIS DO USO DE MICRO-ORGANISMOS NA INDÚSTRIA Prof.Dra. Evelyn de Souza Oliveira Lopes I – Doenças II – Agricultura III- Alimentos IV – Energia e meio ambiente V - Biotecnologia IMPACTO DOS MICRO-ORGANISMOS SOBRE OS SERES HUMANOS “ O papel dos infinitamente pequenos na natureza é infinitamente grande” Pasteur Tão antigo quanto a própria civilização; Uso empírico: produtos fermentados Início da Microbiologia Industrial : Pasteur Fermentação alcóolica: vinho. Antibióticos; Aditivos alimentares: aminoácidos,vinagre. Armamentos: glicerol e acetona - durante a 2ª guerra. MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL Microbiologia industrial: área que utiliza micro- organismos, geralmente cultivados em larga escala, para gerar produtos de valor comercial, ou realizar importantes transformações químicas. MICRO-ORGANISMOS NA INDÚSTRIA Microbiologia aplicada: uso de microrganismos pelo homem • Obtenção de produtos microbianos; •Aplicação da atividade microbiana. PRODUTOS MICROBIANOS DE INTERESSE INDUSTRIAL INDÚSTRIAS Indústria Farmacêutica: antibióticos, hormônios, vacinas, vitaminas, proteínas terapêuticas humanas. Indústria de alimentos: aminoácidos, goma xantana, bebidas alcóolicas, leite fermentados, manteigas, queijos, etc. Indústria química: etanol, acetona, butanol, glicerol, ácido láctico, ácido cítrico, outros ácido orgânicos, etc. PRODUTOS MICROBIANOS Contexto industrial: Fermentações industriais: micro-organismos utilizados em larga-escala para produção comercial Independe da via metabólica. Produtos Microbianos Exploração da capacidade biossintética do micro-organismo = processos industriais Trofofase : fase logarítmica – metabólitos primários Composto essenciais ao crescimento microbiano: aminoácidos, nucleotídeos, proteínas, ácidos nucleicos, lipídeos, carboidratos, etc) ou subprodutos do catabolismo energético (etanol, acetona, butanol) Produtos Microbianos Exploração da capacidade biossintética do micro-organismo = processos industriais Idiofase: fase estacionária – metabólitos secundários Composto sintetizado quando as células crescem lentamente ou não crescem CRESCIMENTO MICROBIANO E FORMAÇÃO DE PRODUTOS EM BIOCATÁLISES USO DO MICRO-ORGANISMO DE INTERESSE INDUSTRIAL Nutrição Reprodução Produto Microbiologia industrial x Biotecnologia DEFINIÇÕES “Entende-se por biotecnologia o conjunto de conhecimentos, técnicas e métodos, de base científica ou prática, que permite a utilização de seres vivos como parte integrante e ativa do processo de produção industrial de bens e serviços” Prof. Antonio Paes de Carvalho (reunião na Academia Brasileira de Ciências) “O conjunto de processos industriais que englobam processos biológicos” Office of Technology Assessment MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL X BIOTECNOLOGIA Processos industriais Micro-organismos Otimização de reações enzimáticas Super-produção OGM Produzem substâncias que eles normalmente não são capazes de produzir Genética: seleção de mutantes altamente produtor Biologia molecular Revolução da Microbiologia Industrial: Técnicas de engenharia genética; Origem da BIOTECNOLOGIA . ENGENHARIA GENÉTICA Produção Insulina Humana; Produção de Somatotropina; Produção de enzimas: Dnase I e Alginato liase Otimizações de fermentações industriais Tecnologia das fermentações: obtenção de cepas microbianas altamente produtoras MELHORAMENTO DE CEPAS SELVAGENS SELEÇÃO DE MUTANTES Agentes físicos e químicos Melhoramento específico da capacidade produtiva Modificações aleatórias no DNA da célula Engenharia genética Tecnologia do DNA recombiante BIOTECNOLOGIA E OGMS Produção de fragmentos de DNA (sequências de interesse) Inserção da informação de interesse (Plasmídeos, vetores); Técnicas de transformação; Microrganismo produtor otimizado; Produção em larga escala. Micro-organismos e indústria Micro-organismos e indústria Substrato= matéria- prima Micro-organismos= fábrica química Novos produtos Larga escala industrial SUCESSO DE UM PROCESSO INDUSTRIAL Micro-organismos Meio de cultura Forma de condução do processo Etapas de recuperação do produto PRÉ-REQUISITOS Micro-organismos: Meio: substrato •Crescimento rápido e bom rendimento •Não ser patogênico • Custo baixo •Resíduos industriais:soro, leitelho, água de moagem de milho, etc PRÉ-REQUISITOS Produto: • produzir grandes quantidades (biorreatores) •Mistura heterogênea: células, constituintes não utilizados do meio, produtos metabólitos Separação e purificação GRUPOS DE MICRO-ORGANISMOS INDUSTRIAIS Bactérias – alimentos; solventes. Leveduras; Etanol (cachaça, cerveja, vinho) e fermento . Fungos filamentosos (bolores); Antibióticos, enzimas, ácido cítrico. Vírus - produção de vacinas. Bactérias, leveduras e fungos filamentosos Bacteria Lácticas Bacilos e cocos gram-positivos que produzem ácido láctico como principal ou único produto de fermentação; Anaeróbios aerotolerantes; Produção de alimentos e ácidos láctico Streptococcos lactis Lactobacillus Acidophilus MICRO-ORGANISMOS NA PRODUÇÃO DE ALIMENTOS Fermentação de produtos lácteos: Iogurte – Lactococcus salivarius subsp. thermophilus, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus Kefir (leite fermentado) – Lactococcus lactis, L. bulgaricus e leveduras Kefiran Manteiga – Streptococcus cremoris, Leuconostoc cremoris e Lactobacillus lactis Queijo: Lactococcus e Lactobacillus Propionibacterium – queijo Suíço Penicillium – queijo camembert, roquefort, brie MICRO-ORGANISMOS NA PRODUÇÃO DE ALIMENTOS MICRO-ORGANISMOS NA PRODUÇÃO DE ALIMENTOS Fermentação de vegetais: Chucrute – Enterobacter cloacae, Leuconostoc mesenteroides, Lactobacillus plantarum, L. brevis Picles – L. plantarum, L. mesentereoides, Enterococcus faecalis, Pediococcus cerevisae, Pseudomonas spp., Flavobacterium spp., Bacillus spp. e leveduras Azeitonas – Leuconostoc mesenteroides subsp. Mesenteroides Biotecnologia Aplicada Produção de Alimentos Fermentados Uso de Bactérias Lácticas no processo industrial Capacidade rápida de fermentar a matéria-prima barata; Exigência mínima de substâncias nitrogenadas; Produção alta de ácido láctico específico; Capacidade de crescer em condições de baixo pH e alta temperatura. Culturas iniciadoras- “Starter” Principais gêneros: Acetobacter e Gluconobacter - Bacilos móveis, aeróbios, gram-negativos, que realizam a oxidação incompleta de alcoóis e açúcares, levando ao acúmulo de ácidos orgânicos. Etanol Ácido acético Vinagre Bactéria acéticas Produto Bactérias usos Polissacarídeos (Dextrana) Leuconostoc mesenteróides Estabilizante e agente de viscosidade na indústria de alimentos Polissacarídeos (goma Xantana) Xanthomonas campestris Controle de viscosidade, retenção de aromas, Aminoácidos (ácido glutâmico) Corynebacterium glutamicum Aditivo em alimentosL-lisina B.. Flavum B. lactofermentum Aditivo na alimentação L-fenilalanina Corynebacterium glutamicum Infusões, terapia, produção de aspartame Vitamina B12 e riboflavina Propionobacterium freudenreichii Pseudomonas Bacillus subtilis recombinante Aditivo alimentar Micro-organismos de interesse industrial MICRO-ORGANISMOS NA PRODUÇÃO DE ALIMENTOS Produção de pães – Saccharomyces cerevisae, Bebidas alcóolicas: Cervejas: Saccharomyces cerevisae Vinho: fermentação usando S. cerevisae Saccharomyces cerevisiae é amplamente utilizada na indústria de panificação e de bebidas alcoólicas Obtenção das células propriamente ditas ou componentes celulares MICRO-ORGANISMOS NA INDÚSTRIA QUÍMICA Etanol 50 bilhões de litros produzidos anualmente Saccharomyces cerevisiae Solvente industrial e suplemento de gasolina (combustível) Milho, cana-de-açúcar, trigo, beterraba, cavacos de madeira, etc Actinomyces São insuperáveis na capacidade de produção de compostos secundários. Streptomyces: Produção de antibióticos e outros fármacos Solo: moléculas bioativas MICRO-ORGANISMOS NA INDÚSTRIA FARMACÊUTICA Fungos filamentosos • São usados na fabricação de antibióticos, produtos alimentares, agentes químicos industriais e de enzimas Aumento na produção de antibióticos: -melhoramento no meio de cultura Isolamento do P. chrysogenum: cepa com potencial maior de produção Desenvolvimento de cultura submersa Refinamentos técnicos nos métodos de purificação de penicilina MICRORGANISMOS PRODUTORES DE ANTIBIÓTICOS 17/03/2 015 39 Produto Micro-organismos usos Acetona-butanol Clostridium acetobutiricum solventes 2-3 butanodiol Bacillus polymixa Solventes, umectantes Ácido 2‐cetoglucônico Pseudomonas spp. Intermediário na fabricação de ácido isoascórbico (vitamina C) Ácido cítrico Aspergillus niger Produtos alimentícios Ácido fumárico Rhizopus nigrificans Agente umectantes Ácido glucônico Aspergillus niger Produtos farmacêuticos, tecido, couro MICRO-ORGANISMOS NA INDÚSTRIA QUÍMICA Desenvolvimento de um processo de produção (Fermentação industrial) Alta produção x curto prazo Micro-organismo produtor Linhagem Microbiana de alto rendimento: - Manter as características e viabilidade por longos períodos - Métodos adequados de melhoramento da cepa - Métodos adequados para sua preservação Fases de fermentação e separação/purificação do produto Otimizar o processo de produção (controle e rendimento maior) Desenvolvimento de um processo de produção (Fermentação industrial) Aplicações microbiológicas em um processo industrial Seleção do micro-organismos a ser usado no processo; A escolha do meio de crescimento microbiano; A determinação das condições ambientais para a produtividade ótima( pH, temperatura e aeração); Controle de contaminação e da qualidade final do produto; Manutenção do micro-organismos em coleções de cultura (propriedades funcionais sejam mantidas) Manipulação genética para o bom rendimento do micro- organismo
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