AULA 1 1 MÉTODOS DE ESTUDO EM MICROSCOPIA (1)

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MÉTODOS DE ESTUDO EM 
HISTOLOGIA 
Profa Dra Kaira Emanuella
HISTOLOGIA
• Tecidos do corpo  órgãos 
• 4 tipos de tecidos fundamentais:
• Tecido Epitelial
• Tecido Conjuntivo
• Tecido Muscular
• Tecido Nervoso
HISTOLOGIA
• Definição: É o estudo dos tecidos que compõe o
organismo e o modo como eles se organizam para
constituir os órgãos
TECIDOS
• Constituição: 
• Células + matriz extracelular (MEC)
• Cada tecido:
• Células + MEC característicos
• Distinção no reconhecimento
PREPARAÇÃO DE ESPÉCIMES PARA 
MICROSCOPIA
• Pequena dimensão das células e dos componentes da
matriz extracelular (MEC) = MO
• Ferramentas e os métodos de investigação compreensão
das células, tecidos e órgãos.
• Estudo de tecidos ao microscópio  preparação de cortes
histológicos
• Microscópio de luz a imagem se forma a partir dos raios
luminosos de um feixe de luz que atravessou uma estrutura.
• Células vivas, camadas muito delgadas de células ou de
tecidos, membranas transparentes de animais
vivos podem ser observadas diretamente ao microscópio
PREPARAÇÃO DE ESPÉCIMES PARA 
EXAME MICROSCÓPICO
• Tecidos espessos impossibilita a passagem de luz 
Fatiados (Cortes histológicos) em micrótomo Lâminas de
vidro  tratamentos Leitura
• Tratamentos de tecidos para preparo histológico:
• FIXAÇÃO
• INCLUSÃO
• FIXAÇÃO FÍSICA POR CONGELAÇÃO
• COLORAÇÃO
PREPARAÇÃO DE TECIDO PARA 
MICROSCOPIA
FIXAÇÃO
• Evitar autólise e preservar estrutura e composição
• Endurecer os fragmentos
• Física (congelamento)
• Química (formaldeído 4%) ou Glutaraldeído
• Cuidados para preservar detalhes da ultraestrutura
das células e da matriz
• Glutaraldeído tamponado  Tetróxido de ósmio =
preserva e fornece contraste aos lipídios e
proteínas
PREPARAÇÃO DE TECIDO PARA 
MICROSCOPIA
INCLUSÃO
• Substâncias que deem uma consistência rígida ao 
tecido
• Inclusão em parafina ou resina:
• 1) Desidratação em etanol (70%100%)
• 2) Clareamento em xilol e o toluol (tecidos transparentes ou
translúcidos)colocados em parafina derretida (56-60ºC) 
Preenchimento do tecido com parafina  Solidificação do tecido 
Microtomia
PREPARAÇÃO DE TECIDO PARA 
MICROSCOPIA
MICROTOMIA
• Cortes de 4µm de espessura em lâmina de vidro
• 1µm = 0,001mm
FIXAÇÃO POR CONGELAÇÃO
• Congelamento rápido; 
• método físico de fixação, tornando-se rígidos e, assim,
prontos para serem seccionados.
• Corte em Criostato
• Não inativa a maioria das enzimas e mantém muitas
proteínas em suas conformações naturais
• Estudar lipídeos= aconselha-se o uso de secções
congeladas
PREPARAÇÃO DE TECIDO PARA 
MICROSCOPIA
COLORAÇÃO
• Tecidos incolores
• Seletividade maior ou menor
• Evidenciar os vários componentes dos tecidos, células e
MEC
• Corantes: caráter ácido (acidófilos) ou básico (basófilos) que
formam ligações eletrostáticas (salinas) com componentes
ionizados dos tecidos
PREPARAÇÃO DE TECIDO PARA 
MICROSCOPIA
COLORAÇÃO
• Corantes Básicos:
• Azul de toluidina 
• Azul de metileno
• Hematoxilina
Ex: ácidos nucleicos, glicosaminoglicanos e glicoproteínas ácidas
• Corantes Ácidos
• Orange G, 
• Eosina, Fucsina ácida 
Mitocôndrias, grânulos de secreção, proteínas citoplasmáticas e 
colágeno 
PREPARAÇÃO DE TECIDO PARA 
MICROSCOPIA
COLORAÇÃO
Hematoxilina e eosina (H & E)
• Hematoxilina: corante básico (azul
ou violeta)
• Liga-se à estruturas basófilas (núcleo)
• Eosina: corante ácido (rosa)
• Liga-se à estruturas acidófilos
(citoplasma)
• Células intestinas de camundongos
PREPARAÇÃO DE TECIDO PARA 
MICROSCOPIA
Hematoxilina e eosina (H & E)
Aplicações:
Caracterização do tecido
Identificação de carcinoma
Identificação de infiltrado inflamatório → PATOLOGIA
PREPARAÇÃO DE TECIDO PARA 
MICROSCOPIA
Células renais humanas
Hematoxilina e eosina (H & E)
Infiltrado inflamatório
PREPARAÇÃO DE TECIDO PARA 
MICROSCOPIA
Células Hepáticas de camundongos
Hematoxilina e eosina (H & E)
Necrose
PREPARAÇÃO DE TECIDO PARA 
MICROSCOPIA
Células Hepáticas de camundongos
COLORAÇÃO
• Pouquíssima informação sobre a natureza química dos 
componentes dos tecidos. 
• Contracorante -IH
• Impregnação por metais, como prata e ouro (tecido 
nervoso) 
PREPARAÇÃO DE TECIDO PARA 
MICROSCOPIA
• Transiluminação
• Partes mecânicas e ópticas
Sistemas de lentes:
• Condensador
• Objetivas
• Oculares
• Condensador: concentra a luz de
uma lâmpada e projeta um feixe
luminoso sobre o espécime;
• Objetiva recebe a luz que
atravessou o espécime  imagem
aumentada do espécime em
direção à ocular  amplia a
imagem e a projeta na retina, em
uma tela, em uma câmera
fotográfica ou em um detector
eletrônico.
MICROSCOPIA DE LUZ