TÉCNICA HISTOLÓGICA PARA O ESTUDO DE CÉLULAS E TECIDOS

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TÉCNICA HISTOLÓGICA PARA O ESTUDO DE CÉLULAS E TECIDOS
HISTOLOGIA: Parte da ciência que estuda os tecidos e como eles se organizam para construir os órgãos
TECIDO: “conjunto de células semelhantes e associadas intimamente, adaptadas para funções específicas”
TÉCNICA HISTOLÓGICA
· Conjunto de processos a que se submetem os tecidos a fim de que possam ser observados significativa e adequadamente permitindo o diagnóstico histológico ou patológico
· PREPARAÇÃO DE ESPÉCIMES PARA EXAME MICROSCÓPICO
· Células vivas, camadas muito delgadas de tecidos, membranas transparentes de animais vivos
· Observadas diretamente ao microscópio
· Tecidos e órgãos são espessos
· Cortes histológicos muito delgados
· FIXAÇÃO - OBJETIVOS:
· Inibir a autólise e a decomposição bacteriana
· Endurecer os fragmentos
· Proteger o tecido contra os efeitos nocivos da desidratação e da impregnação pela parafina
· Facilitar a coloração
· Tecidos imersos em soluções desnaturantes; fixadores
· Fixadores: 
· Formaldeído 4%
· Glutaraldeído
· OBS: aldeídos preservam somente PROTEÍNAS (aldeídos se fixam nas proteínas)
· Na microscopia eletrônica, dupla fixação: glutaraldeído e tetróxido de ósmio
· Fragmento grande: células do interior do fragmento podem sofrer autólise
· Fragmento pequeno: em maior contato com o formaldeído, protegendo mais rápido
· DESIDRATAÇÃO
· Retirar a água do interior da célula
· Fragmento é submetido a banhos sucessivos em etanol de teor crescente (ex.: 70%, 80%, 90% e 100%)
· CLAREAMENTO (DIAFANIZAÇÃO)
· Fragmentos submetidos a substância intermediária
· XILOL: solvente orgânico. Destrói lipídio e tudo que é lipossolúvel
· Fragmentos transparentes
· INCLUSÃO
· Fragmentos infiltrados com substância que lhes proporcionem uma consistência rígida
· PARAFINA (56 a 60°C)
· Colocados em blocos -> solidificação
· MICROTOMIA
· 1 a 10 micrômetros de espessura
· 1 µm = 0,001mm
· 2 tipos: manual e eletrônico
· MONTAGEM DA LÂMINA
· Corte colocado em banho-maria
· Capturar com a lâmina
· FIXAÇÃO FÍSICA POR CONGELAÇÃO
· Congelamento rápido	-> rígidos -> seccionados 	CRIOSTATO
PROBLEMAS NA INTERPRETAÇÃO DOS CORTES
· Etapas podem distorcer os tecidos quando comparados em vivo
· RETRAÇÃO
· Moléculas não preservantes
· Erros durante o processamento: ARTEFATOS DA TÉCNICA
· Totalidade do tecido
· Impossibilidade de corar diferencialmente todos os componentes da célula
· Duas dimensões e três dimensões
TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS E CITOQUÍMICAS
Histoquímica e citoquímica: usados para indicar métodos que identificam e localizam substâncias em células e matriz extracelular
COLORAÇÃO
· Componentes dos tecidos:
· Ácidos: corantes básicos -> BASÓFILOS
· Básicos: corantes básicos -> ACIDÓFILOS
· Se o tecido tem composição básica, é corado com corante ácido e chamado de acidófilo
· Exemplos:
· Estruturas basófilas: núcleo, RER, cartilagem
· Estruturas acidófilas: citoplasma, mitocôndria, fibras de colágeno, grânulos de secreção, proteínas
· Coloração hematoxilina e eosina (HE)
· Hematoxilina (básico) -> azul ou violeta
· Eosina (ácido) -> rosa
· TRICRÔMIOS
· Tricrômio de Mallory
· 3 corantes
· Tecido conjuntivo (azul) e tecido muscular (marrom)
· ÍONS
· Cálcio, fosfato, ferro
· Fazer precipitação dos íons para corar, formando estruturas escuras (fosfato de cálcio)
· ÁCIDOS NUCLEICOS
· Reação de Feulgen (cora o DNA de vermelho)
· PROTEÍNAS
· Fosfatases -> lisossomo (retiram fosfato das moléculas)
· Desidrogenases -> mitocôndrias (retiram hidrogênio de uma molécula para outra – utilizada no Ciclo de Krebs)
· Peroxidases -> marcar outras moléculas (leva hidrogênio para o peróxido de hidrogênio e forma água - atuam como marcador de outras moléculas)
· POLISSACARÍDEOS E OLIGOSSACARÍDEOS
· Ácido Periódico-Schiff (PAS) - cora de magenta ou púrpura
· Muco
· Lipídios
· Sudan IV e Sudan Black – corante lipossolúvel
· OUTROS CORANTES
· Corantes básicos
· Azul de toluidina
· Azul de metileno
· Corantes ácidos 
· Orange G
· Fucsina ácida