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CRESCIMENTO MICROBIANO Profª. MSc. Josie Haydée L. Ferreira UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAUÍ – UFPI DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA E MICROBIOLOGIA DISCIPLINA MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA CRESCIMENTO MICROBIANO O crescimento de uma população microbiana é o aumento do número de células ou da massa. Por meio do entendimento das condições necessárias para o crescimento microbiano podemos determinar como controlar o crescimento dos organismos patogênicos ou daqueles que contaminam e degradam os alimentos. Fatores necessários para o crescimento: • Fatores Físicos: temperatura, pH e pressão osmótica. • Fatores Químicos: carbono, nitrogênio, enxofre, fósforo, oligoelementos, oxigênio e fatores orgânicos de crescimento; Influência dos Fatores Físicos 1. TEMPERATURA: Classifica os microrganismos em cinco grupos: •Psicrófilos: podem crescer a 0ºC. Temperatura ótima é 15ºC. • Psicrotróficos: crescem a 0ºC mas a temperatura ótima está entre 20-30ºC. (Degrada os alimentos). • Mesófilos: Temperatura ótima entre 25-40ºC. Microrganismos mais comumente encontrados, incluindo patogênicos e que degradam alimentos. •Termófilos: Crescem em altas temperaturas. • Termófilos Extremos: temperatura ótima em torno ou superior a 80ºC. (Archaea). Curvas de crescimento de diferentes microrganismos em resposta à variação na TEMPERATURA: Importância de baixas TEMPERATURAS para evitar o crescimento de microrganismos patogênicos ou que degradam alimentos. Efeito da quantidade de alimento em relação à velocidade refrigeramento. Influência dos Fatores Físicos 2. pH Definido com acidez ou alcalinidade de uma solução. A maioria das bactérias crescem melhor dentro de variações pequenas de pH sempre perto a neutralidade (6,5-7,5). Os fungos e as leveduras crescem em variações maiores de pH, sendo os valores ótimos inferiores aos das bactérias (pH 5 e 6). As bactérias cultivadas em laboratórios com freqüência produzem ácidos que podem acabar interferindo no seu próprio crescimento. Tampões químicos – importância para manutenção do pH em meios de cultivo (sais de fosfato). Influência dos Fatores Físicos 3. Pressão Osmótica Os microrganismos retiram da água, presente no seu meio ambiente, a maioria dos seus nutrientes solúveis – necessidade de água para o crescimento. Conteúdo celular – 80 a 90% de água. A água presente dentro da célula pode ser removida por elevações na pressão osmótica. Solução hipotônica x Solução hipertônica. Plasmólise – perca de água por osmose – encolhimento da membrana plasmática. Esse princípio pode ser usado na preservação de alimentos. Exemplos? Halofílicas extremas: bactérias que necessitam de altas concentrações de sais – obrigatórias (30%). Halofílicas facultativas: capazes de crescer em até 2% de sal. PLASMÓLISE Fatores Químicos Influência dos Fatores Químicos 1. Carbono: Essencial para a síntese de todos os compostos orgânicos necessários para viabilidade celular – elemento estrutural básico para os seres vivos. Metade do peso seco de uma bactéria típica é formada de carbono. QUIMIO-HETEROTRÓFICO: obtém carbono a partir de moléculas orgânicas como proteínas, carboidratos e lipídeos que são fonte de energia da célula. QUIMIO-AUTOTRÓFICO E FOTO-AUTOTRÓFICO: obtém o carbono a partir de dióxido de carbono. Influência dos Fatores Químicos 1. Nitrogênio, Enxofre e Fósforo: Necessários para a síntese de material celular dos microrganismos Participam da síntese de vários componentes celulares, entre eles: DNA, RNA, proteínas, ATP... Fontes de nitrogênio: decomposição de proteínas, íons amôna (NH4-), íons nitrato, nitrogênio gasosos (N2 – fixação do nitrogênio – cianobactérias fotossintetizadoras). O enxofre é utilizado na síntese de aminoácidos contendo enxofre e de vitaminas como tiamina e biotina. O fósforo é essencial para síntese de ácidos nucléicos e para os fosfolipídeos componentes das membranas celulares e ATP. O potássio, magnésio e o cálcio também são elementos necessários, principalmente como co-fatores em reações enzimáticas. Influência dos Fatores Químicos 2. Oligoelementos: Necessários em pequenas quantidades pelos microrganismos. Também chamados de elementos traços, incluem outros elementos minerais, como ferro, cobre, molibidênio e zinco. A maioria desses elementos minerais são essenciais para a atividade de algumas enzimas, geralmente como co-fatores. Esses elementos estão normalmente presentes na água ou em outros constituintes dos meios de cultura para os microsganismos. Influência dos Fatores Químicos 3. Oxigênio Estamos acostumados a pensar no oxigênio molecular (O2) como um elemento essencial à vida, mas em algumas circunstâncias este elemento pode-se tornar um gás venenoso. Aeróbios x Anaeróbios Formas tóxicas do oxigênio: Radicais Superóxidos livres – são formados durante a respiração normal – se houver acumulo serão tóxicos (instabilidade): O2 - + O2 - + 2H+ H2O2 + O2 (Superóxido dismutase - SOD) Peróxido de hidrogênio gerado cotém ânion peróxido – tóxico: 2 H2O2 H2O + O2 H2O2 + 2H + 2H2O (catalase) (peroxidase) EFEITO DO OXIGÊNIO SOBRE O CRESCIMENTO Influência dos Fatores Químicos 4. Fatores Orgânicos de Crescimento: São aqueles compostos orgânicos essenciais que o organismo não é capaz de sintetizar. Eles precisam ser retirados diretamente do meio ambiente. As vitaminas são os fatores orgânicos de crescimento para os homens. A maioria das vitaminas tem função de coenzima. Muitas bactérias podem sitetizar todas as vitaminas necessárias para suas atividades enzimáticas, sendo independentes de fatores extracelulares. Porém algumas bactérias necessitam que esses componentes sejam retirados do meio de cultivo. Outros fatores de crescimento necessários para algumas bactérias podem ser aminoácidos, purinas e pirimidinas. Staphylococcus aureus em meio telurito-glicina E. coli em meio azul de metileno eosina Colônias de bactérias em vários meios diferenciais Enterobacter aerogenes em meio EMB Pseudomonas aeroginosa em meio PSP Método de plaqueamento
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