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01/06/2020 1 CRESCIMENTO E METABOLISMO BACTERIANO Eliane Melo Brolazo FATEC CAMPINAS MICROBIOLOGIA Crescimento das células: aumento do protoplasma celular pela síntese de ácidos nucléicos, proteínas, polissacarídeos e lipídeos; e, absorção de água e eletrólitos. Termina na divisão celular. Em microbiologia, o termo crescimento refere-se a um aumento do número de células (multiplicação) não apenas ao aumento das dimensões celulares. Crescimento bacteriano Crescimento bacteriano ▪Taxa de crescimento: é a variação no de bactérias por unidade de tempo (em sistema fechado/intervalo de tempo) ▪Tempo de geração: é o intervalo de tempo que a população leva para duplicar Ex. E. coli, em condições ótimas de crescimento apresenta um tempo de geração médio de 20 minutos, ou seja, a cada 20 minutos uma nova geração de indivíduos é produzida. Espécies com alta taxa de crescimento tem menores tempos de geração Curva de crescimento bacteriano dividido em 4 fases: Sempre considerando -se um sistema fechado (o que não é comum na Natureza) Crescimento bacteriano A B Curva de crescimento bacteriano A) Fase lag – Ocorre quando as células são transferidas de um meio de cultura para outro ou de um ambiente para outro. É a fase de ajuste e representa o período necessário para adaptação das células ao novo ambiente. As células nesta fase aumentam no volume total em quase duas ou quatro vezes, mas não se dividem. Crescimento bacteriano B) Fase log – crescimento exponencial Células se dividindo a uma taxa geométrica constante até atingir um máximo de crescimento. Componentes celulares como RNA, proteínas e polímeros da parede celular estão também aumentando a uma taxa constante. Crescimento bacteriano 1 2 3 4 5 6 01/06/2020 2 Como as células na fase exponencial estão se dividindo a uma taxa máxima, elas são menores em diâmetro que as células na fase Lag. A fase exponencial chega ao final devido à depleção de nutrientes essenciais, diminuição de oxigênio em cultura aeróbia ou acúmulo de produtos tóxicos. Crescimento bacteriano C) Fase estacionária – Rápido decréscimo na taxa de divisão celular. O número total de células em divisão igual ao número de células mortas. A energia necessária para manter as células na fase estacionária é denominada energia de manutenção e é obtida a partir da degradação de produtos de armazenamento celular (glicogênio, amido e lipídeos). Crescimento bacteriano D) Fase declínio – no células morrendo é maior que o de células duplicando, até que todas as bactérias parem a duplicação. As condições se tornam impróprias para o crescimento, a velocidade de multiplicação é reduzida e as células mortas aumentam em número. Nesta fase o meio se encontra deficiente em nutrientes e rico em substâncias tóxicas produzidas pelos próprios microrganismos Crescimento bacteriano https://www.youtube.com/watch?v=CfOecDMBrOk Crescimento bacteriano METABOLISMO BACTERIANO Eliane Melo Brolazo FATEC CAMPINAS MICROBIOLOGIA O crescimento das bactérias é afetado por condições físicas e químicas do ambiente. Principais fatores: 1- Nutrientes 2-temperatura 3- pH 4- Pressão osmótica e presença solutos (NaCl) 5- Tensão oxigênio 6- Luz (microrganismos fotossintéticos/autotróficos) Fatores ambientais 7 8 9 10 11 12 https://www.youtube.com/watch?v=CfOecDMBrOk 01/06/2020 3 1- Elementos essenciais - Macronutrientes Carbono, oxigênio, hidrogênio, nitrogênio, enxofre e fósforo Carbono: está presente na maioria das substâncias que compõem as células (carboidratos, proteínas, ác. nucleicos) As bactérias podem utilizar o carbono inorgânico existente no ambiente (carbonatos ou de CO2) como única fonte de carbono. São neste caso chamadas de autotróficas. Os microrganismos que obrigatoriamente requerem uma fonte orgânica de carbono são denominados heterotróficos e as principais fontes, são os carboidratos. Nutrientes Oxigênio: é requerido na forma molecular como aceptor final na cadeia de transporte de elétrons aeróbia. Também é elemento importante em várias moléculas orgânicas e inorgânicas. Hidrogênio: como componente muito frequente da matéria orgânica e inorgânica, também constitui um elemento comum de todo material celular. Nutrientes Nitrogênio: como matéria inorgânica (NH3 , NO3, etc.) ou matéria Orgânica ex. aminoácidos, purinas e pirimidinas que compõem as proteínas e ácidos nucleicos. Algumas espécies bacterianas são capazes de fixar o nitrogênio da atmosfera e deixa-lo em forma disponível para os vegetais (ex. Rhizobium) Enxofre: parte de alguns aminoácidos (cisteína e metionina), de vitaminas e grupos prostéticos de várias proteínas importantes em reações de óxido-redução. Pode ser encontrado no ambiente nas formas elementar, oxidada e reduzida; estas duas últimas aparecem como compostos orgânicos e inorgânicos. Nutrientes Fósforo: é encontrado na célula na forma combinada a moléculas importantes como os nucleotídeos (ATP, CTP, GTP, UTP, TTP) e como fosfato inorgânico As substâncias fosforiladas podem estar envolvidas com o armazenamento de energia (como o ATP) ou atuar como reguladoras de processos metabólicos: muitas enzimas tornam-se ativas ao serem fosforiladas. Nutrientes 2- Elementos essenciais – Minerais e Micronutrientes Os elementos ferro, magnésio, manganês, cálcio, zinco, potássio, sódio, cobre, cloro, cobalto, molibdênio, selênio e outros são encontrados sempre na forma inorgânica, fazendo parte de minerais. São necessários ao desenvolvimento microbiano, mas em quantidades variáveis, dependendo do elemento e do microrganismo. Nutrientes Minerais e micronutrientes funções principais: - componentes de proteínas, como o ferro que participa da composição de várias proteínas enzimáticas ou não, de citocromos, etc.; - cofatores de enzimas, como o magnésio, potássio, molibdênio, etc. - Componentes de estruturas, como o cálcio, presente em um dos envoltórios dos esporos; Nutrientes 13 14 15 16 17 18 01/06/2020 4 3- Água: Essencial a qualquer microrganismo, embora as necessidades sejam variadas. É o solvente universal, mas sua disponibilidade é variável (soluções com açúcares ou sais têm menos água disponível). Aw (atividade de água): 0 a 1 4- Fatores de crescimento: Vitaminas e outros compostos, necessidade variável de acordo com a espécie. Necessidades dependem do repertório enzimático de cada espécie Metabolismo bacteriano Microrganismos HETEROTRÓFICOS necessitam de substâncias orgânicas (hidrocarbonetos/carboidratos) como fonte de energia e como matéria prima para crescimento. Substâncias com alto valor energético são aquelas com elevado grau de redução, e grande parte das bactérias vai obter toda energia de que necessita por oxidação desses substratos. (oxidação como o ganho de um hidrogênio e redução como a perda de um hidrogênio) Metabolismo bacteriano As substâncias preferencialmente oxidadas são os açúcares, seguidos de proteínas e, mais raramente, as gorduras. A energia é utilizada para o transporte de nutrientes, o movimento dos flagelos, mas sobretudo para as biossínteses (formação de componentes/duplicação celular) Metabolismo bacteriano Tensão de O2: Extremamente importante no desenvolvimento, os microrganismos comportam-se de forma distinta, sendo classificados como: ▪ Aeróbios ▪ Anaeróbios estritos ▪ Facultativos ▪ Microaerófilos (baixas cc de O2) ▪ Anaeróbios Aerotolerantes Caldo tioglicolato, semi-sólido com gradiente e indicador de O2 Fatores ambientais Alguns microrganismos têm metabolismo facultativo, ou seja, podem fazer respiração aeróbia ou fermentação, dependendo das condições ambientais. Outros grupos são estritamente anaeróbios, sendo inclusive inibidos ou mortos na presença de oxigênio. Metabolismo bacteriano Metabolismo bacteriano Microrganismos que fazem a chamada respiração anaeróbica, na qual o oxigênio é substituído por outro receptorinorgânico de elétrons. 19 20 21 22 23 24 01/06/2020 5 Putrefação Decomposição de compostos nitrogenados (proteínas), utilizando-se de substância orgânica como aceptor-doador de elétrons. É um tipo de fermentação (ocorre sem utilização de oxigênio) que produz produtos finais de odor desagradável: indol, escatol, ácido sulfídrico, putrecina, cadaverina Metabolismo bacteriano 2-Temperatura: todos os microrganismos apresentam uma faixa de temperatura onde se desenvolvem plenamente. Nesta faixa de temperatura podemos determinar as temperaturas mínima, ótima e máxima, para cada espécie. Transporte lento (membrana “geli- ficada”) Reações enzimáticas Denaturação proteínas Fatores ambientais Temperatura - podem ser classificados em 4 grupos, de acordo com os ótimos de temperatura: ▪ psicrófilos (0 a 20°C, ótimo de ≈ 15°C -Flavobacterium) ▪ mesófilos (12 a 45°C, ótimo 37°C - E. coli) ▪ termófilos (42 a 68°C, ótimo 62°C - Thermococcus) ▪ hipertermófilos (70 a 113°C, ótimo 105°C) Fatores ambientais 3-pH: Os ambientes naturais tem uma faixa de pH de 5 a 9, o que comporta o crescimento de diferentes tipos de microrganismos. ▪ Bactérias - faixa entre 7, com algumas acidófilas (Thiobacillus de 0,5 a 6,0 com ótimo entre 2 e 3,5) e outras alcalifílicas (Bacillus e Archaea). ▪ Fungos - tendem a ser mais acidófilos que bactérias (pH <5). Fatores ambientais 4- Pressão osmótica: concentrações de sais (Atividade de água) no meio Classes de organismos, em relação à salinidade Halófilos Halotolerantes Não halófilos Fatores ambientais Atividade de água/agua livre Teor de umidade define a quantidade de água nos alimentos e ingredientes, a atividade de água, em termos práticos, é a água do alimento que vai reagir com microrganismos (e também participar de outras reações, como as enzimáticas). Quanto mais elevada for a atividade da água, mais rápido os microrganismos (como bactérias, leveduras e bolores) serão capazes de crescer; a importância da Aw está na sua relação com a conservação dos alimentos. Fatores ambientais 25 26 27 28 29 30 01/06/2020 6 Três formas de apresentação da água nos alimentos: • Água livre (disponível ou não ligada); • Água adsorvida (hidratada); • Água ligada. Fonte: https://foodsafetybrazil.org/diferenca-entre-atividade-de-agua-aw-e- o-teor-de-umidade-nos-alimentos/#prettyphoto[41050]/0/ Fatores ambientais Para melhorar a estabilidade dos alimentos, a água livre tem sido reduzida através do congelamento, concentração, desidratação parcial ou adição de açúcar ou sal. Aw – 0 a 1 Fatores ambientais Aw – atividade de água entre 0 e 0,20 indicam que a água está fortemente ligada, de 0,70 a 1,00 indicam que a maioria da água encontra- se livre, sendo esta passível de ser utilizada em reações químicas, enzimáticas e para o desenvolvimento de microrganismos. Fatores ambientais https://www.youtube.com/watch?v=05Fl-hSwCzw Fatores ambientais 31 32 33 34 https://www.youtube.com/watch?v=05Fl-hSwCzw
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