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Questões sobre a extração de DNA 1) Onde o DNA está presente e como podemos isolá-lo? O DNA está presente em todos os organismos. Nos eucariotos o DNA fica localizado dentro do núcleo da célula; já nos procariotos, o DNA fica disperso no citoplasma. Para isolar o DNA se usa as técnicas de extração de DNA. 2) Por que o material precisa ser macerado para isolar o DNA? O material é macerado para que a parede celular seja rompida, esse processo também dissocia tecidos, permitindo que a solução de lise haja sobre um número maior de células. 3) Qual o papel do detergente presente na solução de lise no processo de extração do DNA? O detergente faz interação com os lipídeos, causando o rompimento na membrana plasmática e na carioteca. 4) Visto que o DNA não é solúvel em álcool, o que ocorre com suas moléculas quando colocadas neste meio? O alcool causa desidratação no DNA fazendo com que o mesmo se agrupe e se precipite na superfície do extrato. 5) Levando em consideração as condições e propriedades do material genético, justifique o uso da proteinase K e RNase no processo de extração do DNA. A proteinase K é utilizada na desnaturação das proteínas do DNA, fazendo com que ele fica de maneira descompactada; a RNase é utilizada na quebra dos RNAs visto que o mesmo não é útil no processo. 6) Quais as principais formas de avaliar (qualidade) e quantificar o DNA resultante de um processo de extração? O DNA pode ser quantificado para avaliar sua qualidade usando o gel de agarose ou poliacrilamida, aplicando-os junto as amostras de DNA; os padrões de concentração conhecido e analisado pelo espectrofotômetro também são utilizados no processo. Organização do genoma Procarioto 1) O que é um genoma? O genoma é todo o material genético de uma célula; é a informação hereditária. 2) Não é impressionante que a Drosophila tenha genes similares aos nossos? Praticamente todos os genes relacionados ao metabolismo básico de açúcares, proteínas, lipídeos e ácidos nucléicos são compartilhados entre uma enorme gama de organismos. O que podemos concluir dessa conservação biológica em nível molecular? Todos os indivíduos possuem um ancestral em comum, ou seja, toda a maquinaria de síntese e transcrição de DNA será igual. Com isso tambem temos o código genético, que é semi-universal, também pelo fato de termos os genes relacionados ao metabolismo semelhante em quase todos os seres vivos. 3) O número de genes está diretamente ligado ao tamanho do genoma? Explique. Não, por exemplo os genes dos procariotos são menores por não terem introns, e nos mesmos alguns genes estão sobrepostos em outros, além de um único gene poder codificar mais de uma proteína. Sendo assim o genoma pode ser menor, mas isso não significa necessariamente que terá menos genes. 4) Além de genes, o que contém os genomas? O gene é a parte funcional do genoma, encontrado geralmente na eucromatina, já o restante são sequencias não codificadoras que podem atual na regulação genica, sendo encontrada geralmente na heterocromatina. 5) Descreva o DNAmt (DNA mitocondrial). As moléculas de DNA encontradas nas mitocôndrias são pequenas e circulares, geralmente existem muitas copias em uma única mitocôndria, e ele é composto por: 2 RNas ribossômicos, 22 RNAt e 13 genes codificantes de proteínas. 6) Cite as principais diferenças entre o genoma procarioto e o eucarioto. O genoma procarioto é circular enquanto os de eucariotos são lineares; os genomas eucariotos geralmente são bem maiores em relação aos genomas procariotos; em procariotos o genoma é codificado em apenas um cromossomo e em alguns indivíduos há a presença de plasmídeos. 7) Compare as diferenças na estrutura dos genes de procariotos e eucariotos. Os genes eucariotos geralmente são maiores por terem introns que são removidos antes da tradução; nos procariotos os genes são menores por não terem introns, além de haver superposição de genes; os procariotos possuem genes que podem traduzir mais de uma proteína; nos eucariotos a fita molde para a transcrição é a fita antisense, já nos procariotos as duas fitas podem ser transcritas; os procariotos possuem óperons, que são genes específicos de regulação.
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