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PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO Equipamento: Espectrofotômetro UV-VIS LS 55 (FL WINLAB SOFTWARE) Descrição do aparelho: O espectrômetro de luminescência LS 55 da PerkinElmer pode ser utilizado para análises que requeiram fluorescência, fosforescência, quimioluminescência ou bio-luminescência. Operacionalização: Ligue o nobreak que alimenta o equipamento; Ligue o equipamento na chave LIGA/DESLIGA; NOTA: Antes de iniciar a análise é necessário que o instrumento estabilize, aguardar cerca de 15 minutos para a realização da análise. Ligue o computador; Abra o software FL WINLAB; Verifique se os componentes do instrumento estão em funcionamento: -Selecione Application>Status: O instrumento Status Application exibe um esquema do sistema óptico com ícones representando os componentes individuais e a configuração atual do instrumento. Isso permite uma visão geral rápida do status do instrumento. Clique na parte do sistema óptico para o qual você deseja alterar as configurações. Uma caixa de diálogo de configuração específica é exibida. Faça as alterações necessárias e clique em OK; Método fluor: Realizar inicialmente uma varredura da amostra inicial (Branco, Referência, etc.) para obtenção de parâmetros: Selecione: Application>Scan>Pre-scan; Selecione o solvente; Colocar a cubeta com a amostra no equipamento; Clicar no ícone na barra Application Toolbar: NOTA: Aguardar a obtenção dos espectros. Após a conclusão, o monocromador de excitação será definido para o comprimento de onda que foi encontrado para produzir intensidade máxima. Após a obtenção dos espectros uma caixa de diálogo surgirá: Verificar o valor de excitação máxima; Clique em: Application>Scan>Emission: No ítem Excitation (nm) colocar o valor encontrado no Pre-scan; Definir a faixa de varredura: NOTA: 200-900 para uma varredura completa. Para a formatação manual de abscissa e ordenar intervalos, clicar no ícone: Uma caixa de diálogo irá surgir: Colocar o valor desejado. Em seguida feche a janela; Análises de uma segunda amostra: Colocar a amostra na cubeta e em seguida colocar a cubeta no equipamento; Clique em Scan; No item excitation, colocar o valor de excitação máxima obtido da varredura da amostra 1. Identifique a amostra 2. Clique no ícone: NOTA: Um espectro será obtido. OBS: Para análise das demais amostra pertencentes a esse mesmo grupo, repetir os passos 20-24. Se desejar obter o valor da Abscissa das bandas presentes nos espectros clique no ícone: NOTA: O cursor será ativado, ao posicionar sobre a banda o valor da abscissa será exibido na barra inferior. Processamento das análises: Para sobrepor os espectros clique em: File> Open> selecione a análise. Repetir o processo para as análises que desejar integrar.
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