NBR 11257 NB 1295 - Lavagem preparo e esterilizacao de materiais em laboratorio de microbiologia

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ABNT-Associaqao 
Brasileirs de 
Normas T&xicas 
CDU: 663.1:542.2:614.46 1 MAlO/ 1 N B-l 295 
Lavagem, preparo e esteriIiza@o de 
materiais em laborathio de 
microbiologia 
Prccedimento 
Registrada no INMETRO coma NBR 11257 
NBR 3 - Norma Brasileira Registrada 
Origem: Projeto 13: 10.02-032/66 
CB-13 - Comite Brasileirode Alimentos e Bebidas 
CE-13:10.02 - Comissao de Estudo de Metodos Analiticos 
NB-1295 - Miaobiolcgical laboratory materials -Cleaning and sterilization - 
Procedure 
Palavraschave: Artigo de laborat6rio. Microbiologia. Laboratbrio 1 4 paginas 
1 Objetivo 
Esta Norma rira as candi@es exigiveis para Iavar. preparar 
eesterilizarosvariostlposdevldrariase materiaisusados 
pars em&x microbiMgiccs. 
2 Condig6es gerals 
Paraopreparodemateriaisaseremutilizadosemensaios 
mkrc&kMgicas. visando completa assepsia e esteriliza@o. 
e necessaria a utilizagao dos seguintes acess4rios e 
reagentas. 
2.1 Acess6rlos 
2.1.1 Algodao hidr6fobo. 
2.12 Autoclave. 
2.1~ Balarya semi-analitica, corn leglbilldade de 0.1 g. 
2.1.4 BalOes volumetricos de 1000 mL. de borossilkato ou 
vidro neutro. 
2.~ Bandejas de aco inoxidavel. 
2.1s Bastdes de vidro. 
2.1.7 Destilador para agua. 
2.t.a Eszwetes de tamanhos diversos. 
2.1.9 Esponjas de ago, de espuma e de libra sintetica. 
2.1.~ Espatulas de ap inoxidavel. 
2.1.11 Estufa para esteriliza@o e secagem, equipada corn 
termdmetro e termostato. 
2.1.12 Folha de papel afumlnio ou pape Kraft 
2.1.19 Lavaoor automatico de pipetas. 
2.1.11 Luvas de amianto ou raspa de court. 
2.1.16 Lwas de borracha. 
2.1.1s Proveta graduada de 1000 mL, de borOssilicato ou 
vidro neutro. 
2.1.17Tesoura.. 
2.1.18 PinGas de ago inoxidavel. 
2.1.19 lndicadores de esteriliza@o pita, tiota ou ampola 
corn suspenSeo de esporas de Bacillus stearother~ophllus). 
2.1.20 Bicu de Bunsen. 
2.1.21 Tripe. 
2.122 Tela de amianto de 22 cm de diametro. 
2.1.22 Bequeres de borossilicato ou vidro neutro. 
2.1.24 EStilete de pwna fina. 
2.1.26Cestasdearamedea~inoxidavelparaacondiclonar 
tubas de ensaios para esterilizagao. 
2.1.2s Barbante. cordone ou fita adesiva tip0 crepe. 
C6pia impressa pelo Sistema CENWIN 
2 NE-1 295/l 990 
2.1.27 Gaze. 
21.2~ C&as de a~ inoxiddvel corn fundo perfurado para 
secagem de malenal. 
21.2sPorta-placasde Petri em ar$inoxid&elou aluminio. 
corn tampa. 
2.~0 Porta-pip&as, em a~ inoxid&?l ou aluminio, corn 
tampa. 
2.2 Reagentes 
2.21 Dicromato de potksio. 
2.2.2 Acido sultirico. 
2.2.2 Agua destilada. 
2.2.4 DetergenIe neutro, liquid0 ou em p6. at&&o e 
biodegradavel. 
2.26 Meio de cultura adequado & cepa padrao utilizada no 
teste de caracteristicas inibiioras do detergente. 
2.3 Preparo das solu~des 
2.5.1 Mlstura sultocrdmlca 
dicromato de pOlaSSi0 ..__.....__... 6Og 
dclU0 sulffirico .._....._...... 600 mL 
agua destilada 200 mL 
Dissolver o dicromato de pot&i0 em agua destilada 
quente e deixar esfriar. COlOCar 0 recipiente em agua frla 
ou banho de gelo. Adicionar lentamente 0 &.cido sulfljrico. 
corn agita@o constante. 
3 Condi*es especificas 
3.1 DesconlamlnaCBo do material 
Antes da lavagem, todo 0 material contaminado deve set 
esterillzado em autoclave, a 121 “c, por 30 min. 
3.2 Prepare de provetas. balbes, fiascos de 
Erlmmayer. bhquerea e tunls 
3.21 Lavagcm 
x2.21.1 Law corn agua e detergente. utilizandc esponja 8 
escovete. 
52.1.2 Caso 0s materiais apresentem incrusta@es ou 
r&duos gordurosos. proceder ~9 imer& destes em solu@o 
sulfocr6mica. 
32.1.1 Enxaguar dez vezes corn Bgua corrente. enchendo 
e esvaziando tOtalmente a Wdraria. 
x2.1.4 Utilizar, no liltimo enxagiie, Bgua destilada. 
a~.~.sDeixardrenara~guadasvidranasemcestasdea~ 
inoxidavel corn fundo perfurado. 
a.2.l.a Secar em estufa a 100°C. 
3.2.2.1 C&car tamp& de a!gcdao hidrbfobo e gaze no 
bccal dos balks e fiascos de Erknmeyer. Cobrir cum 
folha de aluminio ou papel Kraft e fixar corn barbante, 
cordon& ou fita adesiva tip0 crepe. 
3.22.2 Cobrir OS bocais e as hastes dos funis e OS bocais 
das provelas e dos b6queres corn folha de alumlnio ou 
papel Krafte fixar corn barbante, cordcm& ou fita adesiva 
tip0 crepe. 
3.2.2.3 ldentificar o material corn data de esteriliza@o e 
prova de esteriliza@o. 
3.2.2.4 Esterilizarem autoclave a 121oC, por30 min. ou em 
eStufa a 170°C . 180°C por 2 h. 
Nota: Frascos dsstinados aa prepam ds meios de cultu~, que 
sao submetidos a autoclava@o. dlSpensam estedliza@o 
p@Aa. 
3.3 Prepare de placas de Petri autoclav~veis 
33.1 Lawgem 
2.5.1.1 Retirar 0 agar corn auxilio de espatula. 
3.3.1.2 Law corn ggua corrente, detergente e esponja. 
retirando todos 0s residues do interior da tampa e fundo 
das placas, asslm corno todas as marcas extemas. 
3.3.1.3 Enxaguar aproximadamente dez vexes em dgua 
corrente. 
3.3.1.4 Utilizar no riltimo enxagiie Bgua destilada. 
291.5 Cobcar em bandejas as plazas embwcadas (tampas 
e lundos) 8 secar em estufa a temperatura compativel 
corn o tipo de matedal use& rwstas e por tempo necess&lo 
a operaC80. 
3.8.2 Esteriliza~ 
3dP1 Juntar tampa e fun& adequadamente e acu?dkiiar 
para esteriliza@o em porta-placas ou embrufhar 
individualmente. ou em grupos de dez. em papel Kraft. 
3.3.2.2 ldentificar o material e datar. Colocar lndkador de 
esteriliza@o. 
5.3.2.3 Esterilizar em estufa a 160°C. por 2 h, ou a 160°C. 
por 1 h. ou em autoclave por 30 min. secando em seguida 
em estufaa 100°C. poisa,~teriliza~Bop&calorsecon~o 
6 compativel corn todos os tipos de materiais. 
3.4 Preparo de plpetas 
3.4.1 Lavagem 
s.4.1.( Retirar o algodao do bccal de cada pipeta corn 
estilete de ponta fina ou pinqa. 
3.4.1.2 lmergir as pipetas em sol1.1~80 detergente por 24 h. 
2.4.1.3 Enxaguar em agua corrente. 
9.4.1.4 lmergir em solu@o sulfocrbmica at6 tota elimina@o 
dos residues. 
Equipe Auditora
Equipe Auditora
Equipe Auditora