tecnicas de concentração e flutuação

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TÉCNICAS DE CONCENTRAÇÃO, 
FLUTUAÇÃO E CENTRIFUGO FLUTUAÇÃO 
TÉCNICAS DE CONCENTRAÇÃO 
OBJETIVOS 
• Estabelecer diferenças entre exame direto e exame 
por concentração das amostras; 
• Perceber os diferentes métodos de diagnóstico 
parasitológico; 
• Desenvolver os métodos de diagnóstico 
parasitológico; 
• Associar os fundamentos específicos dos métodos 
parasitológicos , conforme suas aplicações; 
• Desenvolver capacidade para critério de escolha de 
método parasitológico. 
 
TÉCNICAS DE CONCENTRAÇÃO 
• As técnicas de concentração fazem parte dos 
procedimentos de rotina de um exame para a pesquisa 
de parasitos e de organismos que não foram 
observados no exame direto a fresco. 
São três os principais objetivos dessas técnicas 
1. Aumentar o número de cistos, oocistos, ovos e larvas 
na preparação 
2. Eliminar grande parte dos detritos fecais 
3. Apresentar os organismos no seu estado normal 
As técnicas de concentração são indicadas para separar 
cistos e oocistos de protozoários e ovos de helmintos 
dos detritos fecais, por meio da densidade. 
TÉCNICAS DE CONCENTRAÇÃO 
As técnicas de concentração se dividem em: 
• Flutuação 
• flutuação simples 
• centrífugo-flutuação 
 
• Sedimentação 
• sedimentação simples 
• centrífugo-sedimentação 
TÉCNICAS DE CONCENTRAÇÃO 
Técnica de Flutuação 
Foi introduzido por Bass para recuperar ovos de 
Ancilostomídeos 
Fundamenta-se no princípio da diferença entre as 
densidades de ovos de helmintos, cistos e 
oocistos de protozoários 
As densidades dos ovos, cistos e oocistos de 
parasitos variam de 1,05 a 1,15 g/ml, das 
espécies Clonorchis e Opithorchis podem valer 
1,20 g/ml 
 
TÉCNICAS DE CONCENTRAÇÃO 
Principais Vantagens Técnica de Flutuação 
• Formar uma membrana na superfície do tubo de 
ensaio, com poucos detritos fecais e alta 
concentração de formas de parasitos 
• Promover a retirada seletiva de ovos e cistos, mesmo 
quando esses são em pequeno número das fezes. 
Principal Desvantagem da Técnica de Flutuação 
A alta densidade dos reagentes pode danificar a parede 
dos ovos e cistos dos parasitos, dificultando sua 
identificação 
Gorduras e óleos presentes nas fezes flutuam junto 
com os ovos e cistos de parasitos, dificultando sua 
identificação 
 
 
 
TÉCNICAS DE CONCENTRAÇÃO 
Técnica de Flutuação 
• A densidade da maioria dos ovos e cistos não são 
conhecidas. Isso levou a serem usadas diversas soluções, 
com diferentes densidades específicas, objetivando a 
recuperação das forma parasitárias. 
Ovos de Ascaris, Taenia, Schistosoma, Fasciola e Fasciolopis 
são categorizados como “pesados” e não são isolados 
pela técnica de flutuação. 
• Principais soluções usadas nas técnicas de flutuação 
Cloretos de sódio, sacarose, sulfato de zinco, sulfato de 
magnésio. 
A densidade dessas soluções variam de 1,18g/ml a 
1,26g/ml 
 
 
Flutuação em Solução Saturada de Cloreto 
de Sódio 
Técnica de Willis 
• Fundamenta-se na propriedade de certos ovos de 
helmintos a flutuarem em solução de densidade 
elevada e aderirem ao vidro da lâmina. 
• É uma técnica eficiente para pesquisa de ovos com 
densidade baixa como os de Ancilostomídeos e 
Trichstrongylus orientalis 
• Não é indicado para ovos de trematódeos, Enterobius e 
Ascaris. 
 
Flutuação em Solução Saturada de 
Cloreto de Sódio 
Técnica de Willis 
1. Usar luvas durante todo o procedimento 
 
2. Colocar 1 a 2 g de fezes em um pequeno frasco 
de vidro de 3cm Ǿ(cuba), de 20ml, adicionar ¼ 
da cuba com cloreto de sódio saturado 
 
3. Homogeneizar por completo as fezes na solução 
salina 
Flutuação em Solução Saturada de 
Cloreto de Sódio 
Técnica de Willis 
1. Completar o volume até a borda da cuba, sem 
derramar a suspensão e colocar uma lamínula 
(22x22)ou uma lâmina sobre a superfície da 
solução 
2. A lamínula ou a lâmina deve ficar em contato 
com o menisco da suspensão de fezes por 20 
minutos para a aderência dos ovos à face 
inferior da lamínula 
3. Remover a lamínula invertendo rapidamente o 
lado da lâmina em contato com a solução , para 
cima. Examinar ao microscópio com objetiva de 
pequeno aumento. 
Flutuação em Solução Saturada de Cloreto de Sódio 
Flutuação em Solução Saturada de Cloreto de Sódio 
https://www.google.com/search?biw=1280&bih=579&tbm=isch&sa=1&ei=yfpeXaPHEom75OUP__aT4AU&q=exame+de+willis 
Flutuação em Solução Saturada de Cloreto de Sódio 
Técnica de Willis 
Flutuação em Solução Saturada de Cloreto de Sódio 
Flutuação em Solução Saturada de 
Cloreto de Sódio 
Técnica de Willis – Observações 
• Não deverá formar bolhas entre a solução de 
fezes e a lâmina em contado 
• A homogeneização das fezes deve ser completa 
para a liberação dos ovos na solução 
• A flutuação dos ovos não ocorre quando o 
tempo for menor que 20 e maior que 60 minutos 
 
 
 
 
Técnicas de Centrifugo-flutuação em 
solução de Sulfato de Zinco 
Técnicas de Centrifugo-flutuação em 
solução de Sulfato de Zinco 
Técnicas de Faust et al. 
Foi a primeira técnica desenvolvida para o diagnóstico de cistos 
de protozoários e de ovos de helmintos. 
Essa técnica permite a separação dos cistos e dos ovos, do 
excesso de artefatos da solução de fezes, por meio da 
densidade elevada 
As formas parasitárias são retiradas da superfície da solução 
densa e os artefatos ficam da camada inferior da superfície 
Ovos de trematódeos e de Ascaris não são observados nessa 
técnica 
A solução de sulfato de zinco usada no preparo dessa técnica 
têm densidade de 1,18g/ml. 
 
 
 
 
 
Técnicas de Centrifugo-flutuação em 
solução de Sulfato de Zinco 
Preparo da Solução 
Sulfato de Zinco, Densidade 1,20 g/ml 
• Sulfato de zinco, cristais (ZnSO4) 400g 
• Água destilada-deionizada 
• Ajustar a densidade em 1,20 g/ml com 
desintômetro, pela adição do sal ou da água. 
Técnicas de Centrifugo-flutuação em 
solução de Sulfato de Zinco 
Técnicas de Faust et al. 
 
1. Usar luvas durante todo o procedimento 
2. Colocar 1 a 2 g de fezes em um frasco contendo 20ml 
de água destilada-deionizada . Filtrar a suspensão em 
um tubo de ensaio, passando a solução de fezes em 
uma gaze dobrada duas vezes. 
3. Adicionar água até 2/3 da capacidade do tubo, agitar e 
colocar o tubo para centrifugar 650x g/min 
4. Retirar o tubo da centrífuga, desprezar o sobrenadante, 
agitar o precipitado, adicionar até 2/3 da capacidade do 
tubo com sulfato de zinco, e centrifugar 650x g/min 
 
Técnicas de Centrifugo-flutuação em 
solução de Sulfato de Zinco 
Técnicas de Faust et al. 
5 Retirar o tubo da centrífuga, sem agitá-lo e colocar em 
uma estante 
 6 Com uma alça de arame tocar no menisco da solução do 
tubo de ensaio, retirando a amostra para ser 
transferida em uma lâmina de vidro. Repetir esse 
procedimento até obter uma quantidade suficiente 
7 Cobrir a solução transferida na lâmina, com uma 
lamínula (22x22mm) para realizar a pesquisa de 
cistos de protozoários e ovos de helmintos em 
aumento de 10x, e depois com o de 40x. 
Técnicas Centrifugo-flutuação em solução de Sulfato de Zinco 
Técnicas de Faust et al. 
 
 
http://dc310.4shared.com/doc/Q1Z4cL4i/preview.html 
Técnicas de Centrifugo-flutuação em 
solução de Sulfato de Zinco 
Os protozoários mais frequentemente 
encontrados no método de concentração, por 
flutuação, principalmente o método de 
centrifuga-flutuação são os seguintes: 
 
• Amebas 
 
• Giardia 
Métodos de flutuação e os Protozoários mais 
encontrados 
• Várias espécies de amebas são encontradas no 
homem: 
• Entamoeba histolytica 
• Entamoeba hartmanni 
• Entamoeba coli 
• Entamoeba gingivalis• Endolimax nana 
• Iodamoeba butschilii 
• Dientamoeba fragilis 
 
Métodos de flutuação e os Protozoários mais 
encontrados 
Métodos de flutuação e os Protozoários mais encontrados 
Digital microscopic images of each of parasite cyst types. A: BALANTIDIUM COLI; B: ENDOLIMAX NANA; 
C: ENTAMOEBA COLI; D: ENTAMOEBA HARTMANNI; E: ENTAMOBA HISTOLYTICA; F: ENTAMOEBA 
POLECKI; G: GIARDIA LAMBLIA; H: IODAMOEBA BUTSCHLII; I: CHILOMASTIX MESNILI 
Entamoeba histolytica 
Somente a E. histolytica é capaz de ser patogênica ao homem. 
• Amebíase intestinal: disentérica e colites não disentéricas ( 
prostração, apendicite amebiana, perfuração, peritonites, 
hemorragia, colites). 
• Amebíase extra intestinal 
Amebíase hepática: aguda não supurativa, abscesso hepático 
e necrose. 
Amebíase cutânea: pode invadir a pele na região perianal. 
Amebíase em outros órgãos: pulmão, cérebro, baço e rim. 
 
 
Métodos de flutuação - Protozoários mais 
encontrados 
Cistos de E. histolytica 
histolytica 
 
 
Métodos de flutuação - Protozoários mais encontrados 
• Giardia 
 
Métodos de flutuação - Protozoários mais 
encontrados 
Sintomatologia e Patologia 
forma aguda: diarreia aquosa, explosiva, 
fétida, dores abdominais, insônia, 
irritabilidade, náuseas e vômito. 
 
forma crônica: esteatorréia,debilidade perda 
de peso e atapetamento da mucosa, má 
absorção de nutrientes (vitaminas, proteínas 
e lipídeos) 
• Cistos Giardia 
 
Métodos de flutuação - Protozoários mais 
encontrados 
Fim 
TÉCNICAS DE CONCENTRAÇÃO, 
FLUTUAÇÃO E CENTRIFUGO FLUTUAÇÃO