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Parasitologia Clínica Parasitos Intestinais Profa Dra. Raysa Farias Introdução As helmintíases transmitidas pelo solo (HTS) são de grande preocupação na saúde pública mundial. São causadas por um grupo de parasitas intestinais compreendendo Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, Necator americanus e Ancylostoma duodenale, transmitidos por contaminação fecal do solo. Nematelmintos: – Ascaris lumbricoides (ascaridíse) – Ancilostoma duodenale ou Necator americanus (ancilostomíase) – Strongyloides stercoralis (estrongiloidíase) – Enterobius vermiculares (enterobíase ou oxiuríse) – Trichuris trichiura (trichiuríase ou tricocefalíase) Platelmintos: – Taenia saginata e Taenia solium (teníase) – Hymenolepis nana (himenolepíase) – Diphylobothrium latum (difilobotríase) B. Protozoários: – Entamoeba histolytica e Entamoeba dispar (amebíase) Giardia intestinalis (mais conhecido como Giardia lamblia) P. Intestinais Ascaris lumbricoides (ascaridíse) Ancilostoma duodenale ou Necator americanus (ancilostomíase) Strongyloides stercoralis (estrongiloidíase) Enterobius vermiculares (enterobíase ou oxiuríse) Trichuris trichiura (trichiuríase ou tricocefalíase) Taenia saginata e Taenia solium (teníase) Entamoeba histolytica e Entamoeba dispar (amebíase) Giardia intestinalis (mais conhecido como Giardia lamblia) Diagnóstico das helmintíases As helmintíases são diagnosticadas pelo exame de amostras fecais ou de outras amostras com presença de ovos, larvas ou, às vezes, vermes adultos ou seus segmentos. O exame macroscópico das fezes quanto à sua cor, consistência, a visualização da presença de qualquer verme ou seus segmentos, ou de sangue ou de muco podem dar uma pista sobre o agente etiológico. Amostras fecais frescas de quantidade aproximadamente de uma colher das de chá grande ou cerca de 10 mL de amostra de fezes líquidas devem chegar ao laboratório idealmente dentro de uma hora após a coleta11. Além da análise direta das fezes, o diagnóstico de algumas helmintíases pode ser realizado ou inferido por outros exames, tais como hemograma, sorologia e testes moleculares. Métodos de concentração fecal – as técnicas de concentração fecal podem aumentar a sensibilidade diagnóstica. O método de Hof fman, Pons e Janer, também conhecido como método de Lutz, pela sedimentação espontânea, permite o encontro de ovos e larvas de helmintos e de cistos de protozoários. Os métodos de Blagg (também conhecido por método de MIF), de Ritchie e Coprotest, pela sedimentação por centrifugação, são usados para a pesquisa de ovos e larvas de helmintos, cistos e alguns oocistos de protozoários. Já o método de Willis, baseado no princípio de flutuação espontânea, é mais indicado para a pesquisa de ovos leves, principalmente de ancilostomídeos. Por sua vez, o método de Faust, combina centrifugação e flutuação, usado para a pesquisa de cistos e alguns oocistos de protozoários, permite, também, o encontro de ovos leves Contagem de ovos (Método de Kato – Katz) Este é o método mais comumente empregado para quantificação de ovos de helmintos, muito útil em levantamentos epidemiológicos para determinação da carga de parasitas, além da simplicidade e do baixo custo. Esse método se baseia na concentração dos ovos de helmintos pela f iltração em uma malha que, ao reter os detritos maiores, permite a passagem somente dos detritos menores e dos ovos. A OMS recomenda a realização desse exame com lâminas duplicadas ao se utilizar esse método. Técnicas FLOTAC e mini-FLOTAC São métodos de contagem de ovos fecais desenvolvidos mais recentemente. FLOTAC determina a flutuação da amostra em uma centrífuga, seguida pelo corte da suspensão flutuante e quantificação de ovos. A principal vantagem é poder ser usado para a detecção de diferentes helmintos, bem como protozoários intestinais simultaneamente. Alto custo e necessidade do uso de centrífuga são os principais fatores limitantes para sua utilização. O método Mini-FLOTAC, uma forma simplificada do FLOTAC, foi desenvolvido para locais com recursos limitados, com a vantagem de poder avaliar amostras fecais preservadas. A sensibilidade do mini-FLOTAC é comparável à do Kato-Katz, mas inferior à do FLOTAC. Método de Graham (Fita Adesiva) É um método específico para pesquisa de ovos de Taenia sp. e Enterobius vermicularis, situação na qual o prurido anal leva à suspeita diagnóstica. A técnica é simples, recolhendo-se os ovos que ficam na região anal, perianal e perineal pela parte adesiva, aplicando-se a seguir sobre uma lâmina para visualização por microscopia Cultura A cultura é usada principalmente para recuperar S. stercoralis, que é vivíparo. Ancilostoma pode ser artificialmente cultivado em laboratório para produzir larvas rabdiformes. Existem muitos métodos, alguns dos quais são obsoletos, enquanto outros são usados em ambientes de pesquisa: Harada-Mori (cultura em tiras de papel de filtro); técnica de cultura de inclinação em papel de filtro usando placa de Petri; cultura em carvão; técnica de cultura de Baermann- Morais e de Rugai. As desvantagens das técnicas de cultura incluem a necessidade de perícia técnica, dificuldade de execução sob condições de campo e a demora. Além disso, amostras antigas e refrigeradas não são adequadas Exames laboratoriais para o diagnóstico das infecções intestinais por protozoários. Hemograma A eosinofilia (>600/mm3 ou > 6%) pode ser usada como marcador de possível infecção por helmintos. Muitos estudos mostraram correlação entre a presença de eosinofilia e helmintíase, que é geralmente observada em cerca de 47% dos casos de ascaridíase, 78% dos casos de tricuríase e 82% dos casos de estrongiloidíase, até 60% dos casos de infecção por ancilóstomo. Além de eosinofilia, hemoglobina de ≤ 5g/dL TÉCNICA DE CONCENTRAÇÃO As técnicas de concentração dividem-se em flutuação e sedimentação. E cada uma subdividem-se em flutuação simples e centrifugo-flutuação, sedimentação simples e centrifugo-sedimentação. Dentre as técnicas de concentração, citaremos três técnicas. Técnica de flutuação Técnica de flutuação em solução saturada de cloreto de sódio: métodode willis Observações importantes dessa técnica: se a homogeneização das fezes for incompleta, haverá uma imperfeita separação dos ovos e dos detritos fecais e/ou o período de flutuação dos ovos for curto (menos de 30min.) ou longo (mais de 60min.), os ovos que fl utuam na superfície podem descer para o fundo da cuba. Amostra: Material fecal não preservado (fezes frescas). Reagente: Cloreto de Sódio (NaCl). Preparação da Solução: Solução Saturada de Cloreto de Sódio, densidade 1,20 g/ml. 1. Usar luvas durante todo o procedimento; 2. Colocar de 1 a 2 g de fezes frescas, em uma cuba de 3 cm de diâmetro com capacidade aproximada de 20 ml. Completar com ¼ da capacidade do recipiente com a solução saturada de cloreto de sódio; 3. Suspender as fezes na solução saturada salina até homogeneizar completamente; 4. Completar o volume. Colocar uma lamínula (22 x 22 mm) ou uma lâmina sobre a borda da cuba; 5. A lamínula deve fi car em contato com o menisco durante 30 a 45 minutos: não deverá haver formação de bolhas de ar entre a lamínula e a superfície do liquido. A gota que contém os ovos se adere a face inferior da lamínula; 6. Remover a lamínula e inverter rapidamente a posição sobre uma lâmina. Examinar o microscópio com objetiva de pequeno aumento. Técnicas de sedimentação Técnica de sedimentação espontânea: método de hofman, pons e janer - hpj (1934) O método de Hofman, Pons e Janer - HPJ (1934) sedimentação espontânea é a técnica-padrão mais utilizada em laboratórios. Considerado padrão ouro para diagnóstico, apresenta fácil manuseio, baixo custo e boa sensibilidade, detectando cistos, larvas e ovos. No método de HPJ (1934) são realizados procedimentos bem simples, como a homogeneização das fezes com água, a filtração, repouso e microscopia em lâmina com lugol. Técnica de centrifugo-sedimentação:método de Ritchie A técnica de Ritchie, feita através da centrífugo-sedimentação, acaba superando a técnica de Faust. Por ser um método de sedimentação possui a desvantagem de ocorrer presença de detritos fecais no sedimento analisado interferindo na identificação dos parasitas. A técnica de Ritchie é realizada conservando as fezes em uma solução de MIF (Mertiolado-Iodo-Formaldeído), depois é realizada sua filtração e permanência em repouso durante 20 minutos, após esse processo é adicionado o éter e feito sua agitação e centrifugação, desprezando o sobrenadante e utilizando o sedimento para ser analisado em uma lâmina com lugol. Técnica quantitativa: método de KATO-KATZ Utilizado na detecção ovos de Schistosoma mansoni, Trichuris trichiura e Ascaris lumbricoides. O método de Kato-Katz é um dos mais conhecidos, sendo de fácil execução e baixo custo é uma técnica quali-quantitativa e é dentre outras considerada assertiva. Ao invés da técnica de Kato-Katz em diversos casos pela comparação entre seus resultados, a técnica de Mini-FLOTAC é recomendada para laboratórios de baixos recursos por não requerer uso de centrífuga ou outros equipamentos, possuindo uma alta precisão na contagem de ovos revelou-se uma possibilidade de aplicação. Permite identifiCação e a quantificação por grama de fezes das infestações por alguns helmintos. Cistos de protozoários podem não ser identificados por este método. A sua execução pode ser inviável em fezes diarréicas. Materiais utilizados: Lâminas/lamínula de celofane, folha absorvente, placa perfurada, tela bastão, placa de Petri, solução diafanizadora (azul de metileno ou verde malaquita) 1. Preparar a solução diafanizadora (verde de malakita); 2. Cortar papel celofane em tamanho de lamínula e mergulhar na solução diafanizadora por 24 horas; 3. Colocar uma amostra de fezes sobre o papel absorvente; 4. Comprimir as fezes na tela para passagem de ovos de helmintos e detritos menores que os ovos; 5. Transferir as fezes peneiradas para a placa perfurada; 6. Após encher, retirar a placa sobre a lâmina; 7. Com o auxílio de uma pinça, pegar o papel celofane e cobrir o bolo de fezes, inverter a lâmina em papel e pressionar; 8. Aguardar duas horas e examinar ao microscópio todos os ovos presentes na preparação. CALMA QUE AINDA TEM MAIS .... MAS EU TE EXPLICO MAIS SOBRE OS PARASITOS INTESTINAIS E AS TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICOS NAS PRÓXIMAS AULAS TRAGAM JALECO E VENHAM PARA A AULA PRÁTICA PREPARADOS FAÇAM PERGUNTAS E COLOQUEM A MÃO NA MASSA PARA APRENDEREM