Exercicio Imuno Clínica

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FACULDADE DE INTEGRAÇÃO DO SERTÃO
EXERCICIO DE IMUNOLOGIA CLÍNICA
Em que consiste a resposta imune?
O sistema imunológico humano (ou sistema imune, ou ainda imunitário) consiste numa rede de células, tecidos e órgãos que atuam na defesa do organismo contra o ataque de invasores externos. Estes invasores podem ser microrganismos (bactérias, fungos, protozoários ou vírus) ou agentes nocivos, como substâncias tóxicas (ex. veneno de animais peçonhentos). As substâncias estranhas ao corpo são genericamente chamadas de antígeno. Os antígenos são combatidos por substâncias produzidas pelo sistema imune, de natureza proteica, denominadas anticorpos, que reagem de forma específica com os antígenos. Quando o sistema imune não consegue combater os invasores de forma eficaz, o corpo pode reagir com doenças, infecções ou alergias.
O sistema imune é dividido em dois tipos de imunidade que caracterizam dois tipos de respostas: a imunidade inata ou natural e a imunidade adquirida ou adaptativa.
Quais são os órgãos linfoides primários e o que cada um deles produz?
Os órgãos linfoides primários produzem os componentes celulares do sistema imunológico. Eles são (1) medula óssea e (2) o timo. As principais funções dos órgãos linfoides, como componentes do sistema imunológico, é proteger o corpo contra patógenos ou antígenos invasores (bactérias, vírus, parasitas). A base deste mecanismo de defesa, ou resposta imunológica, é a habilidade de distinguir o próprio (self) do não próprio (nonself) ao organismo. Os linfócitos incluem dois grupos principais de células: (1) os linfócitos B, que podem reconhecer qualquer tipo de antígeno, como proteínas, polissacarídeos, lipídeos, ácidos nucleicos e substancias químicas pequenas. (2) os linfócitos T, reconhecem apenas a sequência primária de pequenos peptídeos derivados de antígenos protéicos. Todos os linfócitos se originam na medula óssea vermelha, mas os linfócitos T completam a sua maturação no timo, enquanto os linfócitos B saem da medula já como células maduras. Por esse motivo, a medula óssea e o timo são chamados órgãos linfoides centrais.
Os testes sorológicos são empregados em uma diversidade de aplicações para suprirem a deficiência dos métodos parasitológicos ou microbiológicos, na pesquisa de antígenos, anticorpos ou imunocomplexos. Eles são escolhidos por sua rapidez, automação, simplicidade operacional e baixo custo. Cite cinco aplicações onde podem ser solicitados esses ensaios.
Pesquisa de anticorpos no diagnóstico individual.
Elucidar processos patológicos com sintomas e sinais clínicos confundíveis.
Diagnosticar a doença congênita.
Pesquisa de anticorpos em inquéritos soroepidemiológicos.
Pesquisa de antígenos.
Descreva a tecnologia dos hibridomas para obtenção de anticorpos monoclonais. Cite três exemplos do uso de suas aplicações.
Imunização do ratinho com um antígeno
Produção pelo baço do ratinho de anticorpo especifico contra aquele antígeno;
Retirada do baço do ratinho para coleta de células esplênicas, linfócitos B;
Seleção das células do mieloma incapazes de produzir anticorpos e sem HGPRT.
Fusão em PEG (polietilenoglicou) dos linfócitos B com as células do mieloma 
Transferência das células para o meio HAT (hipoxantina, aminopterina e timidina).
As células esplênicas morrem em cultura e as células de mieloma morrem em meio HAT, somente sobreviverão as células híbridas, uma vez que, o mieloma confere a habilidade do crescimento em cultura e as células esplênicas portam HGPRT e TK.
Os híbridos crescem porque as células esplênicas produzem HGPRT e o mieloma confere a imortalidade.
Hibridomas que produzem anticorpos específicos para o antígeno, são selecionados para crescerem e multiplicarem-se.
Aplicações: Imunofenotipagem; Imunodiagnóstico; Diagnostico de terapia tumoral
O antígeno recombinante para o diagnóstico da Doença de Chagas encontra-se na concentração inicial de 8mg/ml. Dr. Gustavo retirou 5 μL desde antígeno para obter uma concentração final de trabalho de 10μg/ml. Pergunta-se: qual o volume final de trabalho necessário por Dr. Gustavo para execução deste diagnostico? 4 mL ou 4000uL é o volume final
5 uL = 0,005 mL
10 ug/ mL = 0,01 mg/ mL
C1 . V1 = C2 . V2
8 . 0,005 = 0,01 . V2
0,04 = 0,01 . V2
V2 = 0,04/0,01
V2 = 4 mL
Um jovem utilizou sua amostra de urina para o diagnóstico de gravidez e, diante da formação de agregados aglutinantes, comemorou sua condição de gestante. Dra. Semíramis, conhecedora de duas metodologias aglutinantes para tal diagnostico (aglutinação indireta e inibição da aglutinação indireta) ficou pensativa e preocupada com a comemoração da jovem. Dra. Samíramis teria realmente razão para estar pensativa? 
A Dra. Teria razão para estar pensativa, pois a presença de agregados aglutinantes ou seja a presença de aglutinação no teste de gravidez através da urina, predispõe resultado negativo. O teste seria positivo na ausência de aglutinação.
Um indivíduo observou que seus glóbulos vermelhos são aglutinavam diante do soro anti-A e anti-B do sistema ABO e anti-D do sistema Rh. Contudo, seu soro aglutinava o sangue tipo A, B, AB e O. O que se pode concluir sobre a tipagem sanguínea deste indivíduo? Justifique.
Tipo O+ que possui no plasma o anti-A e anti-B e se possui o anti-D isso quer dizer Rh positivo.
Descreva teste de floculação (VDRL) e identifique suas características, diferenciando do teste FTA-ABS. 
Floculação, variante da aglutinação indireta, ocorre quando a interação direta de anticorpos específicos com o antígeno leva à formação de imunocomplexos em meio líquido, detectáveis com o auxílio de lupa ou microscopia óptica. O VDRL é o único teste de floculação que pode ser utilizado para a pesquisa de anticorpos não treponêmicos no líquor.
A diferença entre os dois testes é que na floculação o teste é não treponêmico e o FTA-ABS é um teste treponêmico.
Diferencie aglutinação direta de aglutinação indireta. Exemplifique.
DIRETA: O Antígeno faz parte naturalmente da célula (hemácias, bactérias, protozoários...), e haverá aglutinação dessas células promovida por anticorpos contra esses antígenos. Também é direta a aglutinação de hemácias revestidas de auto-anticorpos por anticorpos anti-Ig (anemias auto-imunes). Ex.: Tipagem de grupos sangüíneos do Sistema ABO e Rh (Ags específicos), Reação de Paul-Bunnel-Davidson (Ags heterófilos), teste de aglutinação para o diagnóstico de Salmonelose, Brucelose e Leptospirose. Detecção de anticorpos contra o vírus da rubéloa, sarampo, influenza e enterovírus, entre outros.
INDIRETA: O testes de aglutinação indireta ou passiva emprega a adsorção de anticorpos ou de antígenos solúveis protéicos ou polissacarídeos na superfície de micropartículas inertes (suporte) que não interferem na interação antígeno-anticorpo, como plásticos, poliestireno (látex), gelatina, carvão e hemácias formalizadas e taninizadas de aves e carneiro.
Ex: Pesquisa de anticorpos específicos utilizam suporte com antígeno adsorvido, enquanto o teste com suporte revestido de anticorpos (aglutinação reversa), é empregado, por exemplo, na determinação semiquantitativa da proteína C reativa, pesquisa de antígenos bacterianos no LCR, na detecção de HCG na urina e de antígenos virais nas fezes.
 
Descreva o teste de hemaglutinação (principio e interpretação dos resultados) para o diagnóstico da sífilis. 
HEMAGLUTINAÇÃO é uma técnica que o utiliza o teste treponêmico MHA-TP (microhemaglutinação para Treponema pallidum). O teste de hemaglutinação indireta ou passiva baseia-se na ligação dos anticorpos treponêmicos presentes no soro com hemácias que contêm, na sua superfície, antígenos de Treponema pallidum (cepa Nichols). Os anticorpos presentes no soro ligam-se aos antígenos que estão na superfície das hemácias, resultando na hemaglutinação.
Numa leitura e interpretação da reação de hemaglutinação ou de aglutinação, os resultados possíveis são estes: 
Reagente Quando há hemaglutinação (ou aglutinação), forma-se uma redeou “tapete” de hemácias (ou de partículas de gelatina) unidas aos anticorpos, a qual se espalha por toda a superfície do poço da placa em que foi realizada a reação; Não reagente Quando não há hemaglutinação, as hemácias (ou as partículas de gelatina) se depositam e formam um botão compacto no fundo do poço da placa em que a reação foi realizada;
Identifique o genótipo e o fenótipo de um indivíduo O verdadeiro e O Bombay. 
Verdadeiro:
	FENOTIPO
	GENOTIPO
	A
	IAIA / IAIa
	B
	IBIB / IBIb
	AB
	IAIB
	O
	ii
FALSO (bombay)
	FENOTIPO
	GENOTIPO
	Falso O
	hh
Diferencie anticorpos imunes de anticorpos naturais. 
Anticorpos Naturais: são anticorpos provenientes da microbiota normal e estão presentes naturalmente no soro, a depender do tipo sanguíneo. São da classe IgM e aglutinam a 4ºc em meio salino. Ex.: Anticorpos do sistema ABO. 
Anticorpos Imunes: anticorpos produzidos contra antígenos ausentes em nossas hemácias devido a uma aloimunização. São da classe IgG e aglutinam a 37º em meio albuminoso. 
Quais as vantagens e desvantagens dos ensaios de aglutinação?
Vantagens:
Elevada sensibilidade e Baixo custo;
Leitura visual e Facilidade de execução;
 Desvantagens:
Reprodutibilidade dos lotes de reagentes;
Acessibilidade molecular para a interação Ag-Ac;
Estabilidade da ligação do Ag-Ac no suporte.
Explique efeito pró-zona. 
O efeito prozona é um fenômeno que ocorre quando existe excesso de anticorpos no soro testado, o qual interfere na formação do complexo antígeno-anticorpo necessário para que aconteça a reação de floculação.
Difencie prova direta e prova reversa para o sistema ABO.
Prova direta – Pesquisa antígenos presentes na superfície das hemácias. Utiliza-se anticorpos comerciais. 
Prova reversa- pesquisa anticorpos presentes no soro. Utiliza-se hemácias comerciais.
Fale sobre a eritroblastose fetal. 
Eritroblastose fetal é uma doença hemolítica causada pela incompatibilidade do sistema Rh do sangue materno e fetal. Ela se manifesta, quando há incompatibilidade sanguínea referente ao Rh entre mãe e feto, ou seja, quando o fator Rh da mãe é negativo e o do feto, positivo. Quando isso acontece, durante a gestação, a mulher produz anticorpos anti-Rh para tentar destruir o agente Rh do feto, considerado “intruso”. Uma vez produzidos, esses anticorpos permanecem na circulação da mãe. Caso ela volte a engravidar de um bebê com Rh positivo, os anticorpos produzidos na gravidez anterior destroem as hemácias (glóbulos vermelhos do sangue) do feto. Para compensar essa perda, são fabricadas mais hemácias, que chegam imaturas ao sangue e recebem o nome de eritroblastos. O primeiro filho, portanto, apresenta menos risco de desenvolver a doença do que os seguintes, porque a mãe Rh- ainda não foi sensibilizada pelos anticorpos anti-Rh. No entanto, na falta de tratamento, esses anticorpos produzidos na primeira gestação podem destruir as hemácias do sangue dos próximos fetos Rh.
Analisando o comportamento de um novo ensaio diagnóstico, descreva sobre a sensibilidade clínica, especificidade clínica, VPP, VPN e a diferença entre prevalência x prevalência sorológica. 
	TESTE
	DOENÇA
	TOTAL
	
	PRESENTE
	AUSENTE
	
	+
	A 99
	B 198
	297
	-
	C 1
	D 9702
	9703
	TOTAL
	100
	9900
	10.000
Sensibilidade Clínica ou Epidemiológica (S) – é o percentual de indivíduos com teste positivo dada uma população sabidamente doente. É a relação entre os verdadeiros positivos e os doentes. É a proporção de verdadeiros positivos.
S = A/ A+C S = 99/ 99+1 S = 99/100 S = 0,99%
Especificidade	Clínica	ou	Epidemiológica	(E): é o percentual de indivíduos com teste negativo dada uma população sabidamente saudável. É a relação entre os verdadeiros negativos e os sadios. É a proporção de verdadeiros negativos.
E = D/ D+B E = 9702/ 9702+198 E = 9702/ 9900 E = 0,98%
Valor Preditivo Positivo (VPP) – é o percentual de verdadeiros positivos dentre os indivíduos com teste positivo, ou seja, dado o teste positivo qual a probabilidade do individuo ter doença?
VPP = A/ A+B VPP = 99/ 99+198 VPP = 99/ 297 VPP = 0,33 %
Valor Preditivo Negativo (VPN) – é o percentual de verdadeiros negativos dentre os indivíduos com teste negativo, ou seja, dado o teste negativo qual a probabilidade de não-doença ?
VPN = D/ D+C VPN = 9702 / 9702 +1 VPN = 9702/9703 VPN = 0,99 %
Prevalência – é o percentual de indivíduos doentes em uma dada população.
P = A+C / N P = 100/ 10000 P = 0,01%
Prevalência Sorológica – é o percentual de indivíduos com teste positivo em uma dada população.
PS = A+B / N PS = 297/10000 PS = 0,029%
O gráfico a seguir demonstra o limiar de reatividade (“cut-off”) para o diagnóstico de hepatite B. Sabendo-se que este teste é um exame de rotina no laboratório de triagem sorológica, Drª. Joana decidiu alterar o “cut-off” deste ensaio para 1:256. Dr. João argumentou que esta atitude de Drª. Joana estaria equivocada, devendo a mesma ter alterado o “cut-off” para 1:16. Você concorda com a postura de Dr. João ? Por quê ? O que acontecerá com esta decisão de Drª. Joana em termos de S, FP, E e FN para este teste ?
Concordo com a postura de Dr. João, pois se diminue o cut-off prezamos pela sensibilidade do teste. Diminuindo o cut-off: aumenta a sensibilidade e o falso positivo, e diminuem a especificidade e o falso negativo.
A conduta de Dra. Joana levaria o inverso desses parâmetros. 
Obs.: Este exercício é apenas uma forma de fixação de conceitos. Não devemos nos limitar a ele para entendimento e aprofundamento desses assuntos.