LOGBOOK IMUNOCLÍNICA CHAGASS

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	BIOMEDICINA
MARIA VITÓRIA MINZONI DE SOUZA IACIA
DIAGNÓSTICO IMUNOLOGICO DOENÇA DE CHAGAS 
Presidente Prudente - SP
2019
A tripanossomíase americana ou doença de Chagas (DC) é uma zoonose do continente americano com forte incidência no Brasil. Essa doença é causada pelo hemo-protozoário Trypanosoma cruzi, ele é transmitido no ato da alimentação do vetor (insetos da subfamília Triatominiae). A DC também pode ser transmitida por transfusão de sangue ou na gravidez, da mãe infectada ao feto e por alimentos contaminados com os vetores triturados ou os seus dejetos. O diagnóstico da Doença de Chagas irá depender da fase em que a doença se encontra, durante a fase aguda da doença de Chagas, os tripomastigotas sanguíneos podem ser detectados apenas através de métodos parasitológicos diretos, onde os parasitas são identificados diretamente no exame de sangue do paciente, também podem ser empregados métodos parasitológicos indiretos, como xenodiagnóstico e hemocultura. Os testes sorológicos são utilizados com frequência no diagnóstico da fase crônica e têm como base a detecção de imunoglobulinas específicas contra o T. cruzi.
Para detecção de anticorpos anti-T. cruzi da classe IgG podem ser utilizados os métodos de Ensaio Imunoenzimático – ELISA, Imunofluorescência Indireta – IFI ou Hemaglutinação Indireta – HAI.
A técnica de ELISA consiste em detectar anticorpos contra o parasita a partir de um outro anticorpo ( anti-imunoglobilina humana) conjugados a enzimas, que na presença de substratos específicos, geram produtos coloridos, cuja a quantificação é feita por espectrofotometria. Este método oferece alta sensibilidade, utilização de baixas quantidades de soro, processamento simultâneo de várias amostras.
Na Imunofluorescência indireta – IFI – o antígeno é preparado com formas epimastigotas de T.cruzi e fixadas em placa que irão reagir com os anticorpos do soro do paciente, estes então, são revelados com o uso de anticorpos anti-imunoglobulina humana conjugados com fluoresceína e observados ao microscópio de fluorescência. O uso deste método se deve principalmente por suas vantagens: relativa facilidade de se obterem reações padronizadas, alta sensibilidade, regularidade dos resultados e a possibilidade de processamento simultâneo de um grande número de amostras.
O teste de HAI tem como princípio a hemaglutinação indireta, onde hemácias de carneiro, recobertas com antígenos citoplasmáticos de T. cruzi em presença de soro que contenha anticorpos para este parasita, formarão ligações entre as hemácias, interagindo com os antígenos na sua superfície. Assim, visualmente ocorrerá a formação de um manto nas placas de microtitulação. Em virtude do baixo custo, nitidez dos resultados e simplicidade de execução tem sido amplamente utilizada em situações de rotina.
AMOSTRAS UTILIZADAS EM AULA 
Amostra 2- nº 11649227-5 3- nº 1164411-5
ELISA – O teste conta com um branco (B) para calibração, três controles negativos (CN) e dois controles positivos (CP). Foram feitos testes em 10 amostras (A1 - A10).
Pós conjugado
Resultados:
Validade do kit: 2 de 3 controles negstivos ≤0,150 (OK).
Media controle positivo > 0,600 = 2,657 (OK)
CUT OFF: 0,004 + 0,300 = 0,304
GREY ZONE: 0,274 – 0,334
*Amostra 2: negativa
*Amostra 3: positiva
 
IMUNOFLUORESCENCIA INDIRETA – O teste conta com um controle positivo (CP), um controle negativo (CN) e amostras que nesse caso vão de A1- A6
 
Resultados:CP
CN
A2
A3
*A partir da fluorescência da amostra comparada aos padrões do kit, podemos dizer que a amostra 2 possui resultado negativo, enquanto a amostra 3 possui resultado positivo.
IMUNO-HAI CHAGAS – o teste conta com apenas um controle negativo (CN) e um controle positivo (CP), foram utilizadas 10 amostras (A1 – A10).
Resultados:
*Considera-se a reação negativa quando as hemácias se depositam no fundo da cavidade formando um botão, e positiva quando o as hemácias se depositam no fundo da cavidade como um tapete. Com esse conceito, podemos considerar a amostra 2 negativa e a amostra 3 inconclusiva, pois o botão formado não segue o padrão apresentado no teste. 
CONCLUSÃO: 
Todos os testes apresentados realizam o diagnostico a partir da detecção especifica de IgG, sendo assim, capazes de detectar somente a fase crônica da doença. O paciente correspondente a amostra 2 possui seus resultados negativos em todos os testes, indicando que este não possui a forma crônica da doença, porem se este teve contato recente com o parasita e se encontra na fase aguda da doença, o diagnóstico é impossível por esses métodos. O paciente numero 3 obteve resultados positivos em dois dos testes, sendo que um foi inconclusivo, caracterizando a presença da forma crônica da doença. Lembrando 	que é essencialmente necessário que o diagnostico sorológico deve ser realizado utilizando-se dois testes de princípios metodológicos diferentes. 
BIBLIOGRAFIA 
SILVA, Adeline Gisele da. Imunologia Aplicada - Fundamentos, Técnicas Laboratoriais e Diagnósticos. 1. Ed. São Paulo. 2014 [Minha Biblioteca].
ALVES, Daniela. MUNIZ, A. Sávio. ABREL, Clara. Métodos de diagnóstico para a doença de Chagas: uma atualização. Ver. Bras. Análises Clinicas. Fortaleza, nov, 2018.