Coloração De Gran

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Coloração de Gram
Deborah Fonseca Rosa
Sandy Lorrayne Rodrigues Cardoso Marques
Victor Caixeta
Introdução
O método tintorial predominante utilizado em bacteriologia é o método de Gram. Essa técnica é simples, rápida e tem capacidade de resolução, permitindo o correto diagnóstico em cerca de 80% dos pacientes em caráter de pronto atendimento em nível local. Os custos com investimento e manutenção são consideravelmente baixos diante da eficácia alcançada com os resultados imediatos dos testes. Essa técnica requer instalação simples, necessitando apenas de uma sala pequena com disponibilidade de água e gás, onde deverá ser instalada um balcão com pia e um bico de Busen, eventualmente substituído por uma lamparina ou espiriteira. São ainda necessários: microscópio com objetiva de imersão e bateria para coloração de Gram. Os corantes devem ser preparados pelo próprio laboratório ou por um laboratório habitado que assegure a qualidade do produto. Finalmente, e mais importante, são necessários técnicas de laboratório treinados, responsáveis e conscientes do valor do seu trabalho. A coloração de Gram recebeu este nome em homenagem a seu descobridor, o médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram. Em 1984, Gram observou que as bactérias adquiriam cores diferentes, quando tratadas com diferentes corantes. Isso permitiu classifica-las em dois grupos distintos: as que ficavam roxas, foram chamadas de Gram-positivas, e as que ficavam de vermelhas, chamadas de Gram-negativas. 
Objetivo:
Desenvolver habilidades para executar as técnicas de preparação de esfregaços e para o método de coloração de Gram, sabendo diferenciar e classificar as bactérias de acordo com a coloração obtida e relacionando-as à composição química da parede celular da mesma. Desenvolver a habilidade, também, para utilizar o microscópio óptico, observando as bactérias após a coloração de Gram.
Materiais e Método:
Materiais 
Violeta de metila 
Lâmina 
Lugol
Álcool Etílico
Fucsina 
Método
Cubra o esfregaço com violeta-de-metila e deixe por aproximadamente 30 segundos;
Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; cubra a lâmina com lugol diluído e deixe agir por aproximadamente 1 minuto;
Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente;
Adicione álcool etílico sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais corante;
Lave em um filete de água corrente;
Cubra a lâmina com fucsina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos;
Lave em filete de água corrente;
Deixe secar ao ar livre
Resultados e discussão 
Concluímos que foram vistas no laboratório tanto Gram-positiva (coloração roxa) quanto Gram-negativa (coloração vermelha), e em relação a suas formas foram encontrados cocos e bastonetes. Durante o procedimento experimental efetuaremos vários processos para que nos fosse facilitada à visão das bactérias, tais como: Fazer o esfregaço, que teve como objetivo separar as bactérias para que estas fossem bem visíveis. Fixar o material à lâmina através da chama, para que as células morressem e ficassem fixas (sem movimento) para permitir um melhor visionamento das mesmas. Passou-se o lugol por toda por toda a lâmina, para que as estruturas celulares aumentassem as suas afinidades tintureiras. O ácido diluído em álcool aplicados descorou todas as bactérias exceto as ácido-álcool resistentes, que permanecem coradas de vermelho pela fucsina. Assim, ao serem observadas após coloração e contraste, com azul de metileno, encontramos as bactérias:
Ácido-álcool resistentes: coradas de vermelho.
Não ácido-álcool resistentes: coradas de azul.
Concluímos também que se a objetiva de imersão não estiver devidamente limpa a observação vai dificultar ou mesmo não possível de efetuar.
Referência:
LIBERTO, M. I. M.; CABRAL, M. C.; LINS, U. G. C. (2006). Microbiologia. V.1. 2. ed. Rio de Janeiro: Fundação Cecierj, 2006. 62,63,64,65 pp
Kasvi, Coloração de Gram – O que é bactéria Gram-positiva e Gram-negativa?, 2018, Brasil, Disponível em:<https://kasvi.com.br/bacteria-gram-positiva-gram-negativa/> Acessado em: 28 set. 2018