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Genética AULA 27 DOGMA CENTRAL DA BIOLOGIA MOLECULAR E REPLICAÇÃO DO DNA EM PROCARIOTOS 1 Sumário Introdução .................................................................................................................................... 2 Objetivo......................................................................................................................................... 2 1. O Fluxo da Informação ....................................................................................................... 2 1.1. Dogma Central da Biologia .......................................................................................... 2 1.2. Replicação de DNA em procariotos ............................................................................. 5 Exercícios ...................................................................................................................................... 8 Gabarito ........................................................................................................................................ 9 Resumo ......................................................................................................................................... 9 2 Introdução A Genética estuda os mecanismos da hereditariedade ou herança biológica. Para entendermos a genética, precisamos ter em mente alguns conceitos básicos sobre biologia molecular e entender o que é o Dogma central da biologia, um termo tão falado no mundo biológico. Mesmo com tantas diferenças existentes entre os organismos vivos, algumas características são muito conservadas e uma delas é o fluxo da informação genética. Todo organismo vivo possui informação genética armazenada quimicamente sob a forma de genes, que codificam proteínas, as quais são a base constitucional de cada ser. Para que esses processos se realizem, é necessário um aparato enzimático. Para tal, nessa apostila iremos estudar a descrição do fluxo de informações da biologia molecular e veremos uma introdução ao mecanismo de replicação do DNA em seres procariontes. Objetivo • Compreender o dogma c entral da biologia molecular • Entender como se dá o fluxo de informações da biologia molecular • Estudar a replicação do DNA em procariotos 1. O Fluxo da Informação 1.1. Dogma Central da Biologia Como estudamos nas apostilas anteriores, existem outros mecanismos de transferência genética, de mãe para filho, que não envolvem a contribuição dos genes paternos, a chamada herança materna. Nesta apostila, começaremos a estudar uma área básica da genética, que é como se dá o fluxo da informação e os mecanismos de replicação em procariotos. O princípio mais fundamental da Genética, e talvez de toda a Biologia, é de que o fluxo de informações genéticas nas células ocorre de DNA para RNA, e de RNA para proteína, e nunca o contrário. Todas as células, desde as bactérias até os seres humanos, expressam sua informação genética dessa maneira. Esse princípio é conhecido como o Dogma Central da Biologia Molecular e foi proposto por Francis Crick em 1970. Crick foi o cientista que descobriu a estrutura do DNA com James Watson. 3 IMPORTANTE O DNA genômico não direciona a síntese proteica diretamente, mas utiliza o RNA como uma molécula intermediária. Quando a célula necessita de uma proteína específica, a sequência de nucleotídeos da região apropriada de uma molécula de DNA do cromossomo é inicialmente copiada sob a forma de RNA (por meio de um processo denominado transcrição). São essas cópias de RNA de segmentos de DNA (genes) que são usadas diretamente como moldes para direcionar a síntese da proteína (tradução). Apesar da universalidade desse dogma central, existem variações importantes originadas por novas descobertas. A principal é de que os transcritos de RNA eucarioto são submetidos a um processamento antes que saiam do núcleo, o que pode mudar a informação final. Hoje também se conhece a transcrição reversa, pela qual, algumas enzimas utilizam moléculas de RNA para produzir DNA. Observe a seguir um esquema que representa essas mudanças: Esquema atual do Dogma Central da Biologia Molecular demonstrando o fluxo da informação genética O Dogma Central estabelece que uma vez que a informação tenha sido passada para a proteína, não há mais retorno. A transferência de informação do ácido nucléico para ácido nucléico, ou de ácido nucléico para proteína, seria possível, mas a transferência de informação de proteína para proteína, ou de proteína para ácido nucléico, seria impossível. 4 O esquema indica os processos que envolvem os ácidos nucleicos durante a transmissão da informação genética. Todas as informações estão contidas sob a forma de gene na molécula de DNA, que pode se duplicar, e que é transcrito em um molde de RNA. A partir do RNA serão transcritos os aminoácidos formadores de proteína, que é o produto gênico final. Em alguns organismos, como os retrovírus, ocorre um fenômeno chamado de transcrição reversa. Esse mecanismo consiste na transcrição de uma molécula de RNA para uma molécula de DNA por meio de uma enzima chamada transcriptase reversa. O RNA também é capaz de replicar ou duplicar pela ação de uma enzima denominada RNA replicase. ANOTE CONCEITOS BÁSICOS: • Transcrito – sequencia de RNA correspondente à cadeia- molde do DNA; que passou pelo processo de Transcrição. • Transcrição - é o processo de formação do RNA a partir da cadeia-molde de DNA. • Código Genético - é a relação entre a sequência de bases no DNA e a sequência correspondente de aminoácidos, na proteína. • Tradução - é o processo no qual a sequência de uma molécula de RNAm é utilizada para ordenar a síntese de uma cadeia nucleotídica, cuja sequência de aminoácidos determina uma proteína. • Códons - é uma sequência de três bases nitrogenadas de RNA mensageiro que codificam um determinado aminoácido ou que indicam o ponto de início ou fim de tradução da cadeia de RNAm. • Replicação - é o processo de duplicação de uma molécula de DNA de dupla cadeia (hélice). • Transcrição Reversa - é o processo de formação de um DNA a partir de um RNA. 5 Após compreender como o Dogma Central da Biologia explica o fluxo da informação genética, você está pronto para seguir para o próximo tópico no qual abordaremos como é a replicação de DNA em seres procariotos. Não perca tempo! 1.2. Replicação de DNA em procariotos Todos os organismos vivos se perpetuam através da replicação. A reprodução pode ser uma simples duplicação (fissão celular), como em bactérias, ou envolver mecanismos complexos de reprodução, como acontece em seres eucariotos. Nessa apostila iremos abordar como é o mecanismo de replicação de DNA nos seres mais primitivos, os procariotos. Os procariotos se reproduzem por fissão binária, uma forma de reprodução assexuada. Essa também é a forma de reprodução adotada por algumas organelas celulares dos eucariotos (como por exemplo, as mitocôndrias, e cloroplastos). Este processo de divisão celular resulta na produção de duas células procarióticas onde cada uma delas tem o mesmo material genético da célula-mãe (figura abaixo). Ou seja, a reprodução de procariotosenvolve a transmissão fiel da informação genética armazenada no DNA. FIQUE ATENTO! Procariotos - Estes seres não possuem nenhum tipo de compartimento interno por membranas, estando ausentes o envoltório nuclear e as organelas membranosas, como as mitocôndrias, o Complexo de Golgi e o fuso mitótico. Eucariotos- São seres uni ou pluricelulares que possuem membrana nuclear, ou seja, o seu núcleo celular é separado do citoplasma, além de possuírem organelas membranosas. 6 Modelo esquemático de fissão celular em Procariotos enfatizando a replicação do seu DNA. O processo de fissão celular das bactérias envolve: a replicação da molécula de DNA que está organizada em um cromossomo circular no interior da célula; o movimento de cada DNA replicado para um dos polos da célula; o aumento do tamanho celular; e a contração da placa equatorial da célula, que separará a membrana plasmática de modo que cada nova célula tenha exatamente o mesmo material genético (figura abaixo). Nos procariotos este processo é rápido e leva cerca de 20 minutos à temperatura ambiente, ou seja, uma única célula pode produzir milhões de descendentes, em apenas poucas horas. Nos procariotos, a produção de moléculas de mRNA é muito mais simples. A extremidade 5’ de uma molécula de mRNA é produzida por meio da iniciação da transcrição, e a extremidade 3’ é produzida pela terminação da transcrição. Como as células procarióticas não possuem núcleo, a transcrição e a tradução ocorrem em um compartimento comum. A tradução de um mRNA bacteriano frequentemente inicia antes de sua síntese ter sido completada. Em termos de origem de replicação de DNA, as bactérias normalmente possuem uma origem de replicação única (chamada de OriC) enquanto organismos eucarióticos possuem várias origens de replicação. Esse tipo de replicação de procariotos é bidirecional e essa única origem possui duas forquilhas de replicação que se movem em sentidos opostos ao redor do cromossomo circular. Assim como nos eucariotos, as bactérias também possuem uma gama de enzimas envolvidas em seu processo de replicação. As principais enzimas são: DNA- polimerase (ou DNA-pol), helicases, proteínas single stranded binding ou SSB, ligases, topoisomerases e primase. A mais conhecida, DNA-polimerase, é responsável por montar fitas de DNA. Ela age adicionando nucleotídeos na extremidade 3’ da fita que está sendo sintetizada. Em procariotos, existem 3 tipos de polimerase: 7 • DNA-pol I: atua na clivagem de nucleotídeos a partir do final da cadeia. É uma exonuclease. • DNA-pol II: seu papel ainda é desconhecido. • DNA-pol III: é a principal responsável pela síntese das fitas de DNA devido a sua alta capacidade de polimerização As enzimas helicases têm função de quebrar as pontes de hidrogênio entre as bases nitrogenadas. Ou seja, é ela quem separa a dupla fita e inicia a forquilha de replicação. As SSB se ligam à fita simples de DNA para que ela se mantenha íntegra, sem dobras, durante a replicação. A primase sintetiza os primers, que são pequenas moléculas de RNA ao qual a DNA-polimerase se liga pra iniciar a replicação. Para elucidar de uma maneira mais didática, iremos organizar os passos da replicação procariótica em ordem: 1) Dupla hélice do DNA começa a se desenrolar na origem de replicação, separando as fitas de nucleotídeos com a ajuda das helicases, cada fita separada irá servir de molde para a síntese de novas fitas de DNA; 2) Ocorre a deselicoidização da dupla hélice com a ajuda das SSB segurando as fitas separadas, e assim se forma uma bolha de replicação; 3) Na bolha de replicação, as primases colocam os iniciadores para que as DNAs polimerases consigam proceder com a replicação; 4) A polimerização continua ao redor de todo o círculo para produzir duas moléculas completas de DNA circulante; 5) São produzidas duas moléculas circulares de DNA idênticas. Observe abaixo um esquema geral da replicação, com atuação de algumas enzimas: Replicação de molécula de DNA. 8 Exercícios 1. (F.M.SANTA CASA-SP) Considere os seguintes eventos para a replicação de um organismo procarioto: I. ruptura das ligações entre bases nitrogenadas. II. ligação entre os nucleotídeos. III. pareamento de nucleotídeos. Durante a replicação do DNA, a sequência de eventos é: a) I, II, III. b) I, III, II. c) II, III, I. d) II, I, III. e) III, I, II. 2. (Enem 2005) Todas as reações químicas de um ser vivo seguem um programa operado por uma central de informações. A meta desse programa é a autorreplicação de todos os componentes do sistema, incluindo-se a duplicação do próprio programa ou mais precisamente do material no qual o programa está inscrito. Cada reprodução pode estar associada a pequenas modificações do programa. M. O. Murphy e l. O'neill (Orgs.). O que é vida? 50 anos depois - especulações sobre o futuro da biologia. São Paulo: UNESP. 1997 (com adaptações). São indispensáveis à execução do "programa" mencionado acima processos relacionados a metabolismo, auto-replicação e mutação, que podem ser exemplificados, respectivamente, por: a) fotossíntese, respiração e alterações na sequência de bases nitrogenadas do código genético. b) duplicação do RNA, pareamento de bases nitrogenadas e digestão de constituintes dos alimentos. c) excreção de compostos nitrogenados, respiração celular e digestão de constituintes dos alimentos. d) respiração celular, duplicação do DNA e alterações na sequência de bases nitrogenadas do código genético. e) fotossíntese, duplicação do DNA e excreção de compostos nitrogenados. 9 3. (Griffths - adapatada, 2006) Há diferenças e semelhanças entre os mecanismos genéticos de procariotos e eucariotos. Com base em seus conhecimentos, você acha que os genomas de bactérias podem apresentar recombinação? Em caso afirmativo, como você faria para identificá-los? Gabarito 1. Letra B I, III, II. Para que ocorra a replicação do DNA, inicialmente ocorre a separação das fitas em razão do rompimento das pontes de hidrogênio. Nucleotídeos livres iniciam então o emparelhamento e finalmente ocorre a união entre eles. 2. Letra D. A respiração celular fornece energia para o metabolismo. A duplicação do DNA garante a transmissão das características hereditárias ao longo das gerações. As alterações nas sequências de bases nitrogenadas dos genes promovem a variabilidade, fator indispensável à evolução das espécies. 3. Sim. Os recombinantes são relativamente raros, mas podem ser demonstrados usando procedimentos de seleção. Resumo Os avanços na genética microbiana das últimas décadas deram as bases para a fundação dos recentes avanços na biologia molecular. O entendimento do fluxo de informações genéticas é um dos grandes desafios na biologia. O Dogma Central da Biologia é o modelo que explica como ocorre o fluxo de informações genéticas. Esse modelo mostra principalmente que uma sequência de um ácido nucleico pode formar uma proteína, entretanto o contrário não é possível. Segundo esse dogma, o fluxo da informação genética segue o seguinte sentido: DNA → RNA→ PROTEÍNAS. Novas descobertas alteraram o Dogma Central proposto originalmente, pois hoje sabemos que uma molécula de RNA pode produzir uma molécula de DNA e o RNA também pode ser replicado em alguns vírus. Todos os organismos vivos se perpetuam através da replicação. Mesmo apresentando um genoma mais simples, os procariotos também possuem todo um maquinário enzimático para realizar seus processosgenéticos. Os procariotos se reproduzem principalmente por fissão binária, e este processo de divisão celular resulta na produção de duas células procarióticas em que cada uma delas tem o 10 mesmo material genético da célula-mãe. No processo de replicação do DNA circular de procariotos, várias enzimas estão envolvidas, como a DNA-polimerase, helicases, proteínas SSB (Single stranded binding), ligases, topoisomerases e primases. 11 Referências bibliográficas Alberts, Bruce. (et al.),Biologia Molecular da célula. 5ª ed. Porto Alegre: Artmed. 2010. GRIFFITHS, Anthony. Introdução à Genética. 8. ed. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan, 2006. CRICK, F. H.C. On Protein Synthesis. Symp. Soc. Exp. Biol. XII: 138-163. Quoted in: Judson, H. F. The Eight Day of Creation. Expanded Edition (1979, 1996) 1958. Griffiths, J.F. A.; et al. (2002). Genética. [S.l.]: McGraw-Hill. ISBN 84-486-0368-0 Net nature: - Acessado em: 30/01/2019 às 13h30 Portal da educação: - Acessado em: 30/01/2019 às 14h30
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