2 aula Citopatologia (1)

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Citopatologia
Prof. Kamila Cerbaro Cezario
Biomédica/Citopatologista
Procedimentos técnicos e laboratoriais
• Não estar menstruada; 
• Não realizar duchas vaginais e não usar drogas intravaginais (creme, óvulo) 
nas 48 horas que antecedem o exame;
• Abstinência sexual nas 48 horas que antecedem o exame.
Contaminação por cremes vaginais.
Contaminação por sangue.
ANTES DA COLHEITA DO 
MATERIAL, DEVE SER 
PREENCHIDO DADOS 
FUNDAMENTAIS!
Dados fundamentais:
• Dados pessoais: nome completo, idade, endereço, telefone, NOME DA 
MÃE. 
• Dados do médico que solicitou o exame: nome completo e telefone. 
• Dados clínicos da paciente: 
- Data da última menstruação 
- Paridade 
- Queixas clínicas, especialmente sangramento vaginal anormal 
- Uso de contraceptivos 
- Referência a terapia de reposição hormonal 
- Data do último exame preventivo 
- Resultados de exames citopatológicos e histopatológicos do colo/vagina prévios 
- Procedimentos terapêuticos anteriores (cauterização, cirurgia, quimio e/ou radioterapia) 
Dados fundamentais:
• Dados macroscópicos da vagina/colo e colposcópicos se forem 
disponíveis. 
Dados fundamentais:
O que é colposcopia?
Colposcopia é um exame que permite visualizar
a vagina e o colo do útero através de um
aparelho chamado COLPOSCÓPIO. Este
aparelho permite o aumento de 10 a 40 vezes do
tamanho normal.
Colo normal em colposcopia
Colo normal com metaplasia
Colo com cervicite crônica 
(colo com “aspecto de morango”)
Colo com carcinoma
Colheita da amostra
• Antes da colheita, devem ser disponibilizadas lâminas de vidro identificadas 
com as iniciais e/ ou número de registro da paciente
Colheita da amostra
Espéculo
Escova
Espátula de Ayre
+
FIXADOR 
Colheita tríplice
• VAGINA
• ECTOCÉRVICE
• ENDOCÉRVICE
• Apesar das vantagens atribuídas à colheita tríplice, o Instituto Nacional do Câncer 
(Inca) recomenda apenas a colheita dupla (ectocérvice e endocérvice), uma vez que 
o objetivo do exame é o rastreio das lesões pré-cancerosas do COLO DO ÚTERO. 
• Obs.: Em mulheres histerectomizadas (remoção do útero), a colheita das amostras é 
realizada através do raspado da cúpula e das paredes vaginais. 
Artefatos:
A e B  Contaminação por
talco (luvas)
C  Fundo hemorrágico
D  Esmagamento de
células
Fixação dos esfregaços citológicos
• A fixação do esfregaço deve ser procedida imediatamente após a coleta, 
sem nenhuma espera. 
• Visa conservar o material colhido, mantendo as características originais das 
células, preservando-as do dessecamento que impossibilitará a leitura do 
exame.
• 3 formas de fixação:
- Álcool a 95%  A lâmina com material deve ser submersa no álcool a 95%, em
tubete de boca larga, lá permanecendo até a chegada ao laboratório;
- Propinilglicol  Borrifar a lâmina com fixador, spray ou aerosol, a uma distância de
até 20cm. Cobrir totalmente o esfregaço;
- Polietilenoglicol  Pingar 3 ou 4 gotas da solução fixadora sobre o material, que
deverá ser completamente coberto pelo líquido. Deixar secar ao ar livre, em posição
horizontal, até a formação de uma película leitosa e opaca na sua superfície;
Fixação dos esfregaços citológicos
Consequências da má fixação do material
A demora na fixação pode levar a alterações celulares importantes, dificultando 
ou mesmo impossibilitando a avaliação oncológica. Os seguintes efeitos podem 
ser encontrados nas amostras dessecadas (exposição prolongada no ar):
• Aspecto opacificado, turvo, dando a impressão de que a amostra está fora do 
campo de visão. 
• Aumento da eosinofilia citoplasmática. 
• Aumento nuclear (de quatro a seis vezes maior ao verificado nas amostras 
fixadas imediatamente) e perda dos detalhes da estrutura cromatínica.
A, B  Fixação inadequada das amostras, 
100x E 400x.
C, D  Fungo contaminante 
(Aspergillus). Esfregaços cervicovaginais, 
Papanicolaou, 100x e 400x. 
CONTAMINANTES
ENTEROBIUS VERMICULARIS
ESPERMATOZÓIDES
CONTAMINAÇÃO
CELULAR
CRUZADA
CREME VAGINAL
Prof. Kamila C. Cezario
“CORN FLAKES”
Artefatos de montagem de lâmina-lamínula
Coloração de Papanicolaou
• O método de coloração foi elaborado pelo próprio Papanicolaou, com várias 
modificações ao decorrer dos anos. 
• Consiste na aplicação de um corante nuclear, a hematoxilina, e dois corantes 
citoplasmáticos, o Orange G6 e o EA (eosina, verde-luz ou verde-brilhante e pardo 
de Bismarck). A hematoxilina cora o núcleo em azul. O verde-brilhante cora o 
citoplasma em verde-azul das células escamosas parabasais e intermediárias, células 
colunares e histiócitos. A eosina cora em rosa o citoplasma das células superficiais, 
nucléolos, mucina endocervical e cílios. O Orange G6 cora as hemácias e as células 
queratinizadas em laranja-brilhante. Após a coloração do esfregaço segue-se a etapa 
conhecida como clareamento, que promove a transparência celular. O xilol, um 
solvente orgânico, é utilizado para esse fim. 
• Para a padronização da coloração é necessário checar diariamente os 
esfregaços sob o microscópio, fazendo as correções, se necessárias. Assim, é 
ajustado o tempo que os esfregaços devem permanecer em cada corante. 
• Nunca deve ser esquecida a manutenção da bateria de coloração, filtrando 
diariamente (hematoxilina cristaliza com baixas temperaturas) e trocando os 
corantes e soluções (álcool, xilol) quando necessário, para atingir um padrão 
ideal de coloração dos esfregaços.
Efeito do EA sobre o citoplasma das células.
Efeito do Orange G6 sobre as células. Célula maligna queratinizada.
Excesso de Hematoxilina.
Clareamento dos esfregaços
• O xilol, um solvente, tem a finalidade de tornar as células translúcidas,
participando no processo do seu clareamento, ou diafanização.
CUIDADO  Xilol é cancerígeno e somente deve ser manuseado com capela 
de segurança.
Montagem das lâminas
• É o processo em que é aplicada uma resina sintética dissolvida em um solvente,
geralmente o xilol, permitindo a adesão entre a lamínula e a lâmina. A ligação entre as
duas protege o esfregaço da dessecação e diminui as chances de descoloração ao
decorrer do tempo.
• Os meios de montagem mais utilizados no nosso meio são o bálsamo do Canadá e o
Entellan (Merck).
É fundamental que o procedimento de montagem seja rápido, imediatamente após a 
remoção do esfregaço do xilol, impedindo a penetração de ar entre a lâmina e a lamínula. 
Quando isso ocorre, poderão surgir artefatos, como a presença de pigmento acastanhado 
recobrindo a amostra (artefato corn flakes) ou a formação de bolhas.
Procedimento de montagem. Uma
lamínula (24x50) é fixada à lâmina por
meio de uma resina sintética. A
lamínula deve cobrir todo o esfregaço,
para a sua “leitura” completa,
minimizando os riscos de
diagnósticos falso-negativos.
https://www.youtube.com/watch?v=K0Gs_oSJEz0
Avaliação da lâmina
• Antes da “leitura”, utiliza-se a objetiva de 4x para verificar a qualidade da 
fixação e coloração do espécime, o fundo (área ocupada entre as células), 
assim como a celularidade (quantidade de células), a composição celular 
(tipos de células) e a sua distribuição.
• Satisfatória  A amostra que apresenta células em quantidade representativa (estimativa
mínima de aproximadamente 8.000-12.000 células escamosas) bem distribuídas, fixadas e
coradas, de tal modo que a sua visualização permita uma conclusão diagnóstica.
• Satisfatória, mas limitada para a avaliação  Falta de informações clínicas. Esfregaço
obscurecido entre 50% a 75% de sua totalidade por vários fatores, entre eles: esfregaço
acentuadamente hemorrágico devido ao trauma na colheita da amostra, esfregaço espesso
com acentuada sobreposiçãocelular por falha na distribuição do material na lâmina,
esmagamento das células por compressão excessiva durante a confecção do esfregaço,
dessecação celular devido à demora na fixação ou utilização de fixador com menor teor
alcoólico, falhas na técnica de coloração. Outras causas de exames citológicos satisfatórios,
mas limitados para a avaliação incluem a escassez de células epiteliais no esfregaço ou a
sobreposição acentuada das células epiteliais por exsudato leucocitário. A escassez celular
pode decorrer da atrofia do epitélio, comum na menopausa. O acentuado exsudato
purulento (leucocitário) é determinado por condições inflamatórias.
• Insatisfatória  Esfregaço acelular ou obscurecido em mais de 75% da sua totalidade
pelos mesmos fatores discutidos acima. Quando um exame citológico é categorizado como
satisfatório, mas limitado ou insatisfatório para a avaliação, deve ser repetido o mais breve
possível, uma vez que o estudo oncológico foi comprometido ou não foi possível,
respectivamente.
A, B - Exsudato purulento intenso.
C - Esfregaço espesso. 
D - Esfregaço dessecado.
IMPORTANTE!!!!!!
É importante observar que a ausência dos componentes da zona de 
transformação (células glandulares endocervicais e/ou metaplásicas 
escamosas) não interfere na classificação do esfregaço quanto a sua 
adequacidade. Contudo, deve ser registrada como uma observação à parte, 
para que o ginecologista interprete esse dado no contexto clínico da paciente. 
A avaliação inicial com a objetiva de 4x é seguida pela utilização da objetiva de 
10x, realizando-se a leitura sistemática de todos os campos microscópicos. A 
objetiva de 40x é usada quando é necessário um maior detalhamento das 
estruturas celulares. 
Citologia em meio líquido
• Segundo dados do INCA, em 2011 o percentual de amostras insatisfatórias 
para o teste de papanicolaou foi de 6,47% (o desejado é menos de 5,0%), 
sendo os principais motivos “artefatos de dessecamento” e “material acelular 
ou hipoceluar” com percentuais de 48,55% e 15,23%, respectivamente.
• Com a citologia em meio líquido esses fatores são anulados.
Citologia em meio líquido
Citologia em meio líquido