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06/08/2019 1 Histologia Prof.: Rui Marques Histologia e Seus Métodos De Estudos Prof.: Rui Marques Métodos de Estudo •Cada um dos tecidos fundamentais do corpo é formado por vários tipos de células características daquele tecido. •E por associações e arranjos característicos entre células a matriz extracelular. Métodos de Estudo •Cada um dos tecidos fundamentais é formado por vários tipos de células características daquele tecido e por associações e arranjos característicos entre células a matriz extracelular. Métodos de Estudo •Estas associações são, geralmente, muito peculiares e facilitam o reconhecimento dos muitos subtipos de tecidos pelos estudantes. Métodos de Estudo • Estas associações são, geralmente, muito peculiares e facilitam o reconhecimento dos muitos subtipos de tecidos pelos estudantes. 06/08/2019 2 Métodos de Estudo Métodos de Estudo Métodos de Estudo Métodos de Estudo Métodos de Estudo Métodos de Estudo 06/08/2019 3 Métodos de Estudo Métodos de Estudo Métodos de Estudo Métodos de Estudo Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •O pequeno tamanho das células e dos componentes da matriz torna a histologia dependente do uso de microscópios. Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •O pequeno tamanho das células e dos componentes da matriz torna a histologia dependente do uso de microscópios. 06/08/2019 4 Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •O conhecimento das ferramentas e dos métodos de investigação é essencial para uma compreensão adequada da estrutura e funcionamento das células, tecidos e órgãos. Métodos de Estudo Preparação de tecidos para exame microscópico O procedimento mais usado no estudo de tecidos ao microscópio consiste na preparação de cortes histológicos. Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Na maioria dos casos os tecidos e órgãos são muito espessos para serem vistos ao microscópio. •Por tanto antes de serem analisados ao microscópio ele deve ser fatiados e secções muito finas, que são colocadas sobre uma lâminas de vidro. Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Fixação •Desidratação e diafanização •Inclusão •Microtomia •Coloração 06/08/2019 5 Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Fixação •Logo após sua remoção do corpo os fragmentos de tecidos e órgãos devem ser submetidos a um processo chamado fixação. •A fixação tem por finalidades: •Evitar a digestão dos tecidos por enzimas presentes nas próprias células (autólise) ou em bactérias. •Endurecer e preservar os tecidos. •Solução fixadora – Formaldeído. Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Fixação Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Desidratação e diafanização •Após a fixado da amostra, procede-se a sua desidratação através de banhos de álcool em concentrações crescentes, de etanol 70% a etanol 100%. •Após a desidratação, realiza-se a sua diafanização ou clareamento com a finalidade de tornar os tecidos transparentes. Utiliza-se o xilol nesta etapa do preparo histológico. Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Desidratação e diafanização Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico • Inclusão •Após a diafanização, a amostra é colocada em parafina a fim de torná-la rígida e, dessa forma, permitir o corte em lâminas finas no micrótomo. •Ao ser imersa em parafina o tecido e colocado em uma estufa a 58-60°C, o calor promove a evaporação do xilol e a ocupação dos espaços teciduais por parafina. •O tecido embebido por parafina se torna rígido após ser retirado da estufa. Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico • Inclusão 06/08/2019 6 Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Microtomia •Na penúltima etapa, os blocos de tecido são levados ao micrótomo para serem cortados em cortes finos de 1 a 10µm. Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Os cortes são obtidos por meio de instrumentos de grande precisão chamados micrótomo. Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Os cortes são obtidos por meio de instrumentos de grande precisão chamados micrótomo. Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Os cortes são obtidos por meio de instrumentos de grande precisão chamados micrótomo. Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Coloração •Para serem estudados no microscópio, a maioria dos cortes histológicos deve ser corada, porque, com poucas exceções, os tecidos são incolores. •Dentre todos os corantes, a combinação de Hematoxilina e Eosina (HE) é a mais comumente usada. Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Coloração •A Hematoxilina = Cora em azul ou violeta o núcleo das células e outras estruturas ácidas. •A Eosina = Cora de o citoplasma e o colágeno de cor-de-rosa. 06/08/2019 7 Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Coloração Métodos de Estudo •Coloração •A Hematoxilina = Cora em azul ou violeta o núcleo das células e outras estruturas ácidas. •A Eosina = Cora de o citoplasma e o colágeno de cor- de-rosa. Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Coloração •Além da Hematoxilina e a Eosina, existem diversos outros tipos de corantes, como: •Orange G •Fucsina •Tricrômicos •Picro-sirius Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Montagem em lamina de vidro Métodos de Estudo •Preparação de tecidos para exame microscópico •Montagem em lamina de vidro Métodos de Estudo •Visualização ao microscópio de luz 06/08/2019 8 Métodos de Estudo Métodos de Estudo •Visualização ao microscópio de luz Métodos de Estudo •Visualização ao microscópio de luz Métodos de Estudo •Visualização ao microscópio de luz
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