Microscopia e preparação de tecidos

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MICROSCOPIA E 
PREPARAÇÃO DE TECIDOS 
HISTOLOGIA E A MICROSCOPIA 
• Histologia é o estudo das células e dos 
tecidos do corpo e de como essas 
estruturas se organizam para constituir os 
órgãos. Em razão das pequenas 
dimensões das células, seu estudo é 
realizado com auxílio de microscópios. 
 
PREPARAÇÃO DE LÂMINAS PARA EXAME 
MICROSCÓPICO 
• A pequena dimensão das células e dos componentes da matriz extracelular (MEC) 
contida entre as células faz com que a histologia dependa do uso de microscópios. 
• Pesquisas em química , fisiologia, imunologia e patologia são fundametais para um 
conhecimento adequado da biologia das células, dos tecidos e órgãos e de como 
seus vários componentes interagem na saúde e na doença. 
• Conhecer as ferramentas e os métodos de investigação também é essencial para a 
compreensão adequada da estrutura e do funciona mento das células, dos tecidos 
e órgãos. 
PREPARAÇÃO DE LÂMINAS PARA EXAME 
MICROSCÓPICO 
• O procedimento mais usado no estudo de tecidos ao microscópio de luz 
consiste na preparação de cortes histológicos. 
 
• Na maioria dos casos os tecidos e órgãos são espessos e não possibilitam 
a passagem adequada da luz para a formação de uma imagem. Por essa 
razão, antes de serem examinados ao microscópio eles devem ser fatiados 
em secções ou cortes histológicos muito finos que são colocados sobre 
lâminas de vidro. 
PREPARAÇÃO DE LÂMINAS PARA EXAME 
MICROSCÓPICO 
• Os cortes são obtidos por meio de instrumentos de grande precisão 
chamados micrótomos, mas antes os tecidos e órgãos necessitam 
passar por uma série de tratamentos. 
PREPARAÇÃO DE LÂMINAS PARA EXAME 
MICROSCÓPICO 
• 1ª Etapa: Fixação 
• Finalidade: evitar a digestão dos tecidos por enzimas existentes nas 
próprias células (autólise) ou em bactérias; endurecer os fragmentos; 
preservar em grande parte a estrutura e a composição molecular dos 
tecidos. 
• Tipos: métodos químicos ou métodos físicos. 
 
Fixadores químicos: formaldeído e glutaraleído. 
Fixadores físicos: congelamento. 
Estabilizante 
das 
moléculas. 
PREPARAÇÃO DE LÂMINAS PARA EXAME 
MICROSCÓPICO 
• 2ª etapa: Inclusão 
Para obter secções finas com o micrótomo os fragmentos de tecidos e 
órgãos devem, após a fixação, ser infiltrados com substâncias que lhes 
proporcionem uma consistência rígida. 
As substâncias mais utilizadas para esse fim são a parafina e algumas 
resinas de plástico. 
PREPARAÇÃO DE LÂMINAS PARA EXAME 
MICROSCÓPICO 
• O processo de inclusão em parafina é geralmente precedido por duas etapas: 
desidratação e clareamento. A água contida nos tecidos é inicialmente extraída 
pela passagem dos fragmentos por diversos banhos de soluções de 
concentrações crescentes de etanol (normalmente desde etanol 70% em água 
até etanol 100%). 
 
• Após a desidratação, o etanol dos fragmentos deve ser substituído por uma 
substância intermediária (geralmente um solvente orgânico) que é miscível tanto 
em etanol como no meio que foi escolhido para inclusão (parafina ou resina). 
 
• substâncias intermediárias mais comumente usadas são o xilol e o toluol. 
PREPARAÇÃO DE LÂMINAS PARA EXAME 
MICROSCÓPICO 
• Após a inclusão a 
amostra é levada 
para o micrótomo. 
PREPARAÇÃO DE LÂMINAS PARA EXAME 
MICROSCÓPICO 
• 3ª Etapa: Coloração 
• Dentre todos os corantes, a combinação de hematoxilina e eosina (HE) é a 
mais comumente utilizada. A hematoxilina cora em azul ou violeta o núcleo 
das células e outras estruturas ácidas (tais como porções do citoplasmaricas 
em RNA e a matriz extracelular da cartilagem hialina). A eosina, por outro 
lado, cora o citoplasma e o colágeno em cor-de-rosa. 
 
 
PREPARAÇÃO DE LÂMINAS PARA EXAME 
MICROSCÓPICO 
• Muitos outros corantes são usados além da HE, como os tricrómicos 
(p. ex., os corantes de Mallory e de Masson). Os tricrómicos, além de 
mostrarem muito bem o núcleo e o citoplasma, ajudam a diferenciar 
colágeno de músculo liso. 
MICROSCOPIA DE LUZ - MOC 
• Ao microscópio de luz (também chamado 
microscópio óptico), as preparações coradas 
são examinadas por iluminação que atravessa 
o espécime (transiluminação). 
 
• MOC – possui objetivas de aumento de 4, 10, 
40, 100. 
Podendo aumentar 1000x o tamanho original. 
 
 
 
MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
• As microscopias eletrônicas 
de transmissão e de 
varredura se baseiam na 
interação entre elétrons e 
componentes dos tecidos. 
MICROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA 
• Os espécimes são tratados 
com componentes 
fluorescentes, os quais 
emitem radiação. Sendo 
possível, avaliar em 
microscópios específicos 
chamados de microscópio de 
fluorescência. 
SÍNDROME DA DELEÇÃO DA REGIÃO 
22Q11.2 
 
TIPOS DE CORTES