Imunologia - Diagnóstico Clinico Técnicas imunológicas

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Diagnóstico Clinico Técnicas imunológicas
Diagnóstico utilizando técnicas imunológicas - reação ab/ag 
Todos os testes baseados na reacção ag/ab podem ser usados para detectar o ag ou o ab e existem várias tecnicas de visualização dos complexos: 
• Precipitação ( versus Aglutinação) 
• Imunofluorescência

• RIA

• ELISA 
• Imunocito ou histoquimica

• Imunoblotting, ex Western Blot 
• Citometria 
Electroforese de proteínas plasmáticas 
Anticorpos
 
 
 Policlonais
 Monoclonais
Anticorpos (primários e secundários)
Anticorpos secundários podem ser mono ou policlonais e podem ser específicos para a molécula Ig ou para a sua porção Fc ou Fab. 
Usam-se de acordo com a fonte de anticorpo primário, a classe do anticorpo primário (IgG ou IgM) e de acordo com a marcação pretendida 
 
Diagnóstico utilizando técnicas imunológicas - reação ab/ag
Todos os testes baseados na reacção ag/ab podem ser usados para detectar o ag ou o ab e existem várias técnicas de visualização dos complexos: 
• Precipitação (versus Aglutinação) 
• Imunofluorescência

• RIA

• ELISA 
• Imunocito ou histoquimica

• Imunoblotting, ex Western Blot 
• Citometria 
Electroforese de proteínas plasmáticas 
Imunoprecipitação
 
Antigénio solúvel Em agarose 
Aglutinação : antigénio insolúvel

Ex deteção hCG e Teste de Coombs 
 
Imunofluorescência (deteção do antigénio)
Ex: Toxoplasma gondi 
 
Ex deteção de autoanticorpos ( Lupus, AR..) 
 
Células Hep-2 
Diagnóstico de DA
· Detecção sérica de autoanticorpos – (ex, células Hep2) 

· Associação com outras doenças auto- imunes 

· Infiltração linfocítica nos órgãos afectados 

· Associação com determinados haplotipos HLA 

· Resposta favorável a imuno- supressores 

 
 
 
Deteção de células em apoptose
Apoptose requer: 
1. Condensação nuclear 

2. Condensação e fragmentação do citoplasma em corpos apoptóticos 

3. Fragmentação dos cromossomas 

Destina-se a:

· Moldar os tecidos na embriogénese

· Eliminar células alteradas (ex. cancro)

· Eliminar células que deixaram de ser necessárias (ex. sistema Imunológico) 

 
Alterações apoptóticas - podem levar a:

• Doenças neurodegenerativas,ex. Alzheimer 
• Cancro

• Doença auto-imune

• Patologias de origem infecciosa 
 
 
Radioimmunoassay (RIA)
· Ex :HBsAg do virus da Hepatite B 
· Doseamento de hormonas da tiroide 
 
ELISA

Enzyme-linked Immunoadsorbent Assay
Indirecta
Directa
ANTIGÉNIOANTICORPO
Sandwish
 
ANTICORPO
 
 
ELISA Indirecta
 
Elisa
 
 
Imunocitoquímica
•Pode ser feita em: 
1. Células individuais (esfregaço, cultura, suspensão) 
2. Tecidos (crio-preservados ou parafinizados) 
•Como funciona? 
1. O anticorpo reconhece uma proteína própria do tecido e sinaliza-a; 
2. Este sinal pode ser visto em campo claro ou com fluorescência. 
•Métodos de marcação mais correntes: 
1. HPR

2. fosfatase alcalina 
3. glucose oxidase 
 
Fibroblastos com marcação para uma proteína citoplasmática
1. Ab Primário;

2. Ab Secundário- biotina;

3. Peroxidase- streptavidina 
4. Substrato Cromogénio 
 
Imunocitoquimica - detecção de antigénios tumorais 
 
Anticorpos e a sua marcação
“Immunoblotting” ou Western Blot (detecção de HIV) 
 
 
 
Electroforese de proteínas plasmáticas 
 
Ex:detecção de mieloma múltiplo Control Amostra desconhecida 
Complemento 
1. Testes funcionais ( com eritrócitos)
2. Testes quantitativos (CH50, C3 ou C4) 
Infecções

1. Serologia e diagnóstico ag/ab

(ELISA, Imunoflurescência,imunocitoquimica) 
Doença autoimune 
1. Detecção sérica de autoanticorpos 
Alergias

1. Pele ( prick, patch or intradermic)
2. Diagnóstico sangue ( ELISA ou RIA para IgE)