Testes imunológicos

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Rafaela Gontijo Lima - @rafaela_gontijo 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Testes imunológicos 
 
Testes imunológicos envolvem antígenos e anticorpos. São utilizados para 
detecção e/ou quantificação de marcadores presentes em qualquer tipo de 
amostra. 
São aplicadas para pesquisa, diagnóstico e soroepidemiologia. Os 
métodos mais comuns são precipitação, aglutinação e imunoensaios. 
Reação de aglutinação direta 
A aglutinação direta utiliza de um anticorpo para pesquisar um antígeno, 
fazendo quantificação. 
Podem ser utilizadas na presença de infecção ou para diferenciação de 
espécies. 
Pode-se utilizar partículas insolúveis, como o látex, sensibilizadas com o 
anticorpo. 
Hemaglutinação – reação de aglutinação utilizando hemácias. 
Pode ser utilizada para detecção de um antígeno na parede de uma 
bactéria. 
Aglutinação passiva/indireta 
É quando se utiliza partículas insolúveis/inertes, como látex, gelatina etc. 
Essas partículas estarão sensibilizados com um dos componentes da reação. 
Imunofluorescência 
A partícula sensibilizada com o anticorpo ou antígeno será conjugada 
com uma substância fluorescente, como fluorocromo, para gerar fluorescência 
e visibilidade. 
A imunofluorescência pode ser direta, quando o corante fluorescente 
está ligada a um anticorpo primário. 
 
É utilizada para detecção direta de microrganismos em secreções urina, 
corte de tecidos etc. Faz-se identificação de subpopulações de linfócitos. Pode-
se fazer fenotipagem de células tumorais. 
A contagem de CD4 e CD8 é feita por imunofluorescência direta, com 
anticorpos específicos para cada um. 
Já na imunofluorescência indireta, irão ser utilizado dois anticorpos. 
 
Na lâmina tem-se o antígeno fixado. Se o paciente possuir o anticorpo 
contra esse antígeno, ocorrerá uma ligação do antígeno com esse anticorpo 
primário. Em seguida, adiciona-se outro anticorpo, o secundário, que será 
anticorpo contra o anticorpo utilizado, por exemplo, anti anti-HIV. 
A fluorescência é identificada através do microscópio e indica a 
formação do imunocomplexo anticorpo fixo na lâmina + anticorpo secundário. 
É o método utilizado no FTA-abs para detecção da sífilis. 
A aplicação da imunofluorescência indireta é para diagnóstico 
sorológico de doenças infecciosas; determinação do título e classe do 
anticorpo e complexos em doenças autoimunes. 
No método direto, pesquisa-se antígenos, enquanto no método indireto 
busca-se um anticorpo. 
ELISA 
ELISA significa Enzime-linked immunosorbent assay. É a busca por 
anticorpos, porém com o conjugado sendo uma enzima. 
O antígeno estará na placa. Se o anticorpo estiver presente na amostra, 
ocorrerá a ligação. Será acrescentado um segundo anticorpo, ligado à uma 
enzima. Se ocorrer a reação do antígeno + anticorpo primário, também 
ocorrerá a ligação dos anticorpos primário + secundário, que fará o substrato 
cromogênico gerar um produto corado, que irá ser visto em um espectrômetro. 
O ELISA pode ser feito para pesquisa de antígeno. Para isso, o anticorpo 
será adsorvido na placa. Será acrescentada uma amostra, que poderá ter o 
antígeno, que se ligará. O segundo anticorpo irá se fixar ao antígeno fixado ao 
anticorpo primário, gerando um imunocomplexo. Também terá a geração de 
cor. 
 
A quantidade de cor será proporcional ao grau de ligação. 
Eletroquímioluminescência 
Utiliza a emissão de luz que é modulada aplicando-se adequadamente 
potenciais de oxidação ou redução a um eletrodo imerso em soluções 
contendo moléculas emissoras de radiação. 
Quimioluminescência 
É um tipo de reação química que gera energia luminosa ao ser 
processada. 
Testes rápidos imunocromatográficos 
Pode ser feito para pesquisa de anticorpos ou antígenos, tendo seu 
complementar fixado na membrana de nitrocelulose. 
Possui as vantagens de ampliação do acesso ao diagnóstico; imediata 
intervenção se necessária; amostra oral, de soro, plasma ou sangue total. 
Reações cruzadas nos ensaios imunológicos 
Uma reação cruzada é resultado da similaridade tridimensional entre 
duas moléculas de antígenos diferentes. 
É a interação de um anticorpo com um antígeno (heterólogo) que não 
tenha sido aquele que induziu a sua formação (homólogo). Quanto maior a 
similaridade, maior a intensidade de interação. 
 
Para evitar reação cruzada, pode-se fazer dois testes por metodologias 
diferentes. 
Reação em cadeia da polimerase 
Utiliza uma sonda fluorescente. A DNA polimerase, durante a síntese, 
libera o fluorocromo, que, então, emitirá fluorescência.