Mapa mental ELISA

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ENZYME LINKED IMMUNONOSORBENT ASSAY
Teste imunoenzimático que permite a 
detecção de Ac/Ag no plasma através de 
reações enzimáticas 
Conceito 
A enzima mais comumente utilizada nestas 
provas é a peroxidase, que catalisa a reação de 
desdobramento da água oxigenada (H2O2) em 
H2O e O2. 
Tipos de Elisa 
Características 
↳ Efetuado pela primeira vez em 1971, esse teste é considerado 
de alta especificidade em diagnóstico humano ou veterinário 
↳ Um dos componentes é fixado em uma fase sólida (placa) e a 
detecção por meio de um conjugado com uma enzima 
↳ Uma doença em destaque detectada por esse exame, é a 
doença de chagas, onde detecta anticorpos que agem contra o 
parasita com a presença de um anticorpo secundário, (anti-
imunoglobulina humana produzido em animais de laboratório) 
ligados a enzimas. 
↳ A intensidade da cor fornece uma indicação da quantidade de 
antígeno ou anticorpo. 
↳ Teste para captura de antígenos 
↳ Teste para captura de anticorpos 
↳ Teste para captura de anticorpos e antígenos 
1. Calibrador 
2. Conjugado Enzimático 
3. Controle Negativo 
4. Controle positivo 
5. Lavador automático de microplacas 
6. Leitor de ELISA 
7. Microplaca com os poços revestidos com antígenos 
8. Pipetas automáticas 
9. Solução de parada 
10. Substrato 
11. Tampão da amostra 
12. Tampão de lavagem 
VANTAGENS 
Essa técnica é de alta confiabilidade e utiliza baixas quantidades de soros, 
e possibilita o processamento de muitas amostras simultaneamente. 
É de fácil acesso para uso em campo e consiste no antígeno ser 
carregado na superfície da amostra por um anticorpo. 
 A detecção é por reação enzimática, o que torna possível detectar 
quantidades pequenas de anticorpos. 
Ação simples e de baixo custo comparado a outras técnicas de 
imunodiagnóstico 
DESVANTAGENS 
Há a necessidade de mão de obra especializada 
Alguns tipos de reagentes são sensíveis e devido a exposição do sol 
ou altas temperaturas podem se degradar com facilidade 
Susceptível a erros de pipetagens, variações no tempo de incubação 
e durante as lavagens 
Vantagens e Desvantagens 
Materiais necessários 
 
 
 
 
 
 
 
 
Tipos de Elisa 
Método imunoenzimático empregado para a 
pesquisa de anticorpos 
Interpretação de resultados 
Na placa de ELISA um antígeno é aderido aos poços, a seguir coloca-se sobre os soros 
(ex. soro do paciente), na tentativa de buscar anticorpos contra esse antígeno. Se 
houver anticorpos presentes no soro haverá a formação da ligação antígeno-anticorpo, 
que será detectada pela adição de um segundo anticorpo dirigido contra imunoglobulinas 
da espécie onde se busca detectar os anticorpos (humana, no caso), a qual é ligada à 
peroxidase. 
O anticorpo anti-IgG, ligado a essa enzima é chamado de conjugado. Após a adição do 
substrato onde a reação aG-Ac ocorreu apresenta uma coloração (que depende de 
cada substrato) A intensidade da coloração irá ser diretamente proporcional a quantidade 
de anticorpo. 
Metodologia 
Aplicações 
Durante a determinação de qual individuo seja 
positivo ou negativo para a doença a ser 
pesquisada, deve ser feito um cálculo – ponto 
de corte (cut-off) para o ensaio. Acima do 
limite do cut-off, positivos e abaixo negativos 
Válido lembrar que o método não determina 
se o indivíduo se encontra doente ou não 
durante o momento do exame, apenas afirma 
se já teve contato ou não diante do agente 
causador da doença. 
A intensidade da cor é diretamente 
proporcional à concentração de 
anticorpos na amostra a ser pesquisada 
Não se deve detectar IGm por esta técnica 
devido á ação do fator reumatoide 
Aplicações tanto na medicina humana quanto na 
medicina veterinária 
Diagnóstico sorológico de doenças 
infectocontagiosas, onde a detecção de IGg, IGa 
ou IGe sejam significativas, exemplo: doenças de 
chagas e AIDS 
Na medicina veterinária, são utilizadas em 
diagnósticos de linfadenite, caseisa e leishmaniose 
 
 
 
 
 
 
 
 
Tipos de Elisa 
Método imunoenzimático simples empregado 
em captura de antígenos 
Interpretação de resultados 
Na fase sólida, são fixados a placa anticorpos específicos, será adicionado também uma 
solução contendo o Ag a ser pesquisado, e se estiver presente, se liga aos Ac presente 
nos poços. São realizadas lavagens para retirar o antígeno não capturado e o conjugado 
para o antígeno a ser procurado, uma nova lavagem será feita para retirar todo 
conjugado livre, enquanto o cromógeno e o substrato são adicionados, um atento, caso 
o cromógeno seja oxidado pela ação da enzima, haverá a mudança da cor. 
Metodologia 
Aplicações 
Para apuração de um teste quantitativo é 
necessário que haja a construção de uma curva 
com os valores de densidade obtidos a partir 
de reações dos padrões com concentrações 
conhecidas do antígeno a ser dosado, servindo 
como comparação para deduzir as quantidades 
de Ag nas soluções – teste. 
Aplicações tanto na medicina humana quanto na 
medicina veterinária 
Utilizado em dosagem de hormônios, marcadores 
tumorais e outras proteínas séricas, bem como 
para a detecção de antígenos virais e de outros 
patógenos nas fezes, na urina e em secreções. 
Exemplos: Teste de Gravidez (teste de 
detecção da gonadotropina coriônica humana 
(HCG) no soro). 
Na medicina veterinária, são aplicados durante 
a triagem na indústria de alimentos (pesquisa 
de patógenose contaminantes nos alimentos) 
A intensidade da cor é diretamente 
proporcional à concentração de Ag da 
amostra pesquisada. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Tipos de Elisa 
Método imunoenzimático simples empregado 
em captura de antígenos 
Interpretação de resultados Aplicações 
Em casos onde há a competição com 
anticorpo marcado, quanto mais antígenos 
presentes na amostra a ser pesquisada, os Ag 
não marcados se ligam aos anticorpos, e 
consequentemente terá menos Ac disponíveis 
para se ligar ao Ag marcado com a enzima. 
Na competição com antígeno marcado, após o 
processo, quanto menos antígeno estiver 
presente na amostra maior é a quantidade de 
anticorpos conjugados com a enzima ligados na 
fase sólida. 
 
 
Aplicações tanto na medicina humana quanto na 
medicina veterinária 
Utilizados em dosagem de hormônios, 
marcadores tumorais e outras proteínas séricas. 
Diagnóstico sorológico de algumas doenças, 
Exemplo:T3, T4, testosterona, estradiol, 
progesterona. 
Na medicina veterinária, são aplicados na detecção 
sorológica de herpesvírus bovino tipo I 
A intensidade da cor é 
INVERSAMENTE proporcional à 
concentração de antígeno ou 
anticorpo da amostra. 
Competição com anticorpo marcado Competição com antígeno marcado 
São adicionados anticorpos aos poços da placa, adicionamos ao mesmo 
momento a amostra do paciente, e em seguida será realizada a lavagem para 
retirar os Ac livres, após a indução da solução com o Ag a ser pesquisado e 
de uma outra solução contendo Ag marcado (conjugado) no mesmo poço. 
Os antígenos competem entre si pelo sitio de ligação com o Ac, e o que 
estiver em maior concentração se ligará a mais anticorpos. É feita a lavagem 
para retirar os antígenos não capturados e a adição do cromógeno e o 
substrato. Caso o conjugado tenha se ligado aos Ac da placa, irá ocorrer a 
reação enzimática, havendo o desenvolvimento da cor. (1) 
Segue o mesmo princípio da anterior, no entanto, durante a fase sólida 
são adicionados o antígeno a ser pesquisado, são inseridos a amostra do 
paciente juntamente com anticorpo conjugado com a enzima, em 
sequência será realizado a lavagem (II) 
Metodologia 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Tipos de Elisa 
Método imunoenzimático simples empregado 
em captura de anticorpos 
Interpretação de resultados Aplicações 
Sendo capaz de identificar infecções na fase 
aguda. Nos dois métodos, como resultado, 
caso haja a reação positiva com a presença 
de Ac, haverá uma mudança visível de 
coloração, indicando que o indivíduo possui 
IGm especifico para o Ag testado. 
 
Intensidade da cor diretamente 
proporcional à concentraçãode 
Ac 
Captura de IGm com Ag marcado Captura de IGm com Ac marcado 
Na fase sólida, são adicionados anticorpos anti IgM e a amostra do indivíduo a ser 
pesquisado, caso tenha IgM presente há uma formação de um complexo na placa, 
em sequência, a lavagem para retirar o Ac não capturado e o antígeno especifico 
marcado com uma enzima (conjugado) para o anticorpo a ser pesquisado. A 
adição de um cromógeno e um substrato, caso o cromógeno seja oxidado há o 
desenvolvimento da cor. 
Semelhante ao anterior, será seguido os mesmos passos, a adição dos anticorpos anti 
IgM, a amostra do indivíduo e também o antígeno que nesse caso não conjugado com 
enzima, caso haja a presença do anticorpo na amostra, o Ag se associa e assim 
adicionamos um anticorpo especifico marcado, havendo a ligação, será adicionado o 
substrato onde será observado um desenvolvimento de cor. 
 
Metodologia 
Aplicações tanto na medicina humana quanto na 
medicina veterinária 
Usado para a detecção de anticorpos da classe IgM 
contra os mais diversos antígenos (virais, 
bacterianos, de protozoários) em todas as doenças 
em que seja importante identificar o seu recente 
aparecimento. Apesar de ser mais utilizado para a 
detecção de IgM, o ELISA de Captura também 
pode ser utilizado para a dosagem de outros Acs. 
Exemplos: diagnóstico de rubéola, toxoplasmose, 
herpesvírus e citomegalia, em suas fases agudas, 
da gestante (complexo TORCH).