AULA 14 - Testes de Diagnóstico para Doenças Virais

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Testes de Diagnóstico para 
Doenças Virais
Prof. Msc. Anaque Pires
Imunologia Clínica
Complementando a aula passada...
Sensibilidade VS Especificidade
Como saber escolher um teste?
Isso vai depender do seu objetivo:
 Rastreamento (TRIAGEM): ↑ Sensibilidade
 Confirmatório: ↑ Especificidade
 Um teste de diagnóstico: determinar presençaou ausência da doença 
quando um individuo apresenta sinais ou sintomas da doença.
 Um teste de triagem: identifica indivíduos Assintomáticos 
que podem ter a doença
 O teste diagnóstico é realizado após um teste de triagem positivo 
para estabelecer um diagnóstico definitivo
TIPOS DE TESTES
Exemplo de testes de Triagem
 Teste do pezinho em recém-nascidos para fenilcetonúria.
 Glicemia de jejum para diabetes.
 Pressão arterial para hipertensão.
 Mamografia para câncer de mama.
 Exame de Papanicolaou para displasia cervical ou câncer do 
colo do útero.
 Testes rápidos para HIV, Sífilis, Hepatites, etc...
Sensibilidade Especificidade
Conceito Identifica osDOENTES Identifica os SAUDÁVEIS
Fórmula Verdadeiro
Positivo/doente
Verdadeiro
Negativo/saudáveis
Pode ocasionar Falso positivo Falso Negativo
É útil para Triagem Confirmação
Melhor resultado Negativo Positivo
Uso dos testes
• Sensíveis
 Para doença perigosa ougrave, 
mas tratável.
 Para excluirdoenças
(rastreamento).
 Probabilidade da doença é baixa 
mas o objetivo é excluir adoença
–banco de sangue,ex. 
periódicos
 Dá poucos FalsosNegativos.
Específicos
• Quando um resultado FP pode
ocasionar danos físicos, morais
ou financeiros aopaciente.
• Quando o tratamento Requer 
medidas mais agressivas ou 
invasivas, como uma 
quimioterapia oucirurgia.
• Dá poucos FalsosPositivos.
Uso dos testes
• Em rastreamento (screening), quando se quer 
afastar um diagnóstico teste sensível 
(se der negativo terá pouca chance de ser FN).
• Testeconfirmatório teste mais 
especifico (se der positivo tem grandechance 
de ser VP).
Uso dos testes
O não uso DISSO, é que faz a maioria das 
pessoas buscarem realizar TESTES DE 
DIAGNÓSTICO para doenças virais.
 Desde a década de 1980, quando os primeiros testes para o HIV foram
desenvolvidos, muita coisa mudou, principalmente em relação à janela
imunológica, que inicialmente era de até 6 meses e hoje caiu para apenas 4
semanas.
 Cerca de um terço dos indivíduos contaminados pelo vírus HIV não sabem que
são soropositivos, pois nunca realizaram o teste para o diagnóstico, chamado
sorologia para o HIV.
 Isso corresponde a mais de 10 milhões de pessoas em todo o mundo.
 Anualmente, entre 2,5 e 3 milhões de novas pessoas se infectam com o vírus.
Muitas delas, levam anos até descobrirem que estão contaminadas.
HIV: Vírus da Imunodeficiência Humana.
AIDS: Síndrome da Imunodeficiência Adquirida.
Vírus HIV
 O vírus de imunodeficiência humana é classificado em dois tipos
principais: HIV-1 e HIV-2.
 HIV-1 foi descoberto primeiramente e mais predominante
mundialmente, enquanto o HIV-2 é menos patogênico e é limitado na
maior parte a África ocidental.
 Quando dizemos geralmente o HIV, estamos referindo HIV-1.
 As diferenças fundamentais entre as infecções HIV-1 e HIV-2 encontram-
se no mecanismo da patogênese retroviral, que não é inteiramente clara
ainda.
Vírus HIV
 HIV-1 e HIV-2 têm muitas similaridades, incluindo seus caminhos intracelulares
de réplica, modos de transmissão e efeitos clínicos, conduzindo à AIDS.
 Contudo, HIV-2 é menos provável de progredir para a AIDS devido a sua mais
baixa transmissibilidade.
 Assim, os indivíduos contaminados por HIV-2 permanecem não-progressivos
durante um longo período do tempo, enquanto os pacientes contaminados pelo
HIV-1 tem uma progressão mais rápida.
 As infecções HIV-2 são caracterizadas por taxas mais baixas de cargas virais
(10.000 copias/mL) comparados a (milhões de copias/mL) de HIV-1.
Vírus HIV
Vírus HIV
Estrutura do HIV-1
PROTEÍNA gp 160
Hepatites Virais
 A hepatite é uma doença viral infecciosa, que ataca o fígado e pode ser
aguda ou crônica.
 Existem cinco tipos identificados de hepatite: A, B, C, D (Delta) e E.
 As dos tipos A e E só se manifestam de forma aguda, e o paciente elimina
o vírus do organismo depois da crise.
 Já os tipos B, C e D podem se tornar crônicos e pedem mais atenção dos
órgãos de saúde no mundo.
 Segundo a Organização Mundial da Saúde, 2 bilhões de pessoas no
mundo já tiveram contato com o vírus da hepatite B, dos quais mais de 300
milhões tornaram-se pacientes crônicos, enquanto a hepatite C atinge 170
milhões.
Hepatite B
 Exame Anti-HBs: serve para identificar anticorpos contra a hepatite B.
 Portanto, quando o anti-HBs dá positivo, significa que a pessoa já está
imune ao vírus da hepatite B.
 Isso geralmente acontece após a vacinação ou cura da doença.
O anti-HBs é o anticorpo que o sistema imunológico produz contra o
vírus da hepatite B, mais especificamente contra uma proteína
localizada na superfície do vírus, conhecida como HBsAg.
 O Anti-HBs não está presente em pessoas que ainda estão doentes.
 Por isso, o objetivo do exame não é saber se o paciente está com hepatite
B, mas verificar se a doença já foi tratada e curada.
 Para detectar a hepatite B é feito o exame de HBsAg. Em indivíduos
doentes, o HBsAg dá positivo.
 Se o anti-HBs der positivo e o HBsAg negativo, significa que a pessoa já
possui anticorpos contra a hepatite B e o vírus não está circulando mais na
corrente sanguínea, ou seja, está curada.
Portanto, o exame anti-HBs positivo indica que o paciente já está
imune ao vírus da hepatite B, seja por ter ficado doente ou ter
tomado a vacina.
Hepatite B
 Exame Anti-HCV: serve para detectar a Hepatite C.
 O resultado do exame anti-HCV pode ser positivo (reagente) ou negativo
(não reagente).
Hepatite C
 Quando o é resultado positivo (reagente), deve-se realizar outro exame
mais sensível para detectar o RNA do vírus no sangue.
 Quando esse segundo resultado é negativo, indica que a pessoa já teve
contato previamente com o vírus e curou-se.
 Quando o resultado desse segundo exame é positivo, há grande indicativo
de presença da doença Hepatite C.
Hepatite C
 Quando o resultado do anti-HCV é negativo (não reagente) indica que a
pessoa não teve contato com o vírus da Hepatite C.
 Em torno de 20% das pessoas que entraram em contato com o vírus da
Hepatite C curam, enquanto que cerca de 80% das pessoas desenvolvem a
doença crônica.
Por esta razão... O anti-HCV IgM, não pode ser usado como diagnóstico
de fase aguda da infecção, uma vez que ele continua positivo em cerca
de 70% dos pacientes durante a fase crônica da doença.
Testes Diagnósticos
Existem dos mais variados tipos, marcas e etc:
 Imunocromatografia;
 ELISA;
 Imunofluorescência;
 Citometria de Fluxo;
 Western Blot
 Etc...
Vídeo
ELISA
Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay
 Qualitativo: positivo ounegativo.
 Quantitativo: espectofotometria para medir a concentração doanticorpo.
Ensaio Imunoadsorvente ligado à enzima
Definição
• ELISA consiste em um dos métodos imunológicos
desenvolvidos para quantificar a concentração de
antígenos e anticorpos, sendo largamente utilizado para o
diagnóstico de diversas doenças;
• Se baseia na detecção de anticorpos ou de antígenos
específicos, através da reação anticorpo-antígeno;
Tornou-se uma técnica padronizada para pesquisa
e aplicações clínicas por apresentar grande
sensibilidade e especificidade.
Como funciona a reação?
Baseia-se na imobilização de um dos
componentes(Ag ou Ac) em fase
sólida , e na utilização de um
conjugado , que também pode ser
um Ag ou Imunoglonulina, ligado a
uma enzima.
Utiliza-se uma base sólida (placa de poliestireno com 96 poços dispostos em
12 fileiras verticais, cada uma com 8 poços) na qual Ag/Ac irão se ligar
através de interações hidrofóbicas. (corresponde a fase sólida)
Como funciona a reação?
A enzima reage com um substrato,
dessa forma levando a oxidaçãode
um cromógeno incolor, o qual então
desenvolverá coloração;
A mudança de cor é monitorada visualmente ou por
meio de espectrofotômetro. A coloração é dependente
da concentração de Ag/Ac pesquisados
Equipamentos e
Materiais Necessários
 Placa de ELISA (96 Poços- Alta ligação)
 Pipetas automáticas
 Leitor de ELISA(espectrofotômetro)
 Reagentes e Soluções ( Anticorpos/Antígeno, Enzima, Solução
padrão, Solução de lavagem, Solução de Parada).
Tipos de ELISA
 ELISA Indireto: Utilizado para detecção de anticorpos.
 ELISA Direto ou Sanduiche: Utilizado para detecção de antígenos.
 ELISA Competitivo: Mais utilizado para detecção de antígenos:
ELISA
ELISA de Captura ou Sanduiche:
Sensibilização
da placa
Ac de Captura
Adição do 
Conjugado
Ac de Detecção
Adição do
Substrato
Sav-HRP e TMB
Bloqueio
Adição da 
Amostra
(12-18 horas) 
(1 hora) 
(2 horas) 
(15-30 min
no escuro) 
(1 hora) 
WESTENR BLOT
WESTENR BLOT
WESTENR BLOT
WESTENR BLOT
WESTENR BLOT
Vamos ver se aprendeu?
Dois especialistas estudaram a qualidade de um teste
diagnóstico de metástase de carcinoma de fígado, obtendo os
resultados sintetizados na Tabela a seguir. Um total de 150
pacientes foram submetidos ao teste.
A) 90% e 87,5%, respectivamente.
B) 92,5% e 90%, respectivamente.
C) 80% e 78,9%, respectivamente.
D) 76,4% e 68,2%, respectivamente.
E) 85,2% e 83,1%, respectivamente.
DOENTES NÃO DOENTES
POSITIVO 52 15
NEGATIVO 9 74
Qual a sensibilidade e especificidade do teste?
AOP, 26 anos, participou da Exposaúde promovida pelos alunos do 8º
período de farmácia da UNINASSAU-LF. Realizou teste de triagem para HIV
(teste rápido), o qual o resultado foi (Positivo). Posteriormente, precisou
realizar outro teste chamado Imunoblot para confirmar o diagnóstico. O
resultado do Imunoblot foi o seguinte:
1 2 3 4 5 C
Linha 1- gp 36
Linha 2- gp 160
Linha 3- gp 120
Linha 4- gp 140
Linha 5- p24 
Linha C - Controle
Assinale a alternativa correta:
A) AOP é reagente para HIV-1 e para HIV-2.
B) AOP é reagente apenas para HIV-1.
C) AOP é reagente apenas para HIV-2.
D) AOP não é reagente para HIV-1 nem para HIV-2.
E) O teste não é confiável por erro no controle.
Vamos ver se aprendeu?
Vamos ver se aprendeu?
Qual o anticorpo está presente em pessoas que se recuperaram ou foram
vacinadas contra a Hepetite B?
O anti-HCV IgM é o meio mais eficaz de diagnóstico da fase aguda da
infecção pelo vírus da Hepatite C, verdadeiro ou falso?
Até semana
que vem...