Protocolo Meio de Cultura Biologia

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UNIVERSIDADE DE BARRA MANSA
Curso: Biologia
Disciplina: Cultura de Tecidos I
Período: 7°
Professor: Leandro Amado 
Laboratório: Microbiologia 
Data: 27/04/2020
Aluna: Beatriz Soares Ávila 
RA: 20171000021
ASSUNTO: Preparo do Meio de Cultura
INTRODUÇÃO: 
Meios de cultura são composições de substâncias que fornecem nutrientes necessários para o desenvolvimento de microrganismos. Sendo favorecido o crescimento, é possível a identificação desses organismos através das suas atividades bioquímicas e metabólicas. Além dos nutrientes, existem condições ambientais para o crescimento microbiano, como temperatura, pH, umidade, presença ou não de oxigênio (condição aeróbica e anaeróbica). 
Os meios de cultura são classificados de acordo com seu estado físico, podendo ser sólido, quando possui agentes solidificantes como o ágar; semissólido, quando a consistência de ágar e/ou gelatina é intermediária, ou líquido, quando não possui solidificante, caracterizando-se como caldo. 
OBJETIVO DA PRÁTICA: 
Demonstrar as técnicas de preparo do meio de cultura vegetal in vitro.
MATERIAL REQUERIDO:
Materiais:
- 8 Tubos de ensaio
- Placas de Petri
- 2 Becker
- 1 Proveta de 500ml
- 1 Proveta de 100ml 
- 1 Balão volumétrico 
- 2 Erlenmeyer
- Vidros de relógio 
- Bastões de vidro 
- Espátula 
- Pipeta
Reagentes:
- 8g Sacarose
- 0,4g Fosfato de Potássio de Básico 
- 0,2g Sulfato de Magnésio 
- 0,2g Cloreto de Sódio
- 0,04g Sulfato Ferroso 
- 0,005g Molibidato de Sódio 
- 0,8g Carbonato de Sódio
PROCEDIMENTOS:
Pesagem dos materiais 
	 Primeiro procedimento: Realizar a pesagem dos materiais utilizando uma balança e um vidro de relógio. Após colocar o vidro de relógio na balança realize a Tara da balança para dar início a pesagem dos materiais. Para produzir 400 ml de meio de cultura Jensen deve ser pesado 0,8g de Sacarose, 0,4g de Fosfato de Potássio de Básico, 0,2g de Sulfato de Magnésio, 0,2g de Cloreto de Sódio, 0,04 de Sulfato Ferroso e 0,8g de Carbonato de Sódio. Para a pesagem de cada reagente deve ser utilizado uma espátula diferente. Após a pesagem dos materiais, eles devem ser colocados em um Becker.
Preparo de solução mãe 
	O preparo de solução mãe é realizado através da diluição de 0,005g de Molibidato de Sódio em um litro de água destilada. 
Preparo do Meio de Cultura
	O primeiro passo é medir 400ml de água destilada na proveta de 500ml e depois adicionar essa água ao Becker com os insumos pesados anteriormente. Após isso, utilizando uma pipeta, adicionar 200 micro ml da solução mãe preparada anteriormente. Com um bastão de vidro, mexer a solução até dissolver todos os insumos. Utilizando uma proveta de 100ml, colocar em cada Erlenmeyer 100ml do meio de cultura produzido, formando assim os meios de cultura líquidos.
	O próximo passo é produzir o meio de cultura sólido, para isso é necessário pesar 3g de ágar, utilizando novamente a balança e o vidro de relógio. Após pesar o ágar, adicioná-lo aos 200ml do meio de cultura restante no Becker e utilizar um bastão de vidro para dissolver o ágar na solução. Após a solução estar pronta, utilizando uma pipeta, colocar em cada tubo de ensaio 10ml do meio de cultura produzido. O meio de cultura restante deve ser colocado no balão volumétrico. 
Os meios de cultura devem ser esterilizados na autoclave por 15 min a 121°C e 1atm. Após a esterilização os meios de cultura estarão prontos para utilização.
O último passo é verter o meio de cultura do balão volumétrico nas placas de Petri, cerca de 15ml em cada placa. Elas devem ser mantidas na geladeira até serem utilizadas para o procedimento.